Забір патологічного матеріалу для діагностики мікозів та його мікроскопічне дослідження
Для дослідження можна брати лусочки, уражене волосся, покришки бульбашок, гній із відкритих вогнищ ураження, нігтьові пластинки, мокротиння, кал, сечу, блювотні маси, жовч, тканинну рідину. Від правильного взяття матеріалу великою мірою залежить успіх мікроскопічного дослідження при дерматомікозах. Елементів гриба зазвичай буває більше на свіжих нелікованих, але вже сформованих ділянках ураження. При мікозах гладкої шкіри для дослідження беруть лусочки периферичних ділянок вогнища шляхом зіскоблювання скальпелем. У хворих на дисгідроз стоп, кистей ножицями або лезом безпечної бритви зрізають покришки бульбашок або бахромки відшарованого епітелію. При дерматомікозах з ураженням довгого та пухнастого волосся матеріал беруть епіляційним пінцетом, іноді – вістрям скальпеля, якщо волосся обламане на рівні шкіри. При інфільтративно-нагножувальних процесах у периферії вогнища відбирають волосся, яке плаває у гної. Гній беруть фолькманівською ложечкою і переносять у чашку Петрі чи годинникове скло. Препарувальною голкою виловлюють уражене волосся і розміщують на предметне скло. Так само збирають гній з відкритих вогнищ ураження, свищів, та якщо з закритих - шляхом пункції шприцем.
Зіскрібки з ураженої слизової оболонки беруть стерильним шпателем, петлею, ножицями, манікюрними щипцями, та якщо з глибших шарів - бормашиною.
При глибоких мікозах для дослідження беруть мокротиння, жовч, сечу, тканинну рідину та вносять у стерильні скляні банки з притертою пробкою. Іноді використовують біопсію шматочків тканини, вносячи їх у стерильні чашки Петрі чи скляні банки. Взятий матеріал пересилають до лабораторії разом із супровідним напрямком, де вказують прізвище, ім'я та по батькові хворого, вік, попередній діагноз, локалізацію поразки, характер тадату взяття матеріалу.
Для мікроскопії застосовують нативні та пофарбовані препарати. Існує кілька методів приготування препаратів, залежно від характеру досліджуваного матеріалу та виду дерматомікозу.
Найбільш простий метод лабораторної діагностики грибкових захворювань полягає у наступному. Уражене волосся, нігтьові пластинки, щільні рогові маси, лусочки подрібнюють на предметному склі нагрітим скальпелем і наносять на них 2-3 краплі 10-30% розчину лугів (КІН або NaOH). Препарат підігрівають над полум'ям спиртування, не доводячи до кипіння, поки не з'явиться білий обідок по периферії, а потім, натискаючи, накривають покривним склом.
У деяких випадках уражені нігтьові пластинки, щільні рогові маси, біопсовані шматочки тканини досліджують методом збагачення Чорногубовим. Матеріал обробляють протягом 20-30 хв. 20-відсотковим розчином лугу з дворазовим кип'ятінням. Для мікроскопії використовують осад після центрифугування. Жовч, тканинну рідину, сечу центрифугують та проводять мікроскопію розчавленої краплі. Гній, грудки мокротиння, калу вносять у краплю розчину Люголя у гліцерині. Розглядають під простим або фазово-контрастним мікроскопом, спочатку під малим, потім під великим збільшенням, використовуючи увігнуте дзеркало, з обов'язково прикритою діафрагмою або опущеним конденсором. При дослідженні лусочок, рогових мас нігтів лікар-лаборант може лише вказати, знайдено чи не знайдено міцелій, а лікар-міколог за клінічною картиною ставить діагноз захворювання та додатково проводить культуральне дослідження.
При мікроскопії ураженого грибом волосся можна визначити родову приналежність дерматофітів. При мікроскопії суперечки розміщені у вигляді ланцюжка, а кутикула волосся збережена. У цьому випадку висновок лікаря-лаборантамає бути таким: «Знайдено трихофітон ендотрикс».
При мікроспорії суперечки розташовуються на поверхні та всередині волосся хаотично у вигляді мозаїки. Суперечки збудників інфільтративно-нагнолюючої трихофітії розташовуються ланцюжками зовні ураженого волосся, причому суперечки фавиформного трихофітону великі, дуже близькі за величиною до збудника мікроспорії. У цих випадках лікар-лаборант дає висновок: «Знайдено трихофітон ектотрикс великоспоровий».
При фавусі в препараті виявляється поліморфізм елементів: різної товщини та довжини нитки міцелію, який розділений на фрагменти, різноманітні за величиною, формою, взаємним розташуванням спор.
Поряд з цим, у препараті є негрибкові елементи: бульбашки повітря, крапельки жиру.
Для діагностики глибокого мікозу, найчастіше, готують і досліджують пофарбовані препарати, використовуючи як матеріал гній, виділення свищів, виразок, зіскрібків грануляцій і т.д. Матеріал наносять тонким шаром на предметне скло, грануляційну тканину попередньо розщеплюють голкою препаровки. Приготовлені мазки фіксують сумішшю Никифорова, 5-відсотковим водним розчином хромової кислоти або сумішшю Кармує (10 г крижаної оцтової кислоти, 60 мл етилового спирту та 30 мл хлороформу), потім сушать і фарбують.
Забарвлення залежить від мети дослідження. Найчастіше фарбують за Грамом, Грамом-Вельшем, Циль-Нільсеном, Романовським-Гімзе, Сабуро, Адамсоном та ін.
Різноманітність клінічних проявів найбільш поширених дерматомікозів (трихофітія, мікроспорія, епідермофітія, руброфітія), їх відмінності у зв'язку з локалізацією процесу (волосиста частина голови, гладка шкіра, складки, нігті) ускладнюють діагностику. Тому в ряді випадків потрібне культуральне підтвердження діагнозу. Правильне встановлення діагнозу полегшує лікування, аголовне – дозволяє цілеспрямовано проводити епідеміологічні та профілактичні заходи.