Застосування безигольних ін’єкторів у діагностиці туберкульозу маралів
Пантове оленярство – порівняно нова галузь тваринництва, що активно розвивається. Основним регіоном розведення маралів є Республіка Алтай і Алтайський край, є ферми розведення маралів в інших регіонах РФ. Технологія пантового оленярства враховує значну схожість маралів із дикими тваринами.
Серед захворювань, що вражають маралів, одним із найсерйозніших є туберкульоз. Він не лише завдає значної шкоди галузі, а й ставить під загрозу існування популяції цих тварин. Складність боротьби з туберкульозом маралів полягає в тому, що багато положень щодо боротьби з туберкульозом домашніх тварин не застосовуються в мараловодстві через біологічні особливості маралів та особливо складні умови роботи з ними.
Для діагностики туберкульозу маралів використовують внутрішньошкірну туберкулінову пробу. Серед оптимальних місць введення виділено: область верхньої третини лопатки та верхня третина шиї. випробувані різні способи постановки туберкулінової проби. У названих дослідженнях діагностика проводилася переважно осінньо-зимовий період, що викликає додаткові труднощі.
При проведенні туберкулінізації маралів ми також відзначили перераховані вище труднощі, і для полегшення даної маніпуляції нами запропонована пальпебральна туберкулінова проба.
Нами було проведено дослідження з метою: вивчення характеру поширення в тілі марала рідини, що вводиться пальпебрально безигольним ін'єктором. Провести до вивчення у порівняльному аспекті прояв алергічних реакцій у маралів, при пальпебральної та внутрішньошкірної туберкулінової проби в області середньої третини шиї.
матеріали та методи
Робота виконана в лабораторії туберкульозу сільськогосподарських тварин ДНУ ІЕВС та ДВ Россільгоспакадемії та вмаралівницьких господарств Шабалинського району Республіки Алтай у 2008 – 2009 роках.
У роботі з вивчення характеру поширення рідини, у столітті маралу, що вводиться безигольним ін'єктором, використано 10 клінічно здорових тварин: 4 марали-рогачі та 6 самок. Ін'єкції проводили безигольним ін'єктором БІ-7м в об'ємі 0,2 мл. з дотриманням правил антисептики асептики. Ін'єкційною рідиною служила чорна туш, що містить сажу, виробництва ВАТ «Гамма». Рідину вводили пальпебрально (у нижню повіку на відстані 1 см від краю). Розподіл у тканинах ін'єктованої рідини вивчали шляхом огляду та вимірювання забарвлених ділянок, а також шляхом мікрокопіювання.
Через 48 годин після ін'єкції тварин вбивали, з місця ін'єкції вирізали шматок розміром 5×5 см, товщиною 1-1,5 см. Матеріал фіксували в 10% забуференому розчині формаліну, проводили через спирти висхідної концентрації, заливали в парафін за стандартною методикою. З парафінових блоків виготовляли зрізи завтовшки 4 мкм. Зрізи фарбували гематоксиліном та еозином, фотографували при 630 кратному збільшенні.
Для порівняння туберкулінових проб, використовували ППД-туберкулін для ссавців. Алерген вводили внутрішньошкірно, у дозі 0,2 мл, що містить 10 тис. МО, з дотриманням правил асептики антисептики. Облік реакції проводили, згідно з «Настановою з діагностики туберкульозу» від 2002 р. Збільшення шкірної складки на 3 і більше міліметрів вважали позитивною реакцією,
Одночасно з внутрішньошкірним введенням ППД-туберкуліну в середню третину шиї ін'єктором БІ - 7м проводили пальпебральну туберкулінізацію в середину нижньої повіки, відступивши від краю століття 1 см. Облік реакції проводили через 72 години, критерієм оцінки служила добре видима припухлість. Маралів, що реагують на ППД-туберкулін, піддавали забою з подальшою експертизою туш та органів та відбором біоматеріалу для бактеріологічного дослідження.
Результати дослідження та їх обговорення
При огляді макропрепаратів нижньої повіки, посічених з навколишніми тканинами до окістя, у всіх тварин барвник виявлений усередині століття. Поширення барвника від місця ін'єкції відбувалося переважно у напрямку кісткового краю очниці.
