5.1. Відбір та доставка матеріалу на дослідження
Матеріалом для бактеріологічного аналізу можуть бути випорожнення, блювотні маси, жовч, трупний матеріал (відрізки тонкого кишечника і жовчний міхур); предмети, забруднені випорожненнями (постільна та натільна білизна та ін.); вода, мул, гідробіонти, стічні води, вміст вигрібних туалетів; змив з об'єктів навколишнього середовища, харчові продукти, мухи та ін.
Матеріал від хворого забирає медичний персонал лікувального закладу негайно після виявлення хворого до початку лікування антибіотиками. Керівник є відповідальним за правильність відбору, зберігання та своєчасність доставки проб до лабораторії.
Необхідно враховувати високу чутливість холерних вібріонів до дезінфікуючих засобів та кислот, можливість антагоністичної дії супутньої мікрофлори та передбачувану концентрацію збудника у досліджуваному матеріалі. Якщо в матеріалі від хворих на алгідну форму холери концентрація збудника досягає 10(6) - 10(9) м.к./мл, то в випорожненнях хворих на легку форму і лікованих антибіотиками, реконвалесцентів і носіїв кількість холерних вібріонів зазвичай не перевищує 10(2) - 10(4) м.к./м.
Для відбору проб використовують чистий стерильний посуд, що не містить слідів розчинів, що дезінфікують. Стерилізацію посуду та інших засобів забору матеріалу проводять автоклавуванням, сухим жаром або кип'ятінням у 2% розчині харчової соди.
Матеріал для дослідження повинен бути доставлений не пізніше ніж через 2 години після його взяття. У разі подовження термінів доставки використовують транспортні середовища. Найбільш зручною і досить ефективною є 1% пептонна вода (рН 8,4 +/- 0,1).
У пептонну воду як інгібітор супутньої флори може бути доданий телурит калію з розрахунку 1:100000 - 1:200000 або миючезасіб "Прогрес" у концентрації 0,1 - 0,2%. В окремих випадках для транспортування матеріалу можуть бути використані сольові консерванти (див. Розділ 7).
На флаконах (пробірках) з пептонною водою, що передаються в стаціонари для відбору проб, має бути етикетка або напис із зазначенням назви середовища та дати її приготування.
Середовище у флаконах чи пробірках, закритих ватно-марлевими пробками, рекомендується зберігати трохи більше 2-х діб за нормальної температури не вище (10,0 +/- 0,2) °З за умови збереження їх стерильності. Доцільно забезпечення стаціонарів та груп забору проб середовищем у закатаних флаконах.
За наявності у хворого на діарею матеріал забирають до початку етіотропної терапії в кількості 10 - 20 мл, у хворих на легкі форми - 1 - 2 г випорожнень. Від хворих тяжкою формою матеріал направляють до лабораторії нативним і в 1% пептонній воді. У транспортне середовище вносять 1-2 мл або 1-2 г матеріалу на 5-6 мл середовища.
При вимушеному подовженні термінів доставки матеріалу в лабораторію (тривале плавання, круїз тощо) можна використовувати смужки фільтрувального паперу. Рідкими випорожненнями просочують смужку звичайного щільного промокального паперу або іншого гігроскопічного матеріалу і герметично пакують у пластиковий пакет для запобігання висиханню при транспортуванні в лабораторію. На таких смужках холерні вібріони виживають до чотирьох - п'яти або більше тижнів, доки зберігається волога.
При обстеженні на вібріононосійство матеріал забирає медичний персонал лікувально-профілактичних установ, в осередку створюють спеціальні групи з відбору проб, які працюють під керівництвом епідеміологів.
Матеріал у кількості 1 - 2 г може бути доставлений на дослідження нативним, в 1% пептонній воді абоіншому транспортному середовищі.
5.1.1. Способи відбору проб від хворих на холеру, вібріононосіїв та контактних з ними осіб секційного матеріалу
Випорожнення та блювотні маси в кількості 10 - 20 мл збирають у стерильний посуд стерильними ложками або скляними трубками з гумовою грушею з індивідуального судна, на дно якого поміщають меншу за розміром посудину (лоток), зручну для знезараження кип'ятінням.
