Фіксація у гістохімії
Метою фіксації біологічного матеріалу для гістохімічного аналізу є переведення живої речовини з лабільного стану стабільний, тобто. припинення процесів аутолізу та стабілізація речовин і структур клітини в такій мірі, при якій їх локалізація, цілісність та взаємне розташування практично не змінюються при подальшому зневодненні, заливанні в парафін або в смолу, приготуванні зрізів, а також під впливом пучка електронів, якщо проводиться ультрацитохімічний аналіз . Для досягнення цієї мети можливі три підходи: висушування, заморожування та хімічна фіксація.
Найчастіше як і гістологічної, і гістохімічної практиці використовують метод хімічної фіксації. На його результати впливають час, що минув після взяття матеріалу, тривалість фіксації, рН і ізотонічність середовища, температура і хімічні властивості обраного фіксуючого реагенту. Дуже важливе значення має час, що минув від прижиттєвого взяття матеріалу з організму на початок фіксації. Цей термін повинен бути максимально скорочений, бажано до декількох хвилин, хоча непогана морфологічна безпека, достатня для ідентифікації тканини, клітин та речовин з метою патоморфологічної діагностики, може бути забезпечена при фіксації матеріалу через 30-90 хв після операції.
Температура фіксуючого розчину для гістохімічних цілей в більшості випадків встановлюється від 0 до 4 °С для уповільнення аутолітичних процесів і зниження швидкості можливої дифузії досліджуваної речовини. Фіксація на холоді особливо рекомендується для ензимогистохімічних та ультрацитохімічних досліджень.
У хімічній фіксації для гістохімічних цілей використовують насамперед альдегіди (формальдегід,глутаровий альдегід та ін.), тетраоксид осмію, хромову кислоту та її солі, спирти (етанол, метанол та ін.), ацетон, солі ртуті (наприклад, сулема), уранілацетат та кислоти (наприклад, оцтова, трихлороцтова, пікринова, азотна та ін).
Формальдегід та суміші з формальдегідом
Фіксатор, що найбільш широко використовується як у гістології, так і в гістохімії, - формальдегід. Це газ, розчинний у питній воді до концентрації 40 % по масі; саме в такій концентрації він і надходить у продаж під назвою "формалін". У гістологічній практиці зазвичай використовують 10% розчин формаліну, що відповідає 4% розчину формальдегіду.
У водних незабуферених розчинах формальдегід згодом перетворюється на мурашину кислоту, метиловий спирт та ацетон, які суттєво погіршують якість фіксації, особливо для гістохімії, електронної мікроскопії. До недоліків формальдегіду відноситься також його досить висока здатність до полімеризації та випадання білого осаду пара-формальдегіду. В результаті цих процесів точну концентрацію формальдегіду в розчинах формаліну встановити неможливо.
Формальдегід та суміші з формальдегідом можна використовувати в більшості гістохімічних досліджень. Особливо добре зарекомендували себе при виявленні ферментів, головним чином гідролітичних та ліпідів, кальцій-формол за Бейкером, а для виявлення нуклеїнових кислот фіксатор ФСУ (формалін – спирт – оцтова кислота).
Фіксатор Ліллі для кислих глікозаміногліканів: