Визначення сапонінів
Визначення сапонінів
Сапоніни витягуються із рослин гарячим спиртом (краще метиловим), з якого вони випадають при охолодженні у вигляді білого порошку. Концентрована сірчана кислота забарвлює їх у червоний колір. Для них характерна так звана дигіталі-нова проба, яка полягає в тому, що при нагріванні з сумішшю рівних обсягів концентрованої сірчаної кислоти і спирту і додаванні однієї краплі розчину сірчанокислого закису заліза сапоніни дають синьо-зелене фарбування.
Гемолітична якісна проба на наявність сапонінів. Проба заснована на обліку гемолізуючої дії екстракту з матеріалу, що досліджується.
Для цієї гемолітичної проби потрібно: 1) фізіологічний розчин хлористого натрію (9 г хлористого натрію розчиняють у 1000 мл дистильованої води); 2) 5%-на суспензія еритроцитів.
Для приготування суспензії еритроцитів беруть кров із яремної вени будь-якої тварини. Кров поміщають у скляну склянку і дефпбршшують її круговим помішуванням дерев'яною паличкою протягом 10-15 хв. Фібрин паличкою видаляють, а плазму з еритроцитами дефібринованої крові фільтрують через 2 шари марлі. Фільтрат змішують з 2-3 обсягами фізіологічного розчину кухонної солі і проводять центрифугування протягом 8-10 хв. При центрифугуванні еритроцити осідають на дно пробірки, а рожеву рідину поверх осаду обережно відсмоктують, намагаючись не зачепити еритроцитів, що осіли. Після цього до осаду еритроцитів знову додають фізіологічний розчин кухонної солі (до початкового рівня) і центрифугують вдруге. Якщо після другого промивання рідина над еритроцитами стане безбарвною та прозорою, то на цьому закінчують промивання еритроцитів, інакше роблять третє промивання їх. Потім беруть 0,5 мл осадувідмитих еритроцитів та до них додають 9,5 мл фізіологічного розчину.
Дослідження матеріалу проводять у такий спосіб. У колбочку поміщають 1 г подрібненого висушеного рослинного матеріалу, до якого додають 10 мл фізіологічного розчину кухонної солі. Якщо досліджуваний матеріал представлений вегетативною масою рослин (сіно та ін.), то колбочку з ним ставлять для екстрагування в киплячу водяну баню на 10 хв (при частому помішуванні), а якщо досліджується борошнистий матеріал (борошно, висівки та ін.), то його екстрагують протягом 15 хв при кімнатній температурі (періодично струшуючи рідину в колбі). Після цього рідину фільтрують через паперовий фільтр. 2 мл отриманого фільтрату поміщають у пробірку, а в іншу пробірку наливають таку ж кількість фізіологічного розчину кухонної солі. Потім в обидві пробірки додають по 0,5 мл 5% суспензії еритроцитів. Пробірки струшують і залишають на 5-10 хв у штативі, після чого враховують результати. Якщо в досліджуваному вилученні є сапоніни, то в 1 пробірці настане гемоліз еритроцитів, тоді як в контрольній (2) пробірці гемолізу не буде.
Точних методів кількісного визначення сапонінів поки що немає. Визначення кількісного змісту сапонінів з достатньою для практичних цілей точністю виробляють за методом М. Н. Курсакової.
Для визначення сапонінів можна скористатися також здатністю їх розчинів (з додаванням 0,85% хлористого натрію) викликати в пробірці гемоліз відмитих еритроцитів дефібринованої крові. х
За даними С. І. Ординського, еритроцити кролика виявилися більш чутливими до сапонінів, ніж еритроцити барана та інших видів тварин.