Для взяття матеріалу у хворих з рясним водянистим випорожненням можна використовувати гумовий катетер, один кінець якого вводять у пряму кишку, а інший опускають у банку. Рідкі випорожнення стікають у посудину вільно або при легкому масажі черевної стінки.
Стерильний ректальний ватний тампон з гігроскопічної вати вводять у пряму кишку на глибину 5 - 6 см, збирають їм вміст зі стінок кишечника і опускають у флакон або пробірку з 1% пептонною водою.
Стандартну стерильну петлю з алюмінієвого дроту перед забором матеріалу змочують стерильним 0,9% розчином натрію хлориду і вводять у пряму кишку на 5 - 6 см. Взятий матеріал переносять у флакон або пробірку з 1% пептонною водою.
Жовч беруть під час дуоденального зондування в лікувальному закладі. В окремі пробірки збирають дві порції: з жовчного міхура та жовчних проток (В та С). Матеріал доставляють нативним.
Від померлих з підозрою на холеру беруть відрізки (довжиною близько 10 см) верхньої, середньої та нижньої частин тонкої кишки, розріз виробляють між подвійними лігатурами, попередньо накладеними на обидва кінці ділянки кишечника, що вилучається. Жовчний міхур після перев'язки протоки витягають повністю. Вміст кишечника і жовч від трупа можна взяти стерильним шприцом з товстою голкою в обсязі до 10 мл і перенести в ємність з 1% пептонною водою. Взяті зразкиорганів трупа укладають окремо у стерильні банки.
Банки, пробірки з матеріалом закривають пробками, що не промокають, і пергаментним папером, ретельно обробляють зовні серветкою, змоченою дезінфікуючим розчином, уникаючи затікання його всередину. Усі проби етикетують, укладають у спеціально підготовлену для транспортування металеву тару та перевозять на службовому транспорті із супроводжуючим. Форма напряму дана в Додаток. 1.
5.1.2. Відбір проб із об'єктів навколишнього середовища
Воду (питну, з поверхневих водойм та ін) для дослідження беруть у кількості 1 л на одну пробу в двох об'ємах по 500 мл у стерильний посуд з пробкою, що не промокає.
З водопровідних кранів проби води беруть після попереднього обпалювання їх спиртовим смолоскипом та спуску води протягом 10 хв. при повному відкритті крана.
Господарсько-побутові стічні води відбирають для дослідження двома способами: об'ємом 1 л у двох ємностях по 500 мл або тампонами, приготованими з марлевих серветок розміром 10 х 10 см, складених у 10 - 15 шарів. Останні закріплюють біля місця забору води, через добу поміщають у стерильну банку та доставляють у лабораторію.
Гідробіонтів (риб, жаб та ін) відловлюють з водойм будь-яким способом і в закритих банках, відрах та інших судинах доставляють в лабораторію.
Іл та фітопланктон (водорості) також поміщають у стерильні банки та транспортують до лабораторії.
Дослідити зоопланктон (дафнії, циклопи та ін) можна груповим методом, об'єднуючи в один посів 10 - 30 зразків, відловлених на одній ділянці водойми. У цьому випадку їх можна доставити в одній посудині. При дослідженні риб беруть вміст шлунка та зябра.
Змив з різних об'єктів навколишнього середовища беруть ватним або марлевим тампоном,змоченим 0,9%-м розчином натрію хлориду, з поверхні площею 10 х 10 см. Тампон опускають у флакон або пробірку з 1% пептонною водою.
Для збору мух розставляють мухоловки, в які наливають 1% пептонну воду з 1% цукру.
Залишки їжі в осередку та за показаннями харчові продукти відбирають по 200 г щільних та 0,5 л рідких, поміщають у скляний посуд та закривають. При необхідності в рідкі продукти додають основний пептон до 1% концентрації.
Проби об'єктів навколишнього середовища етикетують, заповнюють напрямок (Додаток 2) і відправляють до лабораторії з нарочним згідно з діючими СП.
Перелік предметів, що входять до укладання для відбору проб, див. 3, 4.