Гормональна діагностика вагітності - Методи діагностики

Методи гормональної діагностики вагітності засновані на виявленні у сечі жінки, у якої підозрюється вагітність, хоріонічного гонадотропіну (ХГ). Для цього запропоновані різні тест-об'єкти: миші, щури, кролиці, жаби.

За ступенем вираженості змін, які наступають у яєчниках тварин під впливом введеного ХГ, розрізняють 3 види реакцій: 1-а реакція характеризується наявністю фолікулів, що зріють, з накопиченням гранульозних клітин навколо яйцеклітини. При 2-й реакції у фолікулах утворюються крововиливи (кров'яні точки). Для 3-ї реакції характерне утворення яєчників жовтих тіл. 1-а реакція не специфічна для вагітності, оскільки вона буває позитивною за наявності підвищеної кількості фолікулостимулюючого гормону гіпофіза, коли функція яєчників пригнічена або повністю вимкнена, як, наприклад, в менопаузі. За наявності вагітності повинні бути позитивними 2-а та 3-я реакції.

Найбільш поширеними єреакція Ашгейма - Цондекана нестатевих самках мишей, на дорослих самках мишей, реакція Фрідмана на дорослих кролицях і сперматозоїдна реакція Галлі-Майніні на самцях-жабах або жабах.

Реакція Ашгейма – Цондека

Сутність реакції полягає в тому, що введена під шкіру нестатевозрілим самкам білих мишей сеча вагітної викликає у них зміни в статевому апараті, що відповідають 2-й і 3-й реакцій. Сеча невагітної жінки таких змін не викликає або в крайньому випадку може наступити лише 1-а реакція.

Через 96-100 год тварин вбивають ефіром або обезголовлюють і розкривають черевну порожнину. При позитивній реакції зміни у яєчниках легко виявити неозброєним оком або за допомогою лупи. У неясних випадкахрекомендують вирізати яєчники, промити їх водою та покласти на предметне скло у краплю гліцерину. Через 10–15 хв яєчники стають блідими і цьому тлі кров'яні крапки виступають особливо яскраво. За даними К. М. Фігурнова (1935), у 10% випадків для вирішення питання доводиться вдаватися до мікроскопічного дослідження. Реакція Ашгейма – Цондека дає правильну відповідь 98%. Після видалення плодового яйця з організму реакція може бути позитивною протягом 8-10 днів.

Діагностика вагітності на дорослих мишах (реакція Ескіна та Фрейдовича)

Реакція Фрідмана

Як біологічний тест для діагностики вагітності використовують статевозрілих кролиць. У них не відбувається спонтанного лопання дозрілих фолікулів та утворення жовтих тіл. Ці процеси відбуваються лише після покриття кролиць самцем в результаті рефлекторного збудження передньої частки гіпофіза та виділення гонадотропних гормонів. Після гіпофізектомії, виробленої в перші години після спарювання, лопання фолікулів не відбувається. Введення у вушну вену кролиці 24 мл сечі вагітної жінки протягом 2 діб (по 4 мл 6 разів) призводить через 48 год до крововиливів у фолікулах та початку утворення жовтих тіл.

Одну і ту ж кролицю можна використовувати в досвіді 5-6 разів (у разі негативної реакції черговий досвід проводять через 1,5-2 тижні, при позитивній реакції - не раніше ніж через 1 міс). Реакція Фрідмана дає правильну відповідь у 98–99% випадків.

Діагностика вагітності на жабах-самцях

Широкого поширення набула біологічна проба на вагітність, яку проводять на жабах-самцях. Гонадотропні гормони гіпофіза впливають на статеві залози особин обох статей. На статевий апарат самців-жаб гіпофізарні гонадотропіни та ХГ діютьідентично, викликаючи виділення сперматозоїдів у клоаку. На цьому принципі і заснованареакція Галлі-Майніні. Постановка реакції коштує дуже дешево, оскільки жаби не вимагають спеціального догляду. Їх містять у прохолодному напівтемному приміщенні в посуді з невеликою кількістю води, яка повинна стояти під невеликим кутом, щоб частина дна не була вкрита водою. Воду слід міняти щодня. У таких умовах жаби можуть довго жити без їжі. За кілька годин до постановки досвіду жаб потрібно принести у приміщення, де проводитиметься реакція, щоб вони адаптувалися до температури приміщення.

З жаб, що у Радянському Союзі, найбільш чутливі до ХГ озерні жаби (Rana ridibunda), потім – зелені (Bufo viridis) і прості жаби (Bufo bufo), найменш чутливі ставкові жаби (Rana esculenta). Найчастіше для постановки реакції використовують озерні жаби, які виявляють реактивність до ХГ протягом цілого року. Для досвіду беруть статевозрілих самців вагою від 50 до 75 г і довжиною 6-7,5 см. Самці відрізняються від самок тим, що у них на першому пальці передніх лап є велика мозоль.

