Мікробіологічна діагностика стафілококових інфекцій
Методи мікробіологічної діагностики стафілококових захворювань відображені у схемі 1. Виконується наступний комплекс методів дослідження.
Бактеріоскопічний метод- мікроскопія мазків з матеріалу від хворого, пофарбованих за Грамом. Виявлення у мазках коків, що розташовуються невеликими групами по 2-3 бактерії; Типове розташування у вигляді грона винограду характерне для чистих культур стафілокока (рис. 1 – кольорова вкладка).
Бактеріологічний метод.Досліджуваний матеріал засівають на чашки з жовтково-сольовим (ЖСА) та кров'яним МПА, інкубують при 37 0 С на добу. На 2 день враховують характер
зростання колоній обох середовищах. На жовтково-сольовому агарі колонії стафілокока мають рівні краї, гладку поверхню, навколо колонії утворюється райдужний віночок в результаті розщеплення лецитину яєчного жовтка ферментом лецитовітелазою; Колір пігменту колоній варіює від золотистого до білого. На кров'яному МПА навколо колоній утворюються зони
гемолізу. З типових для стафілококу колоній роблять мазок, фарбують його за Грамом, мікроскопують. Решту колонії пересівають на скошений МПА для одержання чистої культури. На 3 день проводять ідентифікацію виділеної культури стафілокока з диференціацією основних видів відповідно до таблиці 2, визначають чутливість до антибіотиків методом паперових дисків і фаговар (набір для фаготипування складається з фагів 21 типу, розділених на 4 групи; при внутрішньолікарняних інфекціях7 часто зустрічаються фаго та 80).
Таблиця 1.Етіологія бактеріальних ранових та гнійно-запальних інфекцій
Enterococcusfaecalis,Staphylococcusaureus,Staphylococcushyicus,Staphylococcusepidermidis,Staphylococcussaprophyticus,Staphylococcushaemolyticus,Staphylococcushominis,Streptococcuspyogenes,Streptococcusagalactiae,Erysipelotrixrhusiopathiae
Неспороутворюючі грампозитивні бактерії
Неспороутворюючі грамнегативні бактерії
Peptostreptococcus spp, Propionibacterium spp
Споротворчі грампозитивні бактерії
Clostridium perfringens, Clostridium novy, Clostridium oedematiens, Clostridium septicum, Clostridium sordelli, Clostridium histolyticum, Clostridium sporogenes, Clostridium ramosum
Схема 1.Мікробіологічна діагностика стафілококових інфекцій
Матеріал: гній, ранове відділення, пунктати з порожнин і абсцесів, кров, мокротиння, сеча, ліквор, блювотні маси, випорожнення, залишки їжі.
Виявлення грампозитивних коків (групами по 2-3 клітини) у мазках з матеріалу від хворого, пофарбованих за Грамом
РНГА або РН для визначення α-антитоксину у сироватці крові хворих на хронічні стафілококові інфекції. ІФА для визначення антитіл до стафілококу. Має допоміжне значення
1 день.Посів матеріалу на чашки з жовтково-сольовим (ЖСА), кров'яним МПА, цукровим МПБ.
2 день -облік характеру зростання колоній. На ЖСА колонії стафілокока з рівними краями, гладкою поверхнею, райдужним віночком навколо, колір від золотистого до білого.
На кров'яному МПА - зони гемолізу, МПБ - рівномірне помутніння. У мазку з колоній у забарвленні за Грамом – коки у вигляді грона винограду. Пересівши решту колонії на скошений МПА для отримання чистої культури, а з цукрового МПБ на кров'яний МПА і ЖСА для отримання ізольованих колоній.
3 день- ідентифікаціявиділеної культури стафілокока, диференціація видів за біохімічними властивостями, визначення чутливості до антибіотиків та фаговару. Виділення чистої культури із ЖСА та кров'яного МПА.
4 день.Висновок про вид стафілокока. Ідентифікація культури, виділеної із цукрового МСБ
5 день.Висновок про вид стафілокока, виділеного із цукрового МПБ.
Таблиця 2.Диференціація основних видів стафілокока
Анаеробна ферментація глюкози
Анаеробна ферментація маніту
Чутливість до новобіоцину
Позначення: (+) - Наявність ознаки; (-) - Відсутність ознаки; S-чутливий; R-резистентний.
Для виявленняплазмокоагулазицитратну плазму крові кролика розводять у 2 рази, розливають по 0,4 мл у пробірки, куди вносять петлею культуру стафілококів. Результати реєструють через 2, 4, 24 години. За наявності плазмокоагулази утворюється потік.
У деяких випадках у виділених чистих культур стафілококу визначають наявністьДНК-ази, каталази, лізоцимної активності, фібринолізину, гіалуронідази.
Лізоцимну активністьвиявляють по зонах просвітлення навколо колоній стафілокока при його посіві на МПА у чашках Петрі з культуроюMicrococcusluteus.
Визначення ДНК-ази.Добову агарову культуру стафілококу засівають на МПА в чашці Петрі, що містить ДНК. Після інкубації посівів при температурі 37 0 С протягом 18-24 годин поверхню МПА заливають 1N розчином соляної кислоти. Наявність ДНК-ази характеризується появою зони просвітлення довкола колоній.
Каталазний тест.Чисту культуру стафілококу вносять у краплю 3%-10%-го розчину перекису водню на склі і розтирають круговими рухами. За наявності каталази перекис воднюрозкладається з утворенням бульбашок кисню.
Cерологічний методу діагностиці стафілококових інфекцій має допоміжне значення, використовуючись, в основному, для діагностики хронічних процесів (остеомієліт, септикопіємія та ін.). Для визначення антитіл до токсину стафілококу застосовують РНГА з еритроцитарним діагностикумом, навантаженим α-токсином стафілокока або РН (реакція нейтралізації гемолітичної активності стафілококового токсину антитоксинами сироватки крові хворого у присутності еритроцитів кролика). У здорових осіб титр стафілококового антитоксину становить 0,5-4 АЕ. Розроблено також ІФА.