ЗВІТ ПРО РЕЗУЛЬТАТИ ВИВЧЕННЯ ЕФЕКТИВНОСТІ ТRANSFER FACTOR PLUS У КОМПЛЕКСНОМУ ЛІКУВАННІ ХВОРИХ
Карбишева Н.В., Султанов Л.В., Білих С.І., Оганова Е., Мак Косланд До.
Г. Барнаул, Алтайський медичний університет, кафедра інфекційних хвороб та епідеміології,
Алтайський центр із профілактики та боротьби зі СНІД
"4Life Research L.C.", США
ВСТУП
Положення про необхідність корекції дисбалансу імунної відповіді при опісторхозі висловлювалося багатьма дослідниками (2, 9, 12). У той же час літературні дані, що висвітлюють стан гуморальної та клітинної ланок імунної системи при цій інвазії, надзвичайно суперечливі (2, 9). Розмах коливань значень імунологічних показників від достовірно значимих перевищень нормативних рівнів до їх достовірного зниження при ідентичних проявах процесу. Найбільш узгоджуються дані про значну вразливість при опісторхоз Т-системи лімфоцитів, що проявляється зміною кількісних характеристик цієї популяції та її субпопуляцій (9). У зв'язку з цим рекомендації щодо імунореабілітації в комплексній терапії опісторхозу носять загальний характер (10, 12) без визначення групи лікарських засобів у великому арсеналі препаратів, що впливають на стан імунної відповіді (13).
Проведені нами раніше дослідження з вивчення гуморальної ланки імунної системи у хворих на опісторхоз – визначення рівнів імуноглобулінів класу М, G, A (IgM, IgG, IgA) та циркулюючих імунних комплексів (ЦВК) у сироватці крові (7) дозволили розглядати виявлену активацію імунної відповіді при хронічному опісторхоз як відображення взаємодії з антигеном, що характеризується слабовираженою імуногенністю. Гуморальні компоненти імунної відповіді при данійінвазії є скоріше її специфічними маркерами, але не мають захисних властивостей, що призводить до персистенції опісторхії і взаємної адаптації паразита і господаря на тривалий термін. Це положення лягло в основу пошуку засобу для проведення імунореабілітації при хронічній фазі опісторхозу. Встановлено, що розвиток специфічної імунної захисної відповіді, навіть при тривалій персистенції етіологічного фактора, можна забезпечити шляхом активації першої стадії імунної відповіді з максимальною індукцією цитокінів першої фази (14). Надзвичайно важливими є відомості про роль ІНФ-гама (IFN-γ) в активації антигенпредставляючих клітин - макрофагів. IFN-γ стимулює експресію молекул АГ ГКГ 2 класу, необхідних для розвитку специфічної імунної відповіді (16, 17).
У цьому зв'язку представило інтерес зупинити свій вибір на трансфер-факторах, що є сигнальними молекулами, які «навчають» і «тренують» незрілі імунні клітини або у разі хронічних процесів здатні навчити повноцінно розпізнавати багато мікроорганізмів (15). Існуючі трансфер-фактори поділяються на три основні фракції, названі відповідно до їхньої основної дії на імунну систему: індуктори, антиген-специфічні трансфер-фактори та супресори. Є численні повідомлення про успішне застосування препаратів трансфер-фактора в лікуванні вірусних, паразитичних, грибкових, онкологічних, неврологічних та аутоімунних захворювань (15).
МЕТА ДОСЛІДЖЕННЯ
Оцінити ефективність застосування препарату TransferFactorPlus при лікуванні хворих на хронічний опісторхоз.
Завдання дослідження :
Оцінити клінічну ефективність застосування препарату TransferFactorPlus у комплексній терапії хронічного опісторхозув порівнянні з базовим лікуванням.
Провести оцінку функціонального стану гуморальної ланки імунної системи у хворих на хронічний опісторхоз і в резидуальному періоді інвазії в залежності від лікування.
Визначити рівні концетрацій прозапальних цитокінів при хронічній фазі опісторхозу на тлі терапії, що проводиться.
