Хвороби худоби, Фіксація матеріалу
Фіксація матеріалу
Загальні відомості. Сутність фіксації полягає в тому, щоб зберегти взяті шматочки органів і тканин від гниття та ферментативних процесів. При фіксації тканини зазнають ряду фізико-хімічних змін, істотним з яких є швидке згортання білків і частково ліпоїдів і перехід їх у такий стан, при якому вони не змінюються від тривалого зберігання та під час подальших обробок. Фіксація проводиться у рідинах різного складу. Найбільш уживаними є: формалін, спирт, рідше ацетон, сулема та ін.
Фіксація формаліном. Продажний формалін (40% водний розчин формальдегіду) застосовується в 10%, 15% розчині (10,0-15,0 продажного формаліну на 90,0-85,0 води). Вказана концентрація порівняно швидко (48-72 год.) просочує тканину і добре фіксує її. Не можна фіксувати матеріал формаліном високої концентрації або нерозведеному продажному формаліні. У цьому випадку поверхневі шари тканини дуже швидко ущільнюються і утворюють скоринку, яка перешкоджає проникненню фіксуючої рідини вглиб, де процеси аутолізу можуть продовжуватися. У зв'язку з тим, що у формаліні завжди міститься якась кількість мурашиної кислоти, яка може негативно вплинути на тканину і перешкодити деяким методам подальшої обробки матеріалу (сріблення та ін.), його слід нейтралізувати крейдою. На 100 г продажного формаліну (40% формальдегіду) додається 10 г крейди. Вміст кілька разів збовтують, потім дають відстоятися і крейда осідає на дно посуду. Слід також мати на увазі, що при зберіганніФормаліну в холодному приміщенні формальдегід здатний до полімеризації та випадання з міцних розчинів у вигляді білих опадів. З метою попередження цього рекомендують зберігати формалін у теплому приміщенні та темному посуді. Шматочки тканини, взяті для гістологічного дослідження, не повинні бути товщі 0,5 см і не повинні щільно прилягати до стінок банки, для цього їх кладуть на вату або фільтрувальний папір. Об'єм фіксуючої рідини повинен перевищувати приблизно 10 разів обсяг взятого матеріалу. Фіксація формаліном неприпустима в тих випадках, коли в тканині, що досліджується, бажано виявити речовини, розчинні у воді, наприклад глікоген.
У випадках, коли потрібне швидке дослідження, фіксацію шматочків тканини проводять у формаліні, нагрітій до 85-90 °. Тривалість фіксації шматочків товщиною 2-3 мм за такої температури 10-15 хвилин. При тривалому зберіганні матеріалу у формаліні у тканинах утворюються темно-бурі опади, які забруднюють препарати. Для видалення опадів рекомендується опускати гістологічні зрізи в 2-3% розчин перекису водню, 1% розчин їдкого калію та ін, потім кілька разів промити водою.
Фіксація спиртом. Цей метод доцільний тільки в тих випадках, коли необхідно зафіксувати в тканинах речовини, розчинні у воді та водних розчинах інших фіксаторів. Для фіксації застосовується спирт 95 чи 100°. Спирт, витягаючи воду зі шматочків тканини, сам розбавляється і стає менш міцним. Тому рекомендується міняти спирт кілька разів.