Способи визначення групи крові
Групову належність крові за системою АВО визначають за допомогою реакції аглютинації. Використовують три способи визначення груп крові за системою АВО:
• за допомогою стандартних ізогемаглютинуючих сироваток;
• за допомогою стандартних ізогемаглютинуючих сироваток та стандартних еритроцитів (перехресний спосіб);
• за допомогою моноклональних антитіл (цоліклонів анти-А та анти-В).
При необхідності визначення групи крові в екстреному порядку (при кровотечі необхідно термінове переливання крові) лікар стаціонару визначає групу крові сам (в лабораторії перевіряють перевірку, але постфактум).
1.Визначення груп крові за допомогою стандартних ізогемаглютинуючих сироваток
Суть методу у виявленні у досліджуваній крові групових антигенів А та В за допомогою стандартних ізогемаглютинуючих сироваток. Для цього використовують реакцію аглютинації. Постановку реакції проводять у приміщенні з добрим освітленням при температурі 15-25С.
Методика проведення реакції
1. Перед початком реакції підписують тарілку (наносять прізвище та ініціали досліджуваного), після чого на неї під відповідні позначення наносять стандартні ізогемагглютинуючі сироватки I, II та III груп в об'ємі 0,1 мл (крапля близько 1 см у діаметрі). Щоб уникнути помилок, наносять дві серії сироваток кожної з груп, оскільки одна з серій може мати низьку активність і не дати чіткої аглютинації. Усього виходить шість крапель, що утворюють два ряди по три краплі в наступному порядку ліворуч: 0(1), А(11), B(III).
2. Кров для дослідження беруть із пальця або з вени. Шість крапель досліджуваної крові величиною приблизно з шпилькову головку (0,01 мл, маленька крапля) послідовно переносять сухою скляною паличкою напластину в шість точок, кожну — поряд з краплею стандартної сироватки (кількість досліджуваної крові має бути приблизно в 10 разів меншою від кількості стандартної сироватки, з якою її змішують), потім їх обережно за допомогою скляних паличок із закругленими краями перемішують.
3. Після змішування тарілку періодично похитують.
Аглютинація починається протягом перших 10-30 с, спостереження слід обов'язково вести до 5 хв через можливість пізнішої аглютинації, наприклад з еритроцитами групи А2(2).
4. У краплі, де відбулася аглютинація, додають по одній краплі ізотонічного розчину хлориду натрію, після чого оцінюють результат реакції.
Реакція аглютинації може бути позитивною чи негативною. При позитивній реакції зазвичай протягом перших 10-30 с в суміші з'являються видимі неозброєним поглядом дрібні червоні зернятка (аглютинати), що складаються зі склеєних еритроцитів. Дрібні зернятка поступово зливаються у більші зерна, а іноді в пластівці неправильної форми. При цьому сироватка частково або повністю знебарвлюється. Позитивна реакція може бути піскоподібною або пелюстковою.
Визначення резус-фактора Антигенна система резус-фактора
У 1940 К. Ландштейнер і А. Вінер виявили в еритроцитах людини зовсім новий антиген, названий ними резус-фактором (Rh). Резус-фактор присутній у крові 85% людей, а 15% відсутній.
Система антигенів резус представлена п'ятьма основними антигенами: D, С, с, Е, е (раніше вважали, що їх шість, але пізніше було доведено, що алельного гена d не існує). С і с, а також Е і е - аллельні антигени. Кожна з хромосом несе лише три гени з п'яти: D, С або с, Е або е.
Найбільш активний з усіх антигенів Rh0 (D) - резус-фактор. Залежно від наявності чи відсутності кров людей ділять на резус-позитивную (Rh+) і резус-отрицательную (Rh-).
Способи визначення резус-фактора
Усі методи визначення резус-фактора поділяють на способи, що застосовуються у клінічній практиці, та лабораторні способи.
Способи визначення Rho(D) у клінічній практиці
Методика проведення реакції.Дослідження проводять у центрифужних пробірках обсягом не менше 10 мл. На дно пробірки вносять одну краплю стандартного універсального реагенту, що є антирезусною сироваткою групи AB(IV), розведену 33% розчином декстрану потім до неї додають одну краплю досліджуваної крові (або еритроцитів). Круговим обертанням пробірки вміст розмазують по її внутрішній поверхні таким чином, щоб вміст розтік по стінках. Це значно прискорює аглютинацію і робить її великолепестковою. Аглютинація на стінках пробірки настає протягом першої хвилини, але для утворення стійкого комплексу антиген-антитіло і чіткої аглютинації спостерігати не менше 3 хв. Потім для виключення неспецифічної агрегації еритроцитів до пробірки додають 2-3 мл фізіологічного розчину і перемішують шляхом однодворазового перевертання пробірки (без збовтування!).
Наявність аглютинації (великі пластівці на тлі просвітленої рідини) вказує на резус-позитивну належність досліджуваної крові
Правило Оттенберга
піддаються аглютинації тільки еритроцити донорської крові, що переливається, так як аглютинини вливається крові розводяться в судинному руслі пацієнта, їх титр стає низьким і вони не в змозі аглютинувати еритроцити реципієнта. За правилом Оттенберга можна переливати кров, еритроцити якої не можуть бути.аглютиновані сироваткою реципієнта
Правило Оттенберга застосовується лише за переливанні до 0,5 л донорської крові (!).