Спосіб отримання екстракту рогів сайги.
Винахід відноситься до медицини та медичної промисловості, а саме до способів одержання екстракту рогів сайги. Метою винаходу є інтенсифікація способу. Поставлена мета досягається тим, що як сировина додатково використовують середній шар рогів, сировину подрібнюють на дезінтеграторі до порошкоподібного стану, екстракцію проводять дистильованою водою при 20-25°С протягом хв. при співвідношенні сировина: розчинник 1:50 з одночасним впливом ультразвуком. 2 іл., 4 табл.
РЕСПУБЛІК ()9) (1 I ) (5I)5 А 61 К 35/32
ВІДОМСТВО СРСР (ГОСПАТЕНТ СРСР) ОПИС ВИНАХОДУ
До СВІДОЦТВОМ (21) 4917726/14 (22) 10.12.90 (46) 15.05.93. Бюл. М 18 (75) М.А,Алієв, В.П.Верболович, Ю.К.Підгорний, Л.M,Ïîäãîðíàÿ, Ю.П.Єрьомін, С.М. Верменічев, Г.А.Денісов, Л.П, Зарогацький та В.А.Загородній (56) Нестеренко І.Ф., Брехман І,І. та ін.
Фармакологічні дослідження препарату із рогів сайги. Владивосток, 1984. (54) СПОСІБ ОТРИМАННЯ ЕКСТРАКТУ РОГІВ САЙГИ
Винахід відноситься до біологічної та медичної хімії та стосується отримання біологічно активних речовин, що мають фармакологічну дію.
Метою цього винаходу є розширення сировинної бази, яка використовується для отримання біологічно активних сполук, підвищення виходу продукту та збільшення його активності. Для розширення сировинної бази пропонується використовувати роги сайги, а препарат, який одержують цим способом, назвати сайгорином.
В експериментах, що дозволяють оцінити резервні можливості організму за часом плавання тварин було встановлено, що екстракт із рогів сайги надавав стимулюючу дію (табл.1). Метод плавання і подібні до нього є виключно трудомісткими. При відпрацюванні методу одержання сайгорину буловстановлено наявність препарату донорних властивостей, тобто. наявність з'єднань с. рухомим атомом водню. Висока біологічна активність сполук з рухомим атомом (57) Винахід відноситься до медицини і медичної промисловості, а саме до способів отримання екстракту рогів сайги.
Метою винаходу є інтенсифікація способу, Поставлена мета досягається тим, що в якості сировини додатково використовують середній шар рогів, подрібнюють сировину на дезінтеграторі до порошкоподібного стану. екстракцію проводять дистильованою водою при 20-25°С протягом 5-7 хв. при співвідношенні сировину розчинник 1:50 з одночасним впливом ультразвуком. 2 іл., 4 табл. ь»
1 дорода обумовлена їх відновними властивостями, До відомих сполук, що мають таку здатність, можна віднести глутатіон, вільна SH-група якого обумовлює його властивості як внут- . римолекулярного відновника і у зв'язку з цим його широка участь у метаболізмі.
З присутністю рухомого водню пов'язана біологічна роль НАДН та НАДФН.
Донорами водню виступає ряд відновлених форм органічних сполук, Q наприклад аскорбінова кислота, що виконує роль природного антиоксиданту та ін. С) встановлено, що між тривалістю плавання тварин і донорними властивостями введеного препарату є лінійна залежність (фіг.1) , у зв'язку з чим надалі при відпрацюванні способу пів-. Вчення сайгоріна контроль за його активністю здійснювали за цим показником.
На фіг,1 зображено залежність часу плавання мишей від кількості введеного препарату, що оцінюється за наявністю донорних властивостей; на фіг.2 вЂ" залежність виходу прс)дукту від умов екстракції, де
1 вЂ" традиційні методи екстракції; 2вЂ" методдезінтеграції зі зсувом; 3 вЂ" дезінтеграція зі зсувом + вплив передгіперзвуку.