Вивчити рівень аутоантитіл до антигенів нативної та денатурованої ДНК залежно від перебігу опісторхозу та лікування, що проводиться.
Відкритий клінічний експеримент з повною інформованістю пацієнтів, обстеження та лікування хворих у Центрі з діагностики та лікування опісторхозу та «рідкісних» гельмінтозів на базу інфекційного відділення міської лікарні № 5 м. Барнаула.
МАТЕРІАЛИ ТА МЕТОДИ
Обстежено 94 пацієнти віком від 20 до 60 років. У 24 (25,5%) хворих інвазія протікала латентно, у 70 (74,5%) – клінічно виражено. Переважали гепатохолангітичний (40,9%), астеновегетативний (33,3%) варіанти перебігу хронічної фази перебігу опісторхозу. У 30% хворих на шкірі періодично з'являлися висипання, у 12% виникали напади ядухи за типом бронхіальної астми, артралгічний синдром розвинувся у 25 (27%) хворих, явища васкуліту – у 17 (18%). У 95% випадків опісторхоз був виявлений вперше, у решти пацієнтів в анамнезі курс дегельмінтизації більтрицидом, без ефекту. Діагноз хронічного опісторхозу верифікували даними мікроскопії жовчі (дуоденальне зондування) або вмісту кишечника (наявність яєць Op.felineus або дорослих паразитів).
У всіх хворих вивчено стан гуморальної ланки імунної системи – у сироватці крові проведено визначення рівня імуноглобулінів трьох основних класів M, G, A, вмісту циркулюючих імунних комплексів (ЦВК); дослідженорівень аутоантитіл до антигенів нативної та денатурованої ДНК (К нДНК та К дДНК). У 45 хворих на хронічний опісторхоз визначена концентрація прозапальних цитокінів (IL-1β, TNF-α, IFN-γ).
Усі досліджувані показники у 2-х групах хворих визначали до початку терапії та через 2 тижні, 3 місяці після її проведення. Диспансерне спостереження здійснювалось протягом півроку.
Для оцінки отриманих даних обстежено 75 донорів віком від 18 до 50 років.
Визначення ЦВК проведено методом преципітації 4% ПЕГ-6000. Величину оптичної щільності визначали проти контролю за довжиною хвилі 450 нм на вертикальному спектрофотометрі Multiskan МСС/340. Кількість ЦВК виражали в умовних одиницях (у.о.).
Визначення концентрації цитокінів у сироватці крові виконано на тест-системах ProCon IL-1β, ProCon TNF-α, ProCon IFN-γ виробництва ТОВ "Протеїновий контур" С.-Петербург за інструкцією виробника. Результати імуноферментного аналізу реєстрували на вертикальному фотометрі Multiskan MСС 340 при довжині хвилі 492 нм. Для визначення концентрації інтерлейкінів в аналізованих зразках будувався калібрувальний графік за середньою оптичною щільністю кожного стандартного розчину.
Зміст імуноглобулінів визначалося прямим сандвіч варіантом імуноферментного аналізу. В роботі застосовували комерційний кон'югат пероксидази з антитілами до імуноглобулінів людини (Московський НДІЕМ ім. Н.Ф. Гамалеї), моноспецифічні антисироватки до імуноглобулінів людини А, М, G, стандартну сироватку крові людини виробництва цього ж інституту або НДІЕМ Горького. Як тверду фазу використовували 96-лункові планшети для імунологічних реакцій. Детекцію проводили на вертикальному фотометрі Multiskan MСС 340 у двох хвильовому режимі492/600 нм.. Обчислення проводили за допомогою персонального комп'ютера та прикладної програми, розробленої на базі SK4 для сандвіч-варіанту ІФА. виробника. Результати імуноферментного аналізу реєстрували на вертикальному фотометрі Multiskan MСС 340 при довжині хвилі 492 нм.
Аутоантитіла до антигенів нативної ДНК у сироватці крові людини визначалися за допомогою тест-системи "ДНК-ТЕСТ" виробництва ПМЦ Сібмедприлад. Результати імуноферментного аналізу реєстрували на вертикальному фотометрі Multiskan MСС 340 за довжини хвилі 492 нм. Результати тесту вважалися позитивними, якщо оптична щільність аналізованої сироватки була більше критичної оптичної щільності, яка становила - оптична щільність негативного контролю Х 2 .