Реакцію ставлять на 2 жабах. Попередньо досліджують вміст клоаки на наявність сперматозоїдів. Для цього очною піпеткою набирають із клоаки краплю рідини, наносять її на предметне скло та розглядають під мікроскопом. У разі виявлення сперматозоїдів жабу з досвіду виключають.

Свіжу ранкову сечу у кількості 3-5 мл упорскують у лімфатичний мішок, розташований під шкірою спини. Через 2 години фіксують результат. Якщо реакція позитивна, у клоаку виявляють сперматозоїди. Їх розглядають під мікроскопом при малому збільшенні в трохи затіненому полі зору. Реакція вважається позитивною, якщо сперматозоїдів багато іБільшість їх рухлива. Якщо кількість сперматозоїдів невелика (2-5), реакцію необхідно повторити.

Жаби можна багаторазово використовувати для реакції, проте якщо тварина реагувала позитивно 5-6 разів, чутливість до ХГ у неї поступово знижується. У разі позитивної реакції цю жабу можна використовувати в наступному досвіді не раніше ніж через тиждень; при негативному результаті через 2-3 дні.

Реакція на жабах-самцях вигідно відрізняється від інших біологічних проб швидкістю та простотою техніки, може бути здійснена в будь-якій обстановці, доступна кожному практичному лікарю.

Реакцію Галлі-Майніні широко застосовують як для діагностики нормальної вагітності. Нею користуються при підозрі на міхурову замет або хоріонепітеліому. При заносі бульбашки реакція різко виражена і настає дуже швидко - через 15-20 хв. У разі необхідно провести кількісне визначення ХГ. При нормальній вагітності визначається позитивна реакція при введенні жабі цільної сечі або якщо сеча розлучена не більше ніж у 2-5 разів. При заносі бульбашки реакція зберігається позитивної при розведенні сечі в 10, 20 разів і більше. При хоріонепітеліомі виділяється величезна кількість ХГ і реакція може виявитися позитивною навіть при розведенні сечі у 100 разів.

При постановці реакції на жабах-самцях також виникла потреба у кількісному визначенні ХГ. Найменша кількість сечі, що викликає через 2 години після ін'єкції вихід сперматозоїдів у клоаку біля озерної жаби вагою 45-50 г, отримала назву жабиної одиниці (л. е.). Для визначення кількості ХГ в 1 л сечі, що досліджується, зручно користуватися шкалою, запропонованою А. А. Давиденком (табл. 1).

При хоріонепітеліомі ХГ нерідко набуває новогоякість: він із термолабільного стає термостабільним. Тому реакцію проводять після кип'ятіння сечі протягом 15 хв. Згідно з даними І. П. Гоменюка (1971), при збереженні протягом тривалого часу позитивної біологічної реакції на ХГ після видалення міхура занесення, вирішальним у діагностиці хоріонепітеліоми є не стільки підвищення титру гонадотропіну, скільки перехід стала негативною реакції на позитивну або перетворення термолабільного гонадотропіну у термостабільний.

Говорячи про те, що при фізіологічній вагітності ХГ є термолабільним і тільки в патологічних умовах перетворюється на термостабільний, мають на увазі непереносимість високих температур. Випробування стійкості ХГ до низьких температур проводив І. І. Усоскін. Сечу вагітних піддавали заморожуванню та зберіганню при температурі – 12° протягом різних проміжків часу (від 5 тижнів до 2 місяців). При цьому у всіх випадках виявлено термостабільність ХГ.

Досягнення в галузі імунології дозволили розробити новий метод діагностики вагітності, заснований на тому, що ХГ, будучи речовиною білкової природи, має виражені антигенні властивості. Ці властивості були описані ще Б. Цондеком, однак через відсутність очищених препаратів ХГ, високочутливих серологічних реакцій, недостатньо розробленої методики імунізації тварин вони не могли бути доведені.

В даний час, завдяки вдосконаленню зазначених методик та наявності очищених препаратів ХГ, встановлено, що при парентеральному введенні тварин ХГ, виділеного із сечі вагітних жінок, у крові з'являються специфічні антитіла. Отримано імунні сироватки з високим титром специфічних антитіл, що містять аглютинуючі, преципітуючі та комплементзв'язуючі антитіла.Відповідно до зазначених властивостей антитіл для визначення ХГ запропоновані реакції:

гальмування гемаглютинації;
преципітації;
зв'язування комплементу;
затримки осадження частинок латексу.