При мікроскопічному дослідженні виявлено, що зона поширення барвника в нижньому столітті на кілька міліметрів ширша, ніж видно неозброєним оком. Найбільш поверховим шаром поширення барвника став сітчастий шар дерми на глибині залягання волосяних фолікулів (близько 1 мм від епідермісу). У глибоких шарах століття барвник виявлений у тарзальній платівці та очній перегородці. Висока щільність щільної сполучної тканини, що утворює дані структури, перешкоджала проникненню барвника крізь повіку. Поширення барвника відбувалося переважно в дермі та підшкірній клітковині вздовж названих структур. Ширина пофарбованих ділянок становила близько 3,5 см.
У найбільш інтенсивно забарвлених ділянках століття барвник розташовувався в основному в пухкій сполучній тканині, що оточує кровоносні судини та м'язові волокна кругового м'яза ока. У цих ділянках барвник знаходився як позаклітинно, так і в цитоплазмі макрофагів. У найбільш віддалених від місця ін'єкції ділянках барвник також розташовувався в пухкій сполучній тканині, що оточує судини. У щільній сполучній тканині структур, що утворюють повіку, барвник був рівномірно розподілений у міжклітинній речовині між пучками колагенових волокон, скупчення великих зерен барвника зустрічалися в цитоплазмі фіброцитів.
У проведеному намиДослідженні барвник у тканинах виявляли через тривалий час після ін'єкції (48 год.). На нашу думку, використання туші, що містить завис сажі, а також мікроскопічний метод дослідження дозволили уникнути помилок, пов'язаних з дифузією та зміною барвника в тканинах. Сажа не розчиняється також у ході гістологічної обробки, добре видно на пофарбованих гематоксиліном та еозином зрізах. Додатковими свідченнями на користь нашого припущення є відсутність міграції великих частинок барвника в щільній сполучній тканині у напрямку до лімфатичних капілярів, а також знаходження фагоцитованого барвника в цитоплазмі фіброцитів, не схильних до переміщень.
При пальпебральному введенні безигольним ін'єктором рідина поширювалася в волокнистій сполучній тканині структур, що утворюють повіку, переважно в дермі і підшкірній клітковині. Підшкірна клітковина століття марала в досліджених ділянках не містила жирової тканини і по структурі мало відрізнялася від щільної сполучної тканини дерми, була виражена межа між сітчастим шаром дерми і підшкірною клітковиною. Таким чином, пальпебральне введення рідини безигольним ін'єктором маралу було схоже на внутрішньошкірне введення.
Пальпебральний спосіб введення рідини має переваги при оцінці результатів проб, яка проводиться візуально, не потребує фіксації у верстаті диких тварин, що призводить у ряді випадків до вибракування. Серед інших переваг пальпебральної проби можна відзначити простоту проведення, можливість виконання її без вистригання вовни, скорочення часу фіксації тварини у верстаті, що в сукупності призводить до зниження витрат на діагностику.
В результаті досліджень 178 голів маралів, виявлено 10 реагуючих. У всіх випадках позитивнареакція в ділянці середньої третини шиї збіглася з позитивною пальпебральною пробою.
При забої, що реагують на ППД-туберкулін маралів, нами відзначалися зміни в підщелепних, заглоточних, бронхіальних та середостінних лімфатичних вузлах у вигляді гіпертрофії, горбків, а в окремих лімфатичних вузлах відзначалося незначне звапніння. У окремих тварин у легенях відзначалися казеозні вогнища та вузлики звапніння. Нами було здійснено відбір біоматеріалу для бактеріологічного дослідження.
За результатами бактеріологічних та молекулярно-біологічних досліджень із біоматеріалу маралів (10 проб), що реагували на ППД-туберкулін для ссавців, виділено 9 (90%) культур М.bovis.
Висновок
Встановлено, що рідина, що інькується, безигольним ін'єктором розподіляється в шарах шкіри нижньої повіки марала, що характерно для внутрішньошкірного введення розчинів. Діагностична цінність пальпебральної проби у маралів рівноцінна, внутрішньошкірній пробі в область середньої третини шиї, і при цьому відрізняється простою проведення та обліку реакції.