Мікроскопія мазків із вагінального слизу
Діагностика вагітності кобил
Для дослідження на фолікулін у тварини беруть сечу за допомогою катетера або шляхом вичікування природного сечовиділення. Сеча перед ін'єкцією мишам піддається обробці ефіром зниження її токсичності. Для цього сеча обстоюється. Прозорий шар, що утворився зверху, зливається в кількості до 10 мл, підливається оцтова кислота для створення слабокислої реакції і додається ефір в рівному обсязі. Після цього сеча струшується протягом 5 хвилин. Потім вміст пробірки дають відстоятися протягом 10 хвилин; ефір зливають, а сечу залишають у відкритій посудині на кілька годин для повного видалення залишків ефіру. Тоді розбавляють сечу в 3 рази дистильованою водою і в такому вигляді впорскують під шкіру мишам в шість прийомів протягом 3 днів. Для виявлення фолікуліну сеча вводиться кастрованим мишам-самкам або інфантильним.
Для уточнення діагнозу сеча або кров від кожної тварини, що досліджується на вагітність, вводиться 3–4 мишам. За наявності досліджуваної рідини статевих гормонів течка у мишей з'являється через 72–100 годин після початку ін'єкції. Для виявлення тічки, починаючи з ранку 3-го дня, від мишей за допомогою тампона беруть двічі на день виділення з піхви. З отриманого слизу роблять на предметному склі у краплі води мазок, який розглядають під мікроскопом.
За наявності тічки у мишей у мазку виявляються лише суцільні маси клітин ороговілого без'ядерного епітелію. У період спокою у мазку виявляються лейкоцити та ядерні епітеліальні клітини.
Реакцію тічки можна підтвердити розтин піддослідних мишей, при якому виявляють збільшення та гіперемію матки. При реакції на пролан необхідно для додаткової перевірки розкрити одну з піддослідних мишей та у разі позитивногорезультату знаходять збільшення яєчників, присутність у них зрілих фолікулів, червоних кров'яних точок на місці граафових бульбашок, що розкрилися, і навіть жовтих тіл. Крім того, добре помітні гіпертрофія та гіперемія статевих органів.
Мінімальна кількість гіпофізарного або фолікулярного гормону, здатна викликати реакцію тічки у самок-мишей, називають мишачою одиницею.
З 3 місяців жереба і до пологів визначення жереба роблять на підставі виявлення в сечі лошат кобили величезної кількості гормону фолікуліну, що обчислюється в десятках і навіть сотнях тисяч мишачих одиниць в літрі сечі. Щоправда, гормон фолікулін виявляється і лошат і на початку лоша кобил, але кількість його обчислюється тільки в декількох тисячах мишачих одиниць в літрі сечі. Таким чином, за різницею в кількості гормону фолікуліну можна судити про лошатко кобили.
Мікроскопія мазків з піхвового слизу.Слиз беруть із шийки матки (краще з її гирла) стерильним щільним ватним тампоном за допомогою корнцангу. Ці тампони роблять рівні мазки на сухому, знежиреному предметному склі. Мазки висушують на повітрі, фіксують метиловим спиртом протягом 5 хвилин, забарвлюють фарбою Гімза (на 1 мл дистильованої води 2 г краплі фарби) протягом 25-30 хвилин, ретельно змивають фарбу, висушують і мікроскопують.
У мазках зі слизу, взятого у лошат кобил, знаходять значну кількість клітин миготливого епітелію, слизові кулі блакитного кольору, поодинокі клітини плоского епітелію і іноді незначну кількість лейкоцитів.
У мазках зі слизу, взятого у лошат кобил, виявляють велику кількість лейкоцитів і клітин плоского епітелію, поодинокі клітини миготливого епітелію. Шарів із слизу немає. Слиз на мазку лежить рівним шаром.
Біологічне дослідження крові та сечі.У період вагітності в крові та сечі кобил накопичується досить велика кількість гонадотропних (фолікулостимулюючий гормон – ФСГ та лютеїнізуючий гормон – ЛГ) та гонадальних (фолікулін) гормонів, що стимулюють функціональну діяльність статевих органів.
Діагностика жереба за результатами біологічного дослідження крові або сечі заснована на виявленні кількісного вмісту в них названих гормонів. Цей метод діагностики відрізняється високою точністю (95-100%), але, незважаючи на це, при масових дослідженнях на жереб, він застосовується рідко через складність і дорожнечу його виконання.
Для виявлення гормонів у крові та сечі лошат кобил існують такі способи: 1) Колла і Харта, 2) Фрідмана та Шнейдера, 3) Цондека та Ашгейма.
Для цієї ж мети запропонована пересадка яєчника у передню камеру ока кастрованих кролиць. При вдалій операції, з ослабленням запальної реакції, рогівка просвітлюється (у перші дні післяопераційного періоду вона мутніє), і за яєчником, що щепився, дуже просто і зручно вести спостереження.
Після введення випробуваної сироватки у вушну вену кролиць у трансплантаті можна бачити крововилив, через три дні – збільшення фолікулів, а через п'ять днів – ясну лютеїнізацію.
Реакція Цондека та Ашгейма.Сутність реакції - виявлення фолікуліну в сечі мул крові вагітних.
У лошат кобили в сечі фолікуліну в сотні разів більше, ніж у крові, тому при постановці реакції використовують сечу. Вміст фолікуліну в сечі збільшується з плином жеребкування: у перші три місяці коливається в межах 300-800 МО, з третього місяця до жерсті досягає 28 000-500 000 і навіть 1 000 000 МО в 1 л сечі.
Ці дані вказують надоцільність застосування фолікулінової реакції переважно після третього місяця жеребу, а на більш ранній стадії – дослідження на пролан.
Техніка реакції. Сечу пропускають через паперовий фільтр, підкислюють оцтовою кислотою до слабкокислої реакції (лакмус). Для звільнення від токсичних речовин до сечі додають рівну кількість ефіру та ретельно збовтують. Ефір зливають, а сечу залишають стояти відкритою до випаровування залишків ефіру (доки залишиться слабкий запах). Обробка ефіром підвищує активність фолікуліну.
Лабораторними тваринами є овариоэктомированные білі миші (кастрати), витримані протягом двох тижнів після операції і перевірені відсутність течки. Можна використовувати інфантильні самок мишей; у кожної з них пофарбувати шерсть на умовному місці і протягом трьох днів двічі на день вводити під шкіру: