Цитопатологія клітин крові
| Гематологія: методи Взяття крові з пальця Дослідження морфології еритроцитів Морфологія лейкоцитів Методи дослідження фагоцитозу in vitro Забарвлення за Райтом Забарвлення за Лейшманом. Забарвлення по Май-Грюнвальду Забарвлення по Нохту Забарвлення за Романівським Забарвлення за Фрейфельдом Визначення Т-і В-лімфоцитів у периферичній крові. Одержання лейкоконцентрату Приготування та фіксація мазків крові Приготування мазків крові уніфікованим методом Ретикулоцити Цитопатологія клітин крові. Еритроцитометрія Еритроцити | ||
Цитопатологія клітин крові
Патологічні структурні зміни у клітинах
Сегментація ядра.Розмір клітин переважно збільшений. Ядро розділене на кілька з'єднаних між собою сегментів. Найбільше сегментів виявляється у нейтрофілів та мегакаріоцитів (до 20 і більше). Структура ядра може бути незмінною. Сегментація може поєднуватися з пікнозом, хроматинолізом та вакуолізацією ядра та цитоплазми.
Хроматиноліз.При розпаді хроматину він втрачає свою нормальну структуру - розчиняється. Ядро забарвлюється у світлий колір, контури його зберігаються.
Каріоліз- Розчинення лише частини ядра зі збереженням його нормальної структури. У місцях розчинення ядро втрачає здатність фарбуватися основними фарбами, контури його нечіткі, розмиті.
Фрагментоз- процес, при якому від ядра відокремлюються окремі фрагменти (частки). Вони можуть бути пов'язані з ядром тонкими нитками базихроматину.
Пікноз- ущільнення базихроматину ядра. Ядро стає темним, безструктурним.Розмір клітини зменшується. p align="justify"> Процес пікнотизації поширюється або на все ядро, або на окремі його ділянки або сегменти.
Каріорексіс- розпад ядра на окремі частини, не пов'язані між собою, округлої форми та різко пікнотичні, темні, безструктурні утворення.
Цитоліз- розпад клітини. Цитоплазма найчастіше відсутня. Ядро втрачає свою нормальну структуру, контури його розпливчасті.
У важких випадках можна виявити лише залишки ядра та зернистість.
Вакуолізаціязустрічається частіше у цитоплазмі, іноді й у ядрі. Наявність її ядрі вказує на більш глибокі зміни в клітині та на тяжкість патологічного процесу. Вакуолізація часто поєднується з іншими структурними змінами клітини.
Структурні зміни в клітинах зустрічаються при різних патологічних процесах: інфекційних захворюваннях, дії хімічних речовин, захворюваннях кровотворного апарату, дії проникаючих випромінювань (рентгенівські, нейтронні, гамма-промені тощо), попаданні всередину радіоактивних речовин та ін.
Пельгерівська аномалія (пельгерівський сімейний варіант лейкоцитів)[1]
Зміна крові, що успадковується за домінантним типом. Особливість розвитку пельгерівських лейкоцитів виявляється головним чином у морфологічній зміні ядер нейтрофілів - порушенні процесу їхньої сегментації, (ядро старе, а форма його юна). Структура ядер пельгерівських нейтрофілів грубогребчаста, пікнотична. Більшість пельгерівських нейтрофілів має одночасткове, несегментоване ядро, за формою подібне до паличкоядерних клітин, а також у вигляді еліпса, кола, боба або нирки, воно коротше, ніж у звичайного нейтрофілу. Рідше зустрічаються ядра з перетяжкою, що намічається посередині, нагадують за формою гімнастичну гирю або землянийгоріх.
Від цих двох форм спостерігаються переходи до двосегментних ядр; ядра із трьома сегментами майже зустрічаються. Як бі-, так і трисегментоядерні форми відрізняються пельгерівськими особливостями — короткими перемичками та бруківкою будовою ядер.
Зустрічаються нейтрофіли з круглими ядрами, що нагадують за формою мієлоцити, проте їх особлива грубоглубчаста та пікнотична структура не дозволяє віднести ці нейтрофіли до мієлоцитів.
Частина пельгерівських нейтрофілів має велику, рясну зернистість, в інших же вона дрібна, мізерна.
У базофілах, еозинофілах, моноцитах та лімфоцитах описані вище зміни при пельгерівській аномалії зустрічаються рідше і менш виражені.
