1.4. Сироватка крові тварин та людини
Сироватка крові багата на біологічно активні сполуки, значення багатьох з яких щодо мікроорганізмів неясно. Вона є також одним із джерел заліза, необхідного для багатьох видів бактерій. Особливості сироватки крові різних видів тварин та людини добре вивчені. Показані відмінності у білковому складі (Кармолієв Р. X., 1971) та інших біохімічних властивостях (Радаєва І. Ф., Костіна Г. А, 1998). При культивуванні мікобактерій для збагачення рідких живильних середовищ використовують сироватку крові різних видів ссавців. У нативному стані її рекомендують включати в середу для культивування L-форм мікобактерій туберкульозу Дорожкова І. Р., Вовк А. Ст (1972) і Мордовської Р. Р., Птіцина Е. А. (1982). За даними Mysak J. (1974) середовище Банич з додаванням 10% сироватки крові перевершує за культуральними властивостями середовища
Левенштейна-Єнсена та Шула. Максимальне поліпшення культуральних властивостей рідких поживних середовищ відзначається при використанні крові (Dickinson J. et al., 1989) і сироватки крові великої рогатої худоби (ВРХ) або V фракції бичачого сироваткового альбуміну (БСА). Це середовище Школярової з 10% сироватки крові ВРХ та середовище Міддлбрука (Middlebrook) без агару, але з додаванням комплексу олеїн-альбумін-декстроза-каталазу. Зберігання комерційних середовищ, які містять V фракцію БСА, погіршує їх культуральні властивості (Culter S., 1988). Бібергаль В. А. (1991) показала покращення культуральних властивостей середовища Школьникової в 9 разів при додаванні свіжої людської плазми. Можна, на її думку, використовувати для цього інактивовану сироватку крові ВРХ. За даними Ільїних Л. А. (1990) при додаванні сироватки крові ВРХ у середу Гельберга відзначається більш раннє та інтенсивне зростання колоній мікобактерій. Свіжа сироватка крові ВРХ у середовищіMiddlebrook 7H11 прискорювала зростання М. bovis (Galaciner J., Horwill D., 1977). Сироватку крові ВРХ містить середовище Ренжа-ра для культивування М. paratuberculosis (цит. по Сидорову М. А. та співавт., 1995). Середовище для виділення мікобактерій, що містить сироватку крові коня, пропонують Дудницький І. А. та співавт. (1991). Dhople A. та ін. (1996) відзначають стимулюючий ефект на ріст М. avium додавання в бульйон 7Н9 сироватки крові кроликів та людей, хворих на гемолітичну анемію та гемохроматоз; тоді як сироватки крові здорових людей і хворих на мікобактеріоз, викликаний М. avium, навпаки, чинили пригнічуючу дію. Сироватка крові коня входить до складу середовища ML для культивування М. leprae (Osawa N., 1997). Середовище VS3E, що містить 30% сироватки крові плода корови (Bhatia V., Rao S., 1989), підтримує ріст М. leprae.
Нативну сироватку крові коні використовують у живильних середовищах для пневмококів Балаян Л. Б. (1947); Бухарін О. В. та співавт. (1981).
Сироватка крові входить до складу середовищ для нейссерій (Лабін-ська А. С, 1972; Гаджієва А. Г. і співавт, 1982), в тому числі менінгококів (Керівництво. 1973; Шічкіна В. П. та співавт., 1983). Загальноприйнято виділення та культивування останніх на агарових середовищах з 20% сироватки крові коня (Ігоніна Ю. А. ісоавт., 1976; Костюкова Н. Н. та співавт., 1980). Використовується і сироватка крові ВРХ (авт. свід-во № 1659485, 1991). Враховуючи відсоткове співвідношення білків в асциті, Андрєєва 3. М., Бобровникова А. Я. (1984) замінили його у відповідних поживних середовищах для нейссерій сироваткою крові коня. При цьому, як зазначалося вище, ростовий ефект 1% сироватки пояснювався нейтралізацією нею токсичного компонента агара.Шічкіна В. П. і співавт. (1983) вводили у середу 13-20% сироватки крові тварин. Татарніков В. М. таспівавт. (1984) показали низьку висівання менінгококу на середовищі Гаджієвої в порівнянні з 20%-им сироватковим агаром Хоттінгера і рекомендую-
ють додавати в середу 10% нативної сироватки крові коня.
