Все про вирощування грибів глива
Для деревних відходів (тирса, тріска, кора) стерилізація - найкращий спосіб обробки. Використовують переважно тирсу листяних порід і деяких хвойних (сосна, кедр) в суміші з поживними (висівки, зерно, борошно насіння бобових тощо) і мінеральними (крейда, гіпс, вапно) добавками.
2. Зволоження субстрату
Після ретельного перемішування компонентів субстрат зволожують водою, але щоб не було надлишків вільної води. При стисканні в руці вода не повинна витікати із субстрату. Так як інкубація субстрату проходить у закритій ємності та випаровування води мінімальне, то оптимальний рівень вологості субстрату становить 60-65%.Надлишок води дуже часто призводить до розвитку бактеріальної інфекції.
3. Фасування
Зволожений субстрат одразу фасують у термостійкі ємності: банки чи поліпропіленові пакети. Якщо зволожену суміш залишити на тривалий час (12-24 години), то в субстраті почнеться розвиток конкурентної мікрофлори, що може сильно ускладнити процес стерилізації. Скляні банки (2-Зл) заповнюють субстратом повністю до шийки. Потім кілочком роблять у субстраті канал діаметром 25-30 мм до дна банки. Щільність субстрату виходить у межах 0,4-0,6. Банки закривають термостійкими кришками (поліпропіленові, гумові) із фільтром повітря (отвори для повітрообміну). Поліпропіленові пакети бувають двох типів: 1) із вклеєним мікропористим фільтром та 2) без фільтра. Пакети заповнюють субстратом на 2/3 об'єму. Субстрат не ущільнюють, лише надають блоку потрібну форму. Самоущільнення субстрату відбувається під час інкубації. Однак, якщо використовують вузькі циліндричні мішки, можна ущільнювати субстрат руками або механічним пресом. Верх пакету простягають через кільце з термостійкого матеріалу(Діаметр 30-50 мм) і закривають ватною пробкою. У пакетів із фільтром верх мішка загортають кілька разів і для надійності закріплюють прищіпкою.
4. Розміщення ємностей
Ємності з субстратом розташовують у стерилізаторі не впритул, а на невеликій відстані один від одного ярусами на решітках так, щоб повітря могло циркулювати між ними. Таке розташування забезпечить рівномірний розподіл пари та нагрівання субстрату та суттєво знизить час стерилізації. Якщо ємності укласти впритул, то стерилізуватися буде окрема ємність масою 1-Зкг, а вся партія субстрату масою 50-100 і більше кг. Для розігріву такої маси потрібно набагато більше часу. Ємності, що знаходяться по краях, простерилізуються нормально, а ті, що знаходяться в центрі, будуть недостерилізовані. Прийде значно збільшувати час стерилізації, а це може негативно позначитися на якості субстрату.
5. Продування
Після завантаження автоклава найважливіше значення набуває характеру перерозподілу холодного повітря камери при запуску в неї пари. Якщо немає хорошої продування камери, то холодне повітря, що залишилося, може створити помилкове враження надлишкового тиску пари. Тому дуже добре мати температурний датчик у камері автоклаву. При тиску 1,5 атмосфери температура камері повинна досягти 121оС. Взаємозв'язок температури і тиску підпорядковується закону Бойля, але якщо повітря в камері нагріте рівномірно. Датчики дозволяють контролювати температуру і в камері, і субстраті. Насправді відлік часу початку стерилізації треба починати, коли різниця в температурі повітря та субстрату не перевищуватиме 10оС. Температура субстрату досягає температури повітря камери лише через 1-2 години! При збільшенні маси блоку вирівнювання температури ще більшесповільнюється. Таким чином, хороша продування перед стерилізацією є важливим та необхідним технічним прийомом. Проведення стерилізації в невеликих обсягах у скороварці можна відраховувати час з моменту закипання. І після цього можна закрити кришку та розпочати відлік часу.
