Спосіб зневоднення гістологічного матеріалу
Використання: у галузі медицини, зокрема у гістології. Сутність винаходу: тваринну тканину проводять по спиртах гістологічної батареї, що містить мідний купорос, причому обробку проводять у паперових касетах, а мідний купорос поміщають у ткані мішки та розміщують навколо касет, а спирт використовують в об'ємному співвідношенні до тваринної тканини 2:1. Спосіб дозволяє скоротити витрату реактивів за збереження якості гістологічного препарату.
Винахід відноситься до медицини, а саме до гістології і стосується способів зневоднення гістологічного матеріалу.
Відомий спосіб зневоднення тваринних тканин (1) шляхом витримування їх у двох порціях 96 o і абсолютного спирту по 24 год у кожній.
Спосіб передбачає наявність двох ємностей об'ємом до 200 мл, на дно яких насипають мідний купорос шаром 1-2 см і закривають фільтрувальним папером. В ємність заливають по 100 мл спирту 96 o попередньо підготовленого, абсолютного і використовують для зневоднення 15 20 шматочків тканини. Витрата спирту становить близько 5 об'ємів на 1 об'єм тканини.
Недоліками даного способу є велика витрата реактивів, зокрема спирту, і тривалість процедури попередньої підготовки абсолютного спирту.
Завдання пропонованого винаходу - економне витрачання реактивів при збереженні якості гістологічного препарату.
Визначений у задачі технічний результат винаходу досягається за рахунок реалізації наступних прийомів способу: зневоднення тканини здійснюють, помістивши її в паперову касету; мідний купорос упаковують у ткані мішечки, укладають на дно ємності й навколо паперових касет, у своїй витрата спирту становить 2 обсягу одного обсягу тканини.
Скорочення обсягу спирту за збереження йогозневоднюючої властивості можливо з допомогою 1. виконання обробки паперових касетах, коли папір сорбує він значну (основну) частина жирів і де вони потрапляють у спирт, тобто. проведення обробки у паперових касетах продовжує робочу здатність спиртів; 2. приміщення мідного купоросу в ткані мішки, коли, по-перше, збільшується площа контакту спирту з мідним купоросом і приєднання води до купоросу йде активніше; по-друге, ткані мішки сорбують частину жирів, які не осіли на паперовій касеті.
3. оптимальне робоче співвідношення обсягів спирту та тканини 2:1 встановлено експериментальним шляхом: нарощування кількості одночасно оброблюваних шматочків тканини проводилося поступово під контролем якості спиртів, запропонована технологія обробки дозволила скоротити співвідношення обсягів з 5:1 до 2:1 за збереження якості гістологічного препарату.
Подальше нарощування кількості шматочків, що одночасно обробляються, призводить до швидкого помутніння спирту і зниження якості гістологічного зразка, тобто. співвідношення 2:1 є оптимальним.
Таким чином, перелічені ознаки винаходу дозволяють досягти бажаного технічного результату економної витрати спирту на одиницю обсягу оброблюваної тваринної тканини і є істотним для даного винаходу.
Спосіб виконується в такий спосіб.
Перед проведенням етапу гістологічної обробки зневоднення шматочки тканини, попередньо оброблені фіксуючим складом, поміщають в гістологічні касети будь-якої відомої конструкції (2), але виконані з паперу. Для однієї проводки беруть 600700 шматочків тканини об'ємом по 1 3 мл. Касети розміщують у ємності 1,2 1,4 л. Попередньо по дну ємності викладають мішки з мідним зневоднюючі патрони.купоросом із розрахунку 1 обсяг купоросу на 4 5 обсягів спирту.
Потім ємність заливають спиртом 96 o . Витрата спирту дорівнює 2 об'єму спирту до 1 об'єму тканини. Шматочки витримують протягом 24 год, потім, не виймаючи шматочки тканин з касет, переносять їх у другу ємність зі спиртом 96 o і зневоднюють патронами і витримують ще 24 год, далі процес гістологічної обробки проводять за загальноприйнятою методикою: промивають зразки в бензол парафін.