ki N., Fujiwara K. (1992) окремі види мікоплазм чутливі до мікоплазмоцидної дії сироватки крові коня. Найбільша активність виявлена стосовно М. pneumoniae. Ефект виявлявся при 37°З при Са 2+ і Mg 2+ . Після прогрівання при 56 ° С у присутності комплементу ефект зберігався щодо М. pneumoniae і М. fermentans, але не в відношенні М. neurolyticum і М. laidlawii. Встановлено, що ця активність визначається комплексом lgGі М.
Сироватка кролячої крові в концентрації 5-30% є основним компонентом живильних середовищ для лептоспіру. Малахов Ю. А. (1992) рекомендує використовуватиме їх культивування сироватку крові тварин лише двох видів: кроликів і овець. Сироватки крові ВРХ, баранів, коней і свиней мають бактерицидну дію по відношенню до лептоспірів (Ананьїна Ю. В., Чернуха Ю. Г., 1983; 1984). Найбільш активно зростанню цих мікроорганізмів сприяє альбумінова фракція. Деякі дослідники рекомендують використовувати гемолізовану сироватку, відзначаючи поліпшення росту лептоспіру при певному ступені гемолізу. Сироватка крові або альбумін використовуються для детоксикації твинів у живильному середовищі.
Спочатку в нашій країні при промисловому виробництві вакцини проти лептоспірозу мікроорганізми культивували в середовищі Уленгута, що складається з води та кролячої сироватки крові. Заміна надалі цієї сироватки на овечу не знизила якості вакцини. Однак перехід у 1966 році біофабрики на альбумінове середовище ВДНКІ-1, де сироватка була замінена її альбуміновою фракцією, викликав погіршення.антигенних властивостей лептоспір і з 1975-1976 років для культивування знову почали використовувати водно-сироваткове середовище з овечою сироваткою. Потім було встановлено негативний вплив на зростання лептоспір спонтанно зустрічаються в сироватках крові овець-донорів гомологічних антитіл і на біофабриці впровадили комбіновану сироватково-альбумінове середовище, яке застосовують і в даний час (Ситьков В. І. та співавт., 1996). За кордоном для цих цілей використовують безсироваткові напівсинтетичні (альбумінові) або синтетичні поживні середовища.
Сироватку крові різних видів ссавців додають до середовища для спорифікації патогенних та непатогенних мікробів (Sementini А., 1942), зокрема, Ст anthracis (Srinivasan V. et al., 1972). Кров і її сироватка адсорбують інгібітори капсулоутворення живильного середовища (Schaefer W., 1963). Роль останньої в утворенні капсул у вірулентних штамів Ст anthracis вивчали Meynell E., Meynell G. (1964). Нативні бичача або кінська сироватки у відносно високій концентрації є обов'язковими компонентами багатьох елективних середовищ, призначених для капсулоутворення Ст anthracis (ДКІ; Томова; Шляхова, 1973; Низамова Р. Н. і співавт., 1992; Лефлера; сиро-
точних агару та бульйону). Левіна Є. Н. та співавт. (1974) з метою накопичення токсину Ст cereus використовували середовище Торна з додаванням, крім інших компонентів, 1% сироватки крові.
Кров ВРХ, а частіше її сироватка, входять до складу поживних середовищ для культивування бруцел (Колесникова Н. С, 1961; Альтон Дж., Джонс Л., 1968). Як замінник сироватки для підвищення ростових якостей середовища для бруцел використовують твін-40. На відміну від інших (шорстких форм) бруцел штам Br. ovis І-65 (гладкий варіант) росте тільки на живильних середовищахз нативними сироватками крові ВРХ або коні (Тарасова Т. А. та співавт., 1983).