6. Режим стерилізації
Для повної стерилізації твердих середовищ достатньо обробляти їх за температури 120 - 125оС і тиску 1,5-2,0 атмосфери протягом 1-3 годин залежно від обсягу стерилізатора та маси ємності субстрату. Чим більший стерилізатор та маса субстратного блоку, тим триваліша обробка. Час обробки доводиться збільшувати також із збільшенням поживності субстрату чи підвищеною інфікованістю сировини. Мінімальний час обробки 1:00 (для маленьких блоків), максимальне 3-4 години. Більше тривала обробка призводить до перестерилізації. У цьому випадку тирса стає темно-коричневою, змінюється їх запах. Субстрат стає токсичним по відношенню до міцелію. Тривала стерилізація викликає складні хімічні реакції перетворення рослинних терпенів на леткі олії та токсичні продукти типу фурфуролу. Для невеликих обсягів, що розміщуються в скороварку, цей час може досягати 45 хвилин від початку закипання.
7. Охолодження
Коли автоклав відключають, тиск і температура в камері починають повільно знижуватися. В ідеалі при цьому в камері має утворитися вакуум. Якщо автоклав не тримає вакуум, то при охолодженні він засмоктує холодне нестерильне зовнішнє повітря, яке треба фільтрувати. Автоклав, що має розмах тиску від +2 атм. до -2 атм. (вакуум) забезпечує хорошу якість стерилізації, оскільки за такого перепаду тиску (4 атм.) біологічні структури активніше руйнуються. Перш ніж відкриваютьавтоклав, вирівнюють тиск, впускаючи зовнішнє повітря камеру через ватний фільтр. Приміщення автоклавної має бути чистим для запобігання інфікуванню стерильних ємностей (коли немає прохідного автоклава). У невеликих обсягах можна залишити субстрат остигати у скороварці.
8. Вивантаження
Відкривають люк стерилізатора. Субстрат у ємностях ще гарячий. Якщо автоклав прохідний, можна почекати, поки субстрат охолоне і вивантажувати його в чисту зону. Якщо автоклав не прохідний і його вивантаження ведеться в брудній зоні, краще вивантажити субстрат гарячим і помістити його для охолодження в стерильний бокс під УФ-лампами. Приміщення автоклавної повинно бути чистим. Субстрат іноді залишають остигати в автоклаві (на ніч). У цьому випадку повітря в автоклав має надходити через ватний фільтр.
9. Інокуляція
Інокуляцію субстрату проводять у стерильному боксі з дотриманням правил стерильної роботи. Особи, які працюють у стерильній зоні, не повинні бути використані перед цим на брудних роботах. Під час роботи в боксі одягають стерильний білий халат, шапочку, марлеву маску. Щодня проводять дезінфекцію робочого столу у боксі та інструментів. Приміщення боксу дезінфікують перекисом водню (3-6% розчин) або гіпохлоритом натрію (2-5% розчин), або опроміненням УФ-лампами. Контроль чистоти повітря в стерильній зоні проводять один раз на тиждень, у нестерильній зоні - раз на місяць (седиментація колоноутворюючих частинок на живильному агаровому середовищі у чашках Петрі). Хороші стерильні умови створюються у робочій зоні ламінарних шаф за рахунок тонкого очищення повітря через фільтри НЕРА або тканину Петрянова.
На стерильному субстраті без конкурентів розвиток міцелію йде швидко, і це дозволяє знизити норму посівного міцелію з 5% до 1-2% сирої маси субстрату. Міцелій повинен бути у стерильній упаковці, неперетарений. Міцелій або розсипають поверхнею субстрату (поверхнева інокуляція), або засипають в канал (глибинна інокуляція), або змішують рівномірно з субстратом, або пошарово. Після інокуляції ємності переносять до чистого термостатованого інкубаційного приміщення.
При стерильній технології одержують непогані результати на деревних субстратах, збагачених азотними живильними добавками. У цьому випадку врожайність гливи досягає рівня 100% від сухої маси субстрату (табл.).
ТаблицяУрожайність гливи на стерилізованій тирсі,(біологічна ефективність, %)