Флюориметрія
Флюоресцентний (люмінесцентний) метод аналізу-заснований на дослідженні спектрів випромінювання аналізованих речовин.
Цей метод застосовується як для ідентифікації речовин за кольором люмінесцентного випромінювання, так і для кількісного аналізу визначення інтенсивності люмінесценції, що вимірюється спеціальними приладами, званими флюориметрами. В експерименті флюоресценцію багатьох речовин викликають опромінення УФ-світлом. Наприклад, молекули кофеїну та нікотину в УФ-світлі мають фіолетову флюоресценцію; папаверин, совкаїн, барбаміл – блакитну; кодеїн, але-шпа – жовту; резерпін, катарнина-гідрохлорид – жовто-зелену. Ця властивість використовується для визначення препаратів.
У ГФ X реакції справжності за кольором флюоресценції прийняті для багатьох препаратів, наприклад, димітину, метилтіоура-цилу, прогестерону, резерпіну, рибофлавіну, хініну гідрохлориду та ін.
На інтенсивність флюоресценції впливають такі фактори: концентрація речовини в розчині, природа розчинника, температура, рН середовища, присутність сторонніх речовин.
Флюоресценцію зазвичай визначають у розчинах з концентрацією речовини не більше Ю-4-Ю-5 г/мл.
Збільшення концентрації флюоресцентної речовини призводить до зменшення або повного зникнення (гасіння) флюоресценції.
Гасіння флюоресценції може бути викликано й іншими причинами, наприклад хімічною взаємодією сторонніх речовин з флюоресцентною речовиною, в результаті якого утворюються нефлюоресцентні продукти реакції.
Деякі лікарські речовини самі не флюоресціюють; а набувають здатності до флюоресценції внаслідок хімічної реакції. Наприклад, тіамін і кокарбоксилаза з феріціанідом калію в лужному розчині утворюють тіохром, який під впливом УФ-світла флюоресціює.блакитний колір.
Адреналін, фолієва кислота в результаті хімічних перетворень утворюють продукти флюоресцентні реакції, за якими ідентифікують ці препарати.
Вміст чистої речовини в препараті (X) обчислюють за такою формулою:
де: - концентрація розчину стандартного зразка; п - показання флюориметра для досліджуваного розчину; т – показання флюориметра для розчину стандартного зразка; «2 – показання флюориметра для контрольного розчину.
Так як інтенсивність флюоресценції прямо пропорційна концентрації речовини в дуже вузькій ділянці, то відношення "
2 має бути не менше 0,4 і не більше 2,50. Відносна помилка флюориметричного методу становить 2-5%.