Стан клітинного імунітету при хронічному вірусному гепатиті С залежно від деяких
Читинська державна медична академія
Введення. Світова пандемія вірусу гепатиту С залишається злободенною реальністю сучасності. Гепатит С (HCV) характеризується високою частотою хронізації, тривалим персистуванням збудника, високим ризиком розвитку ускладнень – цирозу печінки, первинної гепатокарциноми та є провідним у структурі смертності від захворювань печінки. Встановлено, що основну роль формуванні характеру імунного реагування макроорганізму відіграє взаємодія в системі «вірус-господар», що визначає сценарій розвитку подій при HCV-інфекції [4].
При цьому не повною мірою з'ясовано питання щодо стану системи імунітету залежно від клінічних факторів – наявності реплікації, активності процесу, стадії та тривалості захворювання, наявності супутньої патології, генотипу HCV, що може мати важливе практичне значення [1].
Таким чином, багато аспектів імунної відповіді при гепатиті С залишаються нез'ясованими, у тому числі залежно від стадії фіброзу печінки та тривалості захворювання, хоча це актуально як у теоретичному, так і практичному плані.
Мета дослідження: вивчити деякі показники імунного статусу хворих на хронічний вірусний гепатит С залежно від низки клінічних характеристик захворювання.
Матеріали та методи. Було обстежено 69 осіб, які перебували на стаціонарному лікуванні в ДНЗ «Краєва клінічна інфекційна лікарня» м. Чити за період з 2011 по 2013 р. щодо хронічного вірусного гепатиту С. Жінки склали 30,4 % (21 особа), чоловіки – 69,6% (48 осіб). Вік обстежених знаходився від16 до 58 років, середній вік – 36±1 років. Від усіх пацієнтів отримано добровільну поінформовану згоду на участь у дослідженні.
Діагноз хронічного вірусного гепатиту С виставлений на підставі клініко-лабораторних даних та виявлення рибонуклеїнової кислоти (РНК) HCV методом полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР). Тривалість захворювання до 5 років виявлена у 66,7%, понад 5 років – у 33,3%. Перший ступінь біохімічної активності процесу визначався у 55,0% хворих на хронічний вірусний гепатит С (ХВГС), другий – у 45,0%. Стадія захворювання Metavir F0-F1 була діагностована у 43,5% (30); F2 – у 42,0% (29); F3-F4 - у 14,5% (10).
Групу контролю становили 9 здорових осіб віком від 27 до 42 років, середній вік 34,0±2 років. Жінок було 66,7%, чоловіків – 33,3%. Від усіх обстежених отримано добровільну поінформовану згоду на участь у дослідженні.
Кров для імунологічного обстеження отримували шляхом пункції ліктьової вени у строго стерильних умовах на 2-3 добу стаціонарного лікування. Взяття крові здійснювали в ранкові години (8-9 годин) строго натще. Для імунофенотипування кров забирали у пробірку VACUTAINER (BD), що містить динатрієву сіль ЕДТА об'ємом 2,5 мл.
Вивчалися активність та кількість Lymphocytes (CD45+), T-cell (CD3+), T-help (CD3+CD4+), T-killer (CD3+CD8+), T-cellAktiv (CD3+HLA-DR+), T-helpAktiv (CD3 +CD4+HLA-DR+), T-killAktiv (CD3+CD8+HLA-DR+), B-cell (CD19+), NK-cell (CD3-CD16+CD56+), T-NK-cell (CD3+CD16+CD56+) ). Оцінку субпопуляційної структури лімфоцитів здійснювали стандартним методом прямого п'яти-параметричного імунофлюоресцентного фарбування цільної крові з використанням комерційного лізуючого/фіксуючого розчину OPTILYSE С (Beckman Coulter) та панелі моноклональних антитілtetraCHROME™ та IOTest (Beckman Coulter): 1-а панель – CD45-FITC/CD4-RD1/CD8-ECD/CD3-PC5 та HLA-DR-PC7; Друга панель – CD45-FITC/CD56-RD1/CD19-ECD/CD3-PC5 та CD16-PC7. Контрольні проби інкубували з імуноглобулінами, міченими флуорохромами (FITC, RD1, ECD, PC5, PC7) відповідного ізотипу – мишачі IgG1, IgG2a IOTest (Beckman Coulter). Цитофлюорометрію здійснювали на проточному цитофлюориметрі Cytomics FC-500 (Beckman Coulter, USA), реєстрували сумарно не менше 10 тис. подій. Дані аналізували за допомогою CXP Cytometer (Beckman Coulter).