Найбільшого поширення набула реакція гальмування аглютинації, запропонована 1960 р. Wide і Gemzell. Вона заснована на тому, що ХГ, що міститься у сечі вагітних жінок, гальмує реакцію аглютинації еритроцитів, на поверхні яких адсорбовано ХГ, що відповідає антисироватці. Для отримання антисироватки проти ХГ імунізують кроликів одним із препаратів ХГ (хоріогонін фірми Гедеон Ріхтер, ХГ вітчизняного виробництва, гонабіон – НДР та ін.). Антигеном служать спеціально оброблені еритроцити барана, «заряджені» одним із зазначених препаратів.

Реакція гальмування гемаглютинаціїполягає в наступному: кроляча антисироватка, що містить антитіла проти ХГ, аглютинує спеціально оброблені еритроцити барана, на поверхні яких абсорбований ХГ. Якщо таку антисироватку спочатку інкубувати з сечею, що містить цей гормон або з розчином гонадотропіну і після цього додати до неї сенсибілізовані еритроцити барана, то реакція аглютинації не настає внаслідок виснаження антитіл в антисироватці, і еритроцити осідають у вигляді чіткого кільця. , Яку використовують для постановки даної реакції. Відсутність аглютинації за цих умов свідчить про наявність ХГ у випробуваній сечі, тобто підтверджується діагноз вагітності. Виконання реакції займає 1-2 год.

Для підвищення імунореактивних властивостей організму тварини та антигенних властивостей препарату, що містить ХГ, застосовують ад'юванти. Найбільш ефективним є ад'ювантФрейнда (ланолін 20 мл, вазелінове масло 40 мл, убиті туберкульозні бактерії 30 мг).

С. М. Мартинов та Б. П. Стернюк (1965) запропонували спрощену методику визначення ХГ у сечі за допомогою реакції гемаглютинації.

Скло поміщають у зволожену чашку Петрі за кімнатної температури. Облік реакції проводять під мікроскопом. За наявності в сечі, що досліджується, ХГ аглютинація еритроцитів відсутня, і навпаки, якщо він не міститься, настає аглютинація.

Гравімунтест

Широко застосовують гравімунтест. Набір необхідних проведення реакції інгредієнтів випускають у СРСР і НДР під назвою «Гравімунтест».

Як будь-який імунологічний метод, гравімун-тест заснований на гальмуванні реакції аглютинації між «зарядженими» ХГ еритроцитами, антисироваткою та сечею вагітної жінки.

За наявності значної кількості ХГ у сечі, що досліджується, гормон зв'язується з антисироваткою, а еритроцити осідають на дно пробірки у вигляді кільця або кнопки. Якщо сеча містить малу кількість ХГ або останній взагалі відсутня, еритроцити не осідають, а розподіляються в розчині рівномірно. Точність гравімуну-тесту досить висока: чутливість реакції проявляється за наявності близько 2500 ME ХГ в 1 л сечі. Така кількість гормону зазвичай є в сечі на 8-10 день затримки менструації.

Ампула гравімуну містить ліофілізовану антисироватку та «заряджені» ХГ еритроцити. У коробці з набором «Гравімун» є 5 запаяних ампул, що дозволяє одночасно проводити 5 досліджень. До кожної ампули прикладено капіляр, яким набирають необхідну кількість досліджуваної сечі. Крім 5 ампул, є флакон з розчином натрій-хлорид-фосфатного буфера.

Постановка реакції:

Ампулу відкривають напилком ідо вмісту додають 0,4 мл буфера.
Негайно до тієї ж ампули капіляром додають 2 краплі обов'язково свіжої ранкової профільтрованої сечі.
Вміст ампули перемішують, після чого залишають її в коробці на 2 години при кімнатній температурі.
Через 2 години фіксують результат. Якщо еритроцити осіли на дно ампули у вигляді кільця або кнопки, тобто не відбулося аглютинації, результат реакції оцінюють як позитивний. Якщо еритроцити розподілилися дифузно, результат негативний.

Реакція залишається позитивною доти, доки ворсини хоріону зберігають зв'язок з материнським кровотоком, що має місце при неповних абортах та порушеній позаматковій вагітності.

Необхідно пам'ятати, що всі реакції визначення ХГ для ранньої діагностики вагітності доповнюють клінічні спостереження. Тому слід враховувати клінічні та лабораторні дані. Іноді мають місце хибнопозитивні результати: у разі підвищення кількості гонадотропінів у клімактеричному періоді, пухлинах гіпофіза, гормонотерапії.