Визначення концентрації заліза у сироватці крові батофенантроліновим методом за набором фірми Lachema

Залізо в організмі входить до складу порфіринових сполук, головним чином гемоглобіну, міоглобіну та порфірину, у невеликих кількостях воно включається до складу цитохромів та деяких ферментів. У плазмі крові більша частина заліза знаходиться в окисленому тривалентному стані і зв'язується з білком трансферином (сидерофіліном), виявляється у складі гемінового заліза, феритину та внутрішньосудинного гемоглобіну. Так зване гемінове залізо є компонентом продуктів неповного синтезу або розпаду гемоглобіну та дихальних ферментів, що містять по одній порфіриновій групі та пов'язані з транспортним сироватковим білком гемопексином.

Визначення вмісту заліза в цілісній крові не має практичного значення, оскільки визначати гемоглобін значно простіше. Стан обміну заліза найкраще характеризує кількість негемінового сироваткового заліза, тобто. залізо трансферину та феритину, що є основним резервом організму.

Загальна кількість трансферину, пов'язаного із залізом та вільного, може бути визначена імунологічними методами, вільний трансферин можна визначити за його здатністю зв'язувати радіоактивне залізо. Зміст феритину визначається за допомогою радіоімунного аналізу. Ці методи дуже чутливі, специфічні, але потребують спеціальної апаратури та реактивів, а також тривалого виконання досліджень.

Для практичних лабораторій найбільше значення має визначення негемінового заліза сироватки, і навіть її залізозв'язуючої здатності , тобто. максимальної кількості тривалентного заліза, яке може зв'язатися з білками сироватки. Найчастіше вживаними методами визначення заліза сироватки крові є:

1. Абсорбційна спектроскопія, при застосуванні цього методувиникають такі труднощі, як відсутність катодної лампи, що відповідає довжині хвилі поглинання атомів заліза та наявність інтерференції з іншими речовинами.

2. Колориметричний аналіз передбачає проведення кількох етапів:

дисоціація заліза з комплексу з трансферином, що досягається зниженням pH (оптимальне значення 4,8-5,0) за допомогою органічних (зазвичай оцтової) або неорганічних кислот,
відновлення іону заліза (за допомогою гідразину, меркаптоацетату, сульфіту, гідроксиламіну, тіогліколевої та аскорбінової кислот),
взаємодія з комплексоном та формування залізо-хелатованого хромогенного комплексу.

Комплексон повинен задовольняти наступним вимогам: достатня специфічність до двовалентних іонів заліза, високий коефіцієнт молярного поглинання, максимум поглинання повинен знаходитись у зручному для фотометрії діапазоні хвиль, хороша розчинність та стійкість у водному середовищі.

Як комплексони запропоновані ферен-В, ферозин, батофенантролін. З безлічі реакцій як на відновлене, так і на окислене залізо найкращі результати виходять з батофенантролін, який утворює найбільш міцний і яскраво забарвлений комплекс. Оскільки батофенантролін нерозчинний у воді, використовують його спиртовий розчин, також отримують водорозчинне сульфонированное похідне батофенантроліну шляхом обробки останнього хлорсульфоновою кислотою. Методи з використанням ферену-B і ферозину не мають достатньої специфічності, оскільки здатні утворювати комплекси з міддю (для виключення її впливу використовується тіомочевина).

Як уніфікований запропонований батофенантроліновий метод.

Визначення концентрації заліза в сироватці крові батофенантроліновим методомнабору фірми Lachema

Сироваткове залізо відновлюють тіогліколевою кислотою, білки беруть в облогу трихлороцтовою кислотою, в надосадовій рідині встановлюють потрібну величину pH ацетатом натрію і проводять кольорову реакцію з батофенантроліном.