Пельгерівські нейтрофіли за своїми фізіологічними властивостями — здатністю до фагоцитозу, вмістом ферментів (лужної фосфатази та ін.), тривалістю життя в циркулюючій крові — не відрізняються від нормальних, зрілих нейтрофілів. Реакції носіїв пельгерівської аномалії на інфекції, крововтрати тощо не відрізняються від відповідних реакцій у звичайних людей.
Асегментація ядер гранулоцитів (варіант Штодмейстера)[2].
На відміну від типово пельгерівських круглоядерних нейтрофілів з грубогребчастою, фрагментованою структурою і чіткими контурами ядер ядра клітин Штодмейстера характеризуються менш вираженою конденсацією хроматину і своєрідною бахромчастістю, що складається з ніжних хроматинових ниток, як би виступаючих.
Клітини Штодмейстера- цілком зрілі форми нейтрофільного ряду. Феномен асегментації ядер відзначається також у еозинофілах та базофілах та відсутній у моноцитах.
Зміни нейтрофілів, подібні до пельгерівської аномалії, можуть виникнути і яквторинне явище (псевдопельгерівська аномалія) при деяких захворюваннях (гострі кишкові інфекції, агранулоцитоз, лейкози та ін), що має тимчасовий, минущий характер. Після одужання хворого псевдопельгерівські лейкоцити зникають.
Бажано у всіх випадках для уточнення діагнозу пельгерівської сімейної аномалії у пацієнта дослідити кров батьків і за наявності у них відповідних змін повідомити їх і лікаря про це. Це дозволить уникнути помилкового тлумачення картини крові як «лівого зсуву» нейтрофілів та неправильної поведінки лікаря за будь-якого захворювання носія пельгерівської сімейної аномалії.
Вроджена гіперсегментація ядер нейтрофілів [3]
Переважають нейтрофіли з 4 і більше сегментами ядра. Ця аномалія нагадує так званий зсув нейтрофілів вправо, що зустрічається при анемії Аддісона-Бірмера та ін. Вроджена гіперсегментація не дає жодних клінічних симптомів.
Вроджена гіперсегментація ядер еозинофілів[4].
Ядра еозинофілів складаються переважно із 3 сегментів (у нормі зазвичай 2 сегменти). Іноді відзначається сегментація ядер моноцитів.
Це — аномалія зернистості гранулоцитів крові та кісткового мозку, яка дуже велика, азурофіл'на і настільки рясна, що ядра цих клітин у забарвлених мазках майже не видно. Крім того, велика азурофільна зернистість зустрічається в лімфоцитах та моноцитах.
Аномалія Чедіака - Штейнбринка[6].
Виявляються якісні зміни всіх форм лейкоцитів. Аномалія спостерігалася досі лише у дітей. У цитоплазмі гранулоцитів поруч із великою зернистістю відзначаються кулясті азурофільні утворення розміром 2-5 мкм, оточені світлими обідками; часто виявляються тільця Деле. Відзначаються зміниу будові хроматину ядер.
Аномалія Травень - Хегглина[7].
У зрілих нейтрофілів і еоенінофільних гранулоцитах виявляють у цитоплазмі обмежені базофільні ділянки, позбавлені зернистості (відповідають тільцям Делі). Такі ж зміни виявлено у цитоплазмі базофільних гранулоцитів та моноцитів.
1. Алексєєв Г, А. Про один своєрідний варіант ядерної асегментації гранулоцитів (тип Штодмейстера), що імітує гомозиготну форму пельгерівської аномалії лейкоцитів. - «Пробл. гематол. і перелив, крові», 1967 № 5, с. 37-45.
2. Кассирський І, А., Алексєєв Г, А, Клінічна гематологія, М., "Медицина", 1970, с, 765.
3. Лавкович В., Кржемінська-Лавочкін І. Гематологія дитячого віку. Варшава, 1964, с. 227
КЛІТИНИ ЧЕРВОНОГО ВОВЧАНКУ (LE-ФЕНОМЕН)
LE-феномен утворюється завдяки присутності в сироватці хворих на системний червоний вовчак особливого фактора гамма-глобулінової природи, під впливом якого ядра клітин крові або тканин набухають, хроматин втрачає свою структуру і перетворюється на аморфну масу. Лізований ядерний матеріал стає чужорідним для організму та фагоцитується лейкоцитами.