Визначення показника лімфоцитарно-тромбоцитарної адгезії (ЛТА) проводили методом, запропонованим Ю.А. Вітковським та співавт. (1999) [2]. Свіжу гепаринізовану кров обстежуваних хворих нашаровували на градієнт урографін-фікол (щільність 1,077) та виділяли лімфоцити. Збирали інтерфазне кільце, що містять клітини і кров'яні пластинки, промивали одноразово фосфатно-сольовим буфером (рН 7,4) і центрифугували при 1000 об/хв протягом 3-4 хвилин. Надосадову рідину зливали, осад мікроскопували в камері Горяєва. Показник ЛТА виражали числом лімфоцитарно-тромбоцитарних коагрегатів на 100 клітин (норма – 13-15%). Ступінь адгезії (ЛТІ) визначали як кількість кров'яних пластин, адгезованих на поверхні одного лімфоциту (норма – 3,0±0,3).
Статистична обробка одержаних результатів здійснювалася з використанням пакета аналізу Microsoft Excel. Вона включала опис вибірки, знаходження середньої арифметичної, середньоквадратичного відхилення і помилки середньої арифметичної, визначалися частоти ознак, групування даних. Достовірність відмінностей визначалася за t-критерієм Стьюдента.
Результати та їх обговорення. Встановлено, що у всіх хворих на хронічний віруснийгепатитом С змінено показники імунограми, порівняно з контролем, при цьому аналогічні закономірності визначалися незалежно від стадії фіброзу печінки (табл. 1). Загальними змінами, порівняно з контролем, стало значне підвищення відносної та абсолютної кількості лімфоцитів, субпопуляцій CD3+, CD3+CD4+, активованих Т-лімфоцитів (CD3+HLA-DR+), активованих Т-хелперів (CD3+CD4+HLA-DR+), активованих Т-кілерів (CD3+CD8+HLA-DR+). Одночасно відмічено зниження порівняно з контролем відсотка та кількості субпопуляцій лімфоцитів CD19+ та CD3-CD16+CD56+. Підвищеним виявився імунорегуляторний індекс (CD4+/CD8+).
У табл. 2 представлені середні показники імунограми хворих на хронічний вірусний гепатит залежно від ступеня активності процесу, порівняно з контролем. Зміни імунограми аналогічні описаним вище, при цьому значних відмінностей між першим та другим ступенем активності не зареєстровано.
Зміни показників імунограми у хворих на хронічний вірусний гепатит С залежно від тривалості захворювання представлені в табл. 3. Виявлено, що чим триваліший стаж хвороби, тим більше ставало активованих Т-лімфоцитів (р
Список використаних джерел:
1. Баранов А.В. Епідеміологічні фактори та клініко-імунологічні аспекти патогенезу хронічного гепатиту С: Автореф. дис. … докт. мед. наук. - М., 2009. - 47 с.
2. Феномен лімфоцитарно-тромбоцитарного розеткоутворення/Ю.А. Вітковський, Б.І. Кузнік, А.В. Солпов // Імунологія. - 1999. - № 4. - С. 35-37.
3. Агрегація тромбоцитів, лімфоцитарно-тромбоцитарна адгезія та групи крові АВ0 у хворих на грип A(H1N1)/2009/Є.Є. Гергесова, Ю.А. Вітковський, А.В. Солпов // ЕНІ Забайкальський медичний вісник. -2011. - № 1. - С. 4-9.
4. Марченко Л.І. Оцінка імунологічної реактивності хворих на хронічний вірусний гепатит С// Матер. VI Рос. з'їзду лікарів-інфекціоністів - СПб., 2003. - С. 381.
5. Мухін Н.А. «Важкий» хворий у гепатології// Гепатологічний форум (додаток до журн. «Клінічна фармакологія та терапія»). - 2005. - № 1. - С. 6-8.
6. Хронічний гепатит С/І.І. Орлова, З.М. Зайнудінов, Б.С. Каганов// Питання сучасної педіатрії. - 2004. - Т. 3, № 4. - С. 37-47.
7. Семененко Т.О. Клітинна імунна відповідь при гепатиті С// Вірусні гепатити. - 2000. - № 1. - С. 11-17.
8. Скляр Л.Ф. Система цитокінів та показники оксидативного стресу при хронічному гепатиті С з урахуванням імунокоригуючої терапії: дис. … канд. мед. наук. - Владивосток, 2006. - 270 с.