Для визначення донорних властивостей існують різні методи, проте в силу цілого ряду властивих їм недоліків нами використаний власний спосіб визначення цього показника. Для цього в кювету люмінометра вносять 250 мкл і 0,1 M 4 осфатного буфера, рН 8,0; 50 мкл 5 10 М розчину пероксидази хрону та поміщають у кюветний блок приладу. Реакцію запускають введенням 200 мкл 5 10 3 M розчину люмінолу, що містить 7 10 М переїси водню і на стрічці самописця записують кінетику реакції аж до її повного завершення, Площу під кінетичною кривою приймають еа 100 . Реєструють кінетику реакції у присутності досліджуваних проб, визначають площі під кінетичними кривими і за величиною їхнього зниження судять про активність досліджуваних проб. За одиницю активності прийнято кількість. препарату, що викликає 50 $ інгібування свічення, що виникає в реакції пероксидазного окиснення люмінолу.
Проведені дослідження показали, що біологічну активність мають тільки чохол і середній шар рогів, на відміну від ядра, де такі властивості не виявлені (табл.2), У зв'язку з цим надалі для отримання сайгорину беруть тільки чохол і середній шар. що дозволяє зменшити кількість домішок в цільовому продукті, приблизно на 30 знизити кількість сировини, що переробляється в подальшому, підвищити його питому активність.
Для досить повної та ефективної екстракції необхідне поєднання кількох факторів: правильний вибір екстрагентів, ступінь подрібнення, умови екстракції (температура, час тощо).
У прототипі при аналізі попередніх методів отримання препарату зазначається, що просте іемельчення пантів з багаторазовим емульгуванням незабезпечує ні високої якості препарату, ні його задовільного виходу. Для підвищення виходу цільового продукту в прототипі запропоновано перед подрібненням проводити обробку пантів гострим паром.
10 рахунок цього на 18,7 підвищити їхню біологічну активність.
Проведений аналіз недоліків, властивих аналогам і прототипу призводить до заключення, що для підвищення виходу
15 продукту та збільшення активності препарату (а отже, підвищення ефективності виробництва) необхідно: 1) покращення технології подрібнення; 2) використання зон. що володіють біологічною активністю. 3) застосування щадних режимів екстракції.
З метою підвищення виходу продукту
1 було розроблено спосіб дезінтеграції тканини рогів до протоплазми. Для цього сировина
25 розтирають до порошкообраеного стану в зазорі між поверхнями охоплювального та охоплюваного тіл, останньому з яких надають прецесійне коливання, що забезпечує питомий тиск, З0 дорівнює межі міцності клітин оброблюваного шару рогів, Поєднання стиснення з екстракцією після одночасним зсувом створює умови для. Для підтвердження доцільності різниці такого підходу був проведений порівняльний аналіз ефективності традиційних методів подрібнення (удар. тиск, стругання і т.п.) і використаного методу дезінтеграції. З метою збереження
40 активності препарату екстракцію проводять при температурі 20-25ОС, використовуючи для перемішування магнітну мішалку.
Для спрощення та здешевлення процесу була спроба замінити эта45 нол дистильованою водою.
Причиною та обґрунтуванням цього стало те, що в ряді розчинників для хроматографії дистильована вода є більш полярною сполукою. Ре50Зультати порівняльного аналізу представлені в табл.З. Видно, що водні екстракти при тому самому обсязі проби більшою мірою знижують світлосуму світіння (тобто містять більшу кількість
55 активної речовини) як для чохла, так і для середнього шару. Нами проведено розрахунок кількості екстракту, який необхідний зниження світлосуми свічення íà 50 (Vsp). Як видно иэ табл.2,водного екстракту з чохла та середнього шару потрібно в 1,6 та 2,3
Залежність часу плавання мишей від кількості введеного препарату в рази менше, ніж спиртового, тобто в стільки ж разів відповідно ефективніше екстракція дистильованою водою в даних умовах, У зв'язку з цим можна вважати, що дана методика екстракції значно 5 дешевше і економічно виправдана.
