Визначення вмісту загального азоту в молоці мікрометодом та розрахунок азоту кількості білка
Органічні речовини молока при нагріванні з міцною сірчаною кислотою окислюються до вуглекислоти та води, а азот перетворюється на сірчанокислий амоній. Сірчанокислий амоній переводять в аміак, додаючи міцну луг. Аміак уловлюють 0,01 зв. розчином Н2 S04, що знаходиться у приймальній колбі.
Цей хімічний процес можна зобразити такими реакціями:
Приготування індикатора Ташира. Приготувати два розчини: 1) 0,1%-ний спиртовий розчин метилрота червоного - у мірній колбі на 100 мл в етиловому спирті розчинити 100 мг метилрота; 2) 0,1%-ний спиртовий розчин метиленової сині (100 мг сині розчинити в етиловому спирті). Далі 40 мл 0,1%-ного розчину метилрота змішати з 10 мл 0,1%-ного розчину метиленової сині. З отриманої суміші приготувати робочий розчин шляхом додавання до 25 мл суміші 50 мл дистильованої води та 25 мл етилового спирту.
Техніка визначення:
1. Піпеткою відміряти у колбу К'єльдаля 5 мл молока.
2. У колбу з молоком влити 20 мл концентрованої сірчаної кислоти змиваючи краплі молока, якщо вони потрапили на горло колби. Додати близько 10-20 мг селену. Вставити в горло колби вирву або скляну грушу.
3. У витяжній шафі кип'ятити вміст колби спочатку на слабкому вогні (через азбестову сітку), а потім на сильнішому до повного просвітлення. Спалювання зазвичай триває кілька годин. Після просвітлення розчину кип'ятити його ще півгодини.
4. У остиглий прозорий розчин додати близько 50 мл води і перенести рідину в мірну колбу на 250 мл. Колбу для спалювання сполоснути 6 разів водою (по 20-25 мл), зливаючи її в мірну колбу. Не закриваючи колбу пробкою, перемішати розчин і після охолодження довести його об'єм водою до мітки; закрити колбу пробкою і ретельно перемішативміст.
5. Аміак відганяти на апараті (рис. 3). Перед роботою через прилад необхідно пропускати пару протягом 15-20 хв. Пором же обробити і приймальну конічну колбу ємністю 100 мл.
Мал. 2 Апарат для відгону аміаку:
1 – пароутворювач; 2 - трубка для відведення пари в момент зміни проб; 3 – збірка відпрацьованої рідини; 4 – вирва (з краном а) для заливання досліджуваного розчину; 5 - судина для відгону; 6 – холодильник; 7 – приймальна колба; б, в – затискачі.
6. У приймальну колбу на 100 мл (7) відміряти 10 мл 0,01 н. розчину H2SO4 та влити 3-5 крапель індикатора Ташира. Кінець трубки холодильника (6) занурити у приймальну колбу із кислотою.
7. Відміряти піпеткою 10 мл досліджуваного розчину, що знаходиться в мірній колбі, і акуратно влити його через вирву (4) апарата в посудину для відгону (5). Обполоснути лійку 2 рази невеликими порціями води, а потім влити через неї 8 мл 40%-ного розчину NaOH і закрити кран. Кран (а) приймальної лійки закривають щоразу (після внесення досліджуваного розчину, промивної води та лугу). У посудині (5) для відгону обсяг рідини повинен становити не більше 50 мл. Далі пропускають пару через судину для відгону аміаку протягом 10 хв.
Закінчення відгону перевіряють червоним лакмусовим папірцем, на який наносять краплю дистиляту, що витікає з трубки холодильника.
8. Після закінчення відгону кінець трубки холодильника вийняти з кислоти, опустивши прийомну колбу, і продовжувати відгін, ще 2-3 хв. Потім кінець трубки сполоснути водою і припинити надходження пари, затиснувши гумову трубку від пароутворювача затискачем (б), а затискач (в) відкрити для виходу пари з пароутворювача.
9. Не пов'язану з аміаком сірчану кислоту в приймальній колбі відтитрувати 0,01 н. розчином NaOH допереходу рожевого кольору в зелений.
10. Для внесення поправки на чистоту реактивів виконати контрольне визначення. Для цього замість молока взяти 5 мл води всі наступні операції виконати так, як описано вище.
Розрахувати кількість азоту (мг) в 100 мл молока за формулою:
N = [(ar1 - br2) 0,14 -п] × (2)
де N – кількість азоту 100 мл молока (мг); а - 0,01 н. H2SО4 у приймальній колбі (мл); г – поправка до титру 0,01 н. H2SO4; b
0,01 зв. NaOH, що пішов на титрування (мл); г2 – поправка до титру 0,01 в. NaOH; n - поправка на реактиви, обчислена за контрольним визначенням; 0,14 – азот (мг), еквівалентний 1 мл 0,01 н. H2SO4; 250 - ступінь розведення молока; 5 – кількість молока, взятого для спалювання (мл); 10 - кількість досліджуваного розчину, взятого для відгону аміаку (мл); 100 - коефіцієнт для перерахунку на 100 мл.
або 0,5607 г азоту на 100 мл молока.
Вміст білків