Якість гістологічних зразків відповідає вимогам стандартів.
Контролем ступеня насиченості робочих спиртів жирами є проба з водою. Після першої проводки за запропонованою нами технологією проба з водою практично не дає помутніння.
Після заміни патронів з мідним купоросом на нові спирти ще раз використовують для проведення 500 шматків тканин по 1 2 мл кожен. Якість гістологічних препаратів після цієї проводки відповідає вимогам стандартів.
Наводимо приклади конкретного виконання способу отримання гістологічних препаратів з різних тварин тканин.
Приклад 1. З метою дослідження мітотичної активності епітелію різних органів (мови, стравоходу, кишечника) в 1 л ємності гістологічної батареї – касетами концентрують 500 органів та створюють співвідношення 2 мл середовища на 1 шматочок; перекладання по ємностях гістологічної батареї здійснюють у касетах із збереженням співвідношення (2:1), контролюють якість зневоднюючих патронів (їх зміна у разі посиніння мідного купоросу); після одномоментного укладання всіх органів парафін, в касетах вичленюють парафінові кубики; зрізи та фарбування мітозів виробляють за загальновідомими методиками; якість пофарбованих зрізів дозволяє враховувати фігури нормальних та патологічних мітозів згідно з існуючимикритеріям цитологічної оцінки клітин, що діляться (І.А.Алов, 1972).
Приклад 2. З метою дослідження гістологічної структури паренхіматозних органів, що легко руйнуються (наприклад, надниркові залози) на всіх етапах гістологічної обробки в 1 л ємності гістологічної батареї касетами концентрують 500 органів і створюють співвідношення 2 мл середовища на один шматочок; перекладання по ємностях гістологічної батареї здійснюють у тих же касетах із збереженням співвідношення (2:1); контролюють якість зневоднюючих патронів (їх зміна у разі посиніння мідного купоросу); після одномоментного укладання всіх органів у парафін у касетах вичленюють парафінові кубики, зрізи та фарбування виробляють за загальновідомими методиками; мікроскопічним дослідженням виявляють (диференціюють) усі ознаки пошарової будови надниркових залоз.
Приклад 3. З метою дослідження внутрішньоклітинних структур опасистих клітин язика, стравоходу (білих щурів) та шкіри людини шматочки органів концентрують касетами в ємностях гістологічної батареї у співвідношенні 2 мл робочого середовища на 1 шматочок на всіх етапах гістологічної обробки; перекладання по ємностях гістологічної батареї здійснюють у тих же касетах зі збереженням співвідношення (2: 1), контролюють якість патронів, що зневоднюють (їх зміна у разі посиніння мідного купоросу); після одномоментного укладання всіх органів парафін в касетах вичленюють парафінові кубики, мікроскопічним дослідженням диференціюють структуру і різні форми опасистих клітин, при цьому коефіцієнт дегранулюючих опасистих клітин звичайний для досліджуваного органу.
Технічний результат винаходу виявляється у наступному.
1. Пропонована технологія дозволяє скоротити витрати реактивів, зокрема спирту, в 2,5 рази при одноразовому їх використанні та в 5разів при дворазовому після негативного контролю насиченість спирту жирами.
2. Упаковка мідного купоросу в ткані мішки крім прямого ефекту - підвищення зневоднюючих властивостей створює додаткову зручність у процесі заміни відпрацьованого купоросу: мішки виймаються з ємності, заповненої спиртом у процесі проводки та замінюють на нові.
3. Використання паперових касет, крім прямого ефекту сорбції жиру на стінки касети, дозволяє виготовляти їх безпосередньо в лабораторії і не залежати від їх промислового випуску.
4. Застосування запропонованої технології дозволяє одержувати гістологічні препарати потрібної якості із збереженням усіх гістологічних структур.
Спосіб зневоднення гістологічного матеріалу, що включає його проведення по спиртах гістологічної батареї, що містить мідний купорос, відрізняється тим, що обробку проводять у паперових касетах, а мідний купорос поміщають у ткані мішки і розміщують навколо касет, причому спирт використовують в об'ємному співвідношенні спирт: :1.