При випромінюванні залежності виходу продукту від часу екстракції (фіг,2) видно, що використання описаного методу дезінтеграції сировини в порівнянні з традиційним дозволяє в 1,8-2,0 рази підвищити вихід цільового продукту при більш ніж десятикратному скороченні часу екстракції, заміні етанолу широко доступною дистильованою водою, проведення процесу 15 вилучення при температурі 20вЂ"
25 С, Враховуючи дані, що свідчать про підвищення біологічної активності пантів, що консервуються, при скороченні 20 термінів термообробки було досліджено вплив 60-хвилинної інкубації отриманого екстракту при 80 С, яке виявило зниження активності препарату на
З метою повного вилучення цільового продукту з сировини проведено вплив на систему сировину-розчинник у процесі екстракції ультразвуковими коливаннями мГц-діапазону (F = 2,64 мГц, 1-30
0,6 вЂ" 1,0 вт/см, Т = 600 вЂ" 900 с), що дозволило підвищити вихід продукту додатково на 10 вЂ" 12% (фіг.2, крива 3),Екстракцію проводять при співвідношенні сировину; розчинник (KzO) 1; 50 (вага 35 сировини в гр: об'єм води в мл), Це співвідношення було обрано при обробці методу як оптимальне, що дозволяє витягти 9096 цільового продукту, Подальше збільшення об'єму екстрагента, не приводячи 40 істотному збільшенню виходу продукту, ускладнює подальшу роботу, оскільки на наступних етапах виділення доводиться мати справу з великими обсягами рідини, зменшення кількості Н 45 нижче зазначеного співвідношення веде до швидкого зростання втрат активної речовини на етапі екстракції, Перемішування здійснюють на мішалці будь-якого типу при кімнатній температурі протягом 10-15 хв, після чого рідину центрифугують при
4500 g протягом 10 хв. Надосадову рідину зливають, піддають ліофільному сушінню і збирають цільовий продукт, Ліофілізація не призводила до зниження активності, що було встановлено при зіставленні активності речовини до та після процесу ліофілізації (табл.4).
Спосіб здійснюють наступним чином (конкретний приклад):
З вихідної сировини (роги сайги) видаляють серцевину (ядро). Решту розтирають до порошкоподібного стану, як зазначено в описі на стор,5. Десять грам порошку заливають 500 мл дистильованої води, поміщають на магнітну мішалку, зверху поміщають випромінювач генератора УЗ-Коливань (F=2,64м Гц, (=0,7
Вт/см ) таким чином, щоб поверхня випромінювача торкалася води, проводять процес екстракції 10-15 хв, центрифугують 10 хв при 4500 g, надосадову рідину збирають і ліофілізації, отримують 2,5-3,5 г цільового продукту.
Спосіб отримання екстракту рогів сайги, що включає подрібнення зовнішнього шару рогів, екстракцію з подальшим відділенням осаду, який відрізняється тим, що, з метою інтенсифікації способу,як сировину додатково використовують середній шар рогів, сировину подрібнюють на дезінтеграторі до порошкоподібного стану, екстракцію проводять дистильованою водою при 20-25 °C протягом 5-8 хв при співвідношенні сировина; вода 1:50 з одночасним впливом ультразвуку.
Активність препарату за світлосумою придушення світіння 7;
Залежність активності екстракту від виду екстрагента
Вплив ліофільної сушки на активність препарату
Активність та епа ата, Е
Водний розчин препарату
Після ліофільної сушки
t814900, вл-Ь арепараяп, ed.
140 І дрея мада(ьУ, мк
Ts cmpueruu, sue.
Упорядник Л. Конюхова
Техред М.Моргентал Коректор В, Петраш
Редактор. Замовлення 1600 Тираж Передплатне
ВНДІПД Державного комітету з винаходів та відкриття при ДКНТ СРСР
113035, Москва, Ж-35, Рауська наб. 4/5
Виробничо-видавничий комбінат "Патент", м. Ужгород, вул. Гагаріна. 101