Метод ротування крові зі скляними намистами(Цинкхама і Конлі), модифікований Новосьоловою.
Отримання високої концентрації лейкоцитів у мазках, що дуже полегшує пошук-LЕ-клітин.
Посуд та апаратура.
1. Шприц ємністю 10 мл.
2. Широка пробірка з пробкою, що щільно закривається.
3. Скляні бусинки діаметром 3-4 мм.
5. Центрифужна пробірка.
6. Центрифуга на 1000 об/хв.
7. Предметне та покривне скло.
8. Штатив для мазків.
9. Місток для фарбування.
1. Оксалат натрію.
2. Метиловий спирт.
3. Фарба Романовського.
Взяту з вени кров у кількості 10 мл вміщують у широку пробірку, куди заздалегідь вносять 10 мг натрію оксалату.
Кров ретельно перемішують з оксалатом і залишають при кімнатній температурі на 1ч-1ч 30 хв у спокої.
У пробірку вносять 8-10 скляних бусинок діаметром 3-4 мм, щільно закривають пробкою і ротують шляхом перекидання на пробку і назад протягом 30 хв зі швидкістю 30-40 об/хв. Після цього кров, відстоюють близько години при кімнатній температурі до розділення шарів, потім відсмоктують плазму піпеткою, переносять в центрифужну пробірку і центрифугують протягом 5 хв при 1000 об/хв. З осаду роблять мазки, фіксують їх у метиловому спирті та фарбують за Романовським. Мазки переглядають спочатку (орієнтовно) із сухою системою, а потім із імерсійною.
Метод Шнаппера та Натана,
модифікований Кисельової (метод «кільця»).
Поєднання лейкоцитів здорових осіб із кров'ю хворого.
Посуд та апаратура.
1. Предметне та покривне скло.
2. Волога камера.
У центр знежиреного предметного скла наносять краплю крові здорової людини. Скло з краплею поміщають у вологу камеру і залишають на 1 годину в термостаті за 37°. Потім препарат висушують у повітрі. Такі препарати можна заготовити про запас на 2 тижні. До предметного скла по обидва боки краплі притирають два покривні скла так, щоб вони не покривали кров'яну пляму. Краплю крові з пальця хворого поміщають у центрі другого предметного скла, яке швидко, але обережно перекидають на заздалегідь приготоване скло з сухою краплею крові здорової людини так, щоб обидві краплі стикалися. Такий препарат поміщають у вологу камеру і залишають на 1 год.термостат при 37°. Потім верхнє скло та покривне скло обережно знімають. Залишки сироватки швидко видаляють. Препарат висушують на повітрі, фіксують та фарбують так само, як мазки крові.
Для знаходження LE-клітин можна користуватися лейкоконцентратом, отриманим за методом Р. А. Поспелової, або за мікрометодом Л. І. Ємешії
При мікроскопічному дослідженні LE-клітина являє собою фагоцит, зазвичай нейтрофільїй лейкоцит, в цитоплазмі якого міститься одне або кілька овальних, абсолютно безструктурних гомогенних утворень, що забарвлюються азур-еозином у світлий червонувато-фіолетовий колір. У мазках, крім характерних вовчакових клітин, можна бачити також тільця, що вільно лежать, здебільшого округлі, тієї ж будови і забарвлення, що і включення в клітинах. Це так звані вовчакові тільця, не фагоцитовані лейкоцитами. Крім того, можна спостерігати ці ж вовчакові тільця, оточені нейтрофілами, з утворенням так званих розеток.
Вовчаковий фактор може міститися в пунктаті кісткового мозку, в білкових рідинах (ексудати, сечовий білок при ураженнях нирок). Частота виявлення LE-клітин у хворих на гострий системний червоний вовчак коливається від 40 до 95%. При поліпшенні стану хворого в процесі лікування кількість LE-клітин зменшується, а іноді вони і зовсім зникають.
LE-феномен спостерігається, хоча і рідко, і при плазмоцитомі, тяжких ураженнях печінки, гострих лейкозах, гострому ревматизмі, еритродерміях, міліарному туберкульозі, перніціозній анемії, при непереносимості антибіотиків – пеніциліну анезоліну, особливо апресоліну ії, тромбоцитопенічної пурпури. При цих захворюваннях вовчакові клітини виявляються одинично і непостійно.