4. Цито- тагістохімічні методи дослідження

За допомогою цито-і гістохімічних реакцій вдається не тільки виявити ту чи іншу хімічну сполуку, а й встановити локалізацію речовини у клітинах, простежити за зміною її у процесі життєдіяльності, тобто. вивчити обмінні процеси. Нині є гістохімічні методики, дозволяють вивчити основні етапи обміну білків, ліпідів, полісахаридів, активність низки ферментів, основні неорганічні компоненти клітин. До гістохімічних реакцій застосовні деякі основні вимоги:

збереження суворої прижиттєвої локалізації хімічної сполуки;

специфічність та висока чутливість реакції;

хімічні реактиви не повинні вступати в обмінні процеси;

проведення контрольних реакцій (видалення речовини, що вивчається);

кінцевий продукт реакції має бути пофарбований.

Гістохімічні реакції дають якісну оцінку, у поєднанні з цитофотометричних досліджень вони дозволяють визначити кількість досліджуваного компонента.

1. Метод Фельгену: гідроліз у 1 N розчині HCl для звільнення альдегідних угруповань дезоксирибози (складової частини молекули ДНК). Обробка реактивом Шиффа – фуксинсернистою кислотою – безбарвною сполукою, що має високий ступінь чутливості до альдегідів. З'єднуючись з фуксинсернистою кислотою, альдегіди переводять її в поєднання, забарвлене в яскравий червоно-фіолетовий колір. Реакція специфічна.

2. Метод Браше: забарвлення піроніном-метиловим зеленим. Сутність методу полягає у вибірковому приєднанні основних барвників до нуклеїнових кислот – піроніна до РНК (дає червоне забарвлення), метилового зеленого до ДНК (дає зелене забарвлення). Для контролю РНК перед фарбуванням потрібна обробка препаратів рибонуклеазою.

---