Для культивування Campylobacterpylori використовують різні кров'яні середовища з додаванням 5-10% баранячої, кінської або людської крові та (або) сироватки (Баженов Л. Г., 1991). Xia H. та ін. (1992, 1993) відзначають, що в серцево-мозковому бульйоні з 10% кінської сироватки крові С.pylori зберігаються більше 3 діб. Schulze Eetal. (1987) виділяли та диференціювали бактерії роду Campylobacter на агарі Мюллера-Хінтона (Mueller-Hinton) з додаванням 10% телячої крові.
Allan Е., Poxton 1. (1994) показали вплив середовища культивування на чутливість різних видів Bacteroides до бактерицидної дії комплементу сироватки крові людини та експресію поверхневих структур. Вивчені штами були різною мірою чутливі до сироватці коли культивувалися в збагаченому середовищі з протеозним пептоно-дрожжевим екстрактом. Однак при вирощуванні в мінімальному середовищі Van Tassell і Wilkins половина штамів виявляла відчутну стійкість як до людської, так і до інактивованої баранячої сироватки крові.
Для культивування збудника американського гнильця бджіл (Вас. larvae) в даний час широко використовують МПА з додаванням 10% кінської сироватки крові без консерванту, хоч і на ній Вас. larvae не завжди добре росте.
Савельєв Є. П. та співавт. (1989) вивчали вплив на зростання стрептококів групи А додавання в середу культивування фракцій сироватки крові ВРХ, що містять низькомолекулярні сполуки. Griffiths Ст, McClain О. (1987) показали відновлення інга-бованої іонами Fe 3+ продукції гемолізинів Str. pyogenes при додаванні в середовище сироватки. За даними ShimokawaО.etal. (1994) сироватка крові коня пригнічує зростання L-форм St. aureus, а рідкісніколонії, що виростали на середовищі, збагаченому даною сироваткою, є стабільними L-формами. Ivanova E. та ін. (1991) культивували стабільні L-форми протопластів Е. coli WE+ на соєвому середовищі з 10% сироватки.
За даними EvansM.etal. (1986) додавання сироватки крові людини до бульйону Мюллера-Хінтона призводить до появи14-50% хибнопозитивних результатів чутливості Ps. aeruginosaк моксалактаму. Значно зростає чутливість-
ністьPs.aeruginosaк сироватці крові людини при вирощуванні наMg-дефіцитному середовищі (TzouvelekisL.etal., 1990).
Кравцов А. Н. та співавт. (1987, 1992) показали зв'язок зупинки росту Y. pestis у нативній сироватці крові з обмеженням надходження заліза до мікробної клітини. З'ясовано, що гемін Y. pestis у сироватці не використовують. Передбачається асиміляція заліза трансферину залежить від температури і здійснюється тільки при 28°С. Інкубація у сироватці крові людини сприяє збагаченню антигенної структури збудника чуми, підвищуючи тим самим вірулентність та імуногенність.
Пастерели на середовищах без сироватки ростуть не завжди задовільно, тому в бактеріологічній діагностиці пасте-рельозу рекомендується використання сироваткових МПА і МПБ, а також сироваткових бульйону та агару Хоттінгера до складу яких входять 10% нативної сироватки крові коня (Метод9, вказано 9).
Наявність цистинази-основної видової ознаки С. dipt-heriae-визначають на середовищі Пізу з 10% кінської сироватки. Батуріна А. В. та співавт. (1990) замінили в ній кінську сироватку на середу 199. Відсутність сироватки крові в агаровому середовищі не позначається на якості тестування токсигенності дифтерійних культур, причому найкращою із замінників сироватки (твін-40, ГЛА, амінопептид9, протеїн)(Газі-зову Г. Р. та співавт., 1990).
Сидоров М. А. та співавт. (1995) відзначають найкраще зростання актино-міцетів A. pyogenes і A. hardeovulneris на сироваткових середовищах. Сироватка крові кролика входить також до складу середовища Бейгтона, Колмана (1976).
Пушкарьова В. І. та співавт. (1997) показали реверсію покояться листерій у вегетативний стан під впливом фе-тальної сироватки.
Поданим Ожередової Н. А. (1997) стимулюючий ефект сироватки крові риб на ріст і розмноження С. albicans вищий, ніж кроляча.