Статистична обробка варіаційних рядів включала підрахунок середніх арифметичних величин (X)і стандартних помилок середніх арифметичних (m), стандартного відхилення. У таблицях та малюнках інформація представлена у виглядіX±m. Діяльність використовувалися методи непараметричної статистики. Значимість відмінностей варіаційних рядів у пов'язаних попарно вибірках оцінювалася за допомогою U - критерію Вілконсона - Манна - Уітні, кореляція показників обчислювалася за методом Спірмена. Аналіз даних проводився за допомогою пакета прикладних програм Statgraf.
ПЕРЕПРИВАННЯ ДОСЛІДЖЕННЯ І ЗАМІНИ
Всі 50 хворих отримувалиTransferFactorPlusза запланованою схемою. Введеннянових осіб не потрібно.
КЛІНІЧНІ ПОДІЇ І ВИПАДКИ, ЯКІ ВИМАГАЛИ НЕГАЙНОГО ОГЛАСКИ
Названих подій та випадків у проведеному дослідженні не спостерігалося.
Проведені спостереження показали хорошу переносимість препаратуTransferFactorPlus. У пацієнтів 1-ої групи після призначення антигельмінтика та прийомуTransferFactorPlusпри порівнянні з контрольною групою не зареєстровано розвитку астеновегетативного синдрому та появи або посилення болів у правому підребер'ї, що часто виникають після прийому більтрициду (у 73% та 52% хворих 2-ї групи відповідно). ПризначенняTransferFactorPlusвідіграло істотну роль у клініці резидуального періоду опісторхозу. У 1-ій групі обстежуваних через 4 місяці після лікування у всіх хворих з артралгічним синдромом (12 осіб) та у 7 з 9 хворих з васкулітами настало повне одужання. У другій групі, які отримували тільки більтрицид, залишкові явища у вигляді артралгій, васкулітів продовжували турбувати відповідно в 95% і 100% випадків весь регламентований при опісторхозі період диспансерного спостереження (протягом півроку).
Результати дослідження стану гуморальної ланки імунної системи у пацієнтів із хронічною фазою опісторхозу до лікування показали, що практично у 100% випадків у обстежених хворих виявляються ті чи інші зміни.
Існуючий дисбаланс вмісту досліджених цитокінів може розглядатися як ще одне свідчення неповноцінності імунної відповіді при хронічній фазі опісторхозу з відсутністю головної компоненти – захисного ефекту. Ми бачимо підвищення концентрації IL-1β, здатного індукувати більшу частину місцевих та загальних проявів запальноїреакції, що запускає початкові події імунної відповіді, зокрема до залучення до нього Т-хелперів (14). Здатність Op.felineus до “екранування” як поверхневих структур паразита, так і високоімуногенних антигенів (8), мабуть, пояснює той факт, що лише у невеликої частини обстежених підвищений рівень TNF-α, продукція якого включається навіть за умови розпізнавання ліпопротеїдів екзогенів
Як відображення індукції слабо специфічної імунної відповіді може розглядатися у хворих на хронічний опісторхоз при порівнянні з нормативними значеннями відсутність зрушень рівня IFN-γ, роль якого в активації антигенпредставляючих клітин - макрофагів і подальшої стимуляції експресії молекул АГ ГКГ 2 класу, необхідних для розвитку специфічної імунної відповіді важлива (16, 17).
При оцінці рівня аутоантитіл до антигенів нативної ДНК у групі хворих до лікування (табл. 1) виявлено До нДНК, що дорівнює 4,80±0,22, що достовірно перевищує ''середню'' групи ''практично здорових'' осіб.
У процесі обстеження хворих на опісторхоз високого рівня аутоантитіл виявлено і до антигенів денатурованої ДНК (табл. 1). Ми бачимо той самий характер процесу – достовірне підвищення До дДНК до лікування порівняно з групою “практично здорових” осіб (p 0,05).