Оснащення мікробіологічної лабораторії пивобезалкогольного підприємства
Журнал «ПИВО та НАПОЇ» N 4 2004 рік
ОСНАЩЕННЯ МІКРОБІОЛОГІЧНОЇ ЛАБОРАТОРІЇ ПИВОБЕЗАЛКАГОЛЬНОГО ПІДПРИЄМСТВА В.С. Ісаєва, Н.М. Раттель « МІЦ «Пиво та напої XXI століття Н.В. Дев'ятова, А.М. Пустиннікова ТОВ «ГЕМ» У 60-ті роки минулого століття був дуже популярний кінофільм «Звичайна людина», головна героїня якого говорила, що «мікроби такі маленькі, що навіть рідна мама їх не бачить» . Про те, чи бачить їхня рідна мама судити, звичайно, важко, але те, що мікробіологи мають цю дивовижну здатність – незаперечний факт. Однак, заводським мікробіологам для того, щоб реалізувати цю здатність і тим самим виконати своє основне завдання - не допустити появи інфекції на заводі, а у разі її появи - швидко виявити джерело інфікування і усунути його - дуже багато чого треба, а саме того, що сучасною мовою досить нудно називається « поживні середовища і лабораторні приналежності ». тих чи інших мікроорганізмів, суттєво спрощує це завдання. Наприклад, виявлення молочнокислих бактерій - одних із найсерйозніших мікроорганізмів - шкідників пивоварного і безалкогольного виробництва - вже кілька років із великим успіхом використовується середовище VLB-S-7-S ( бульйон і агар), що поставляється в Україну фірмою «Гем». Ці два середовища були спеціально розроблені Експериментальним та освітнім інститутом пивоваріння Берліна для якісної та кількісної оцінки обсімененості молочнокислимибактеріями насіннєвих дріжджів та готового продукту. Важлива перевага цього середовища полягає в її високій селективності, що вигідно відрізняє її від інших середовищ, що використовуються для виявлення молочнокислих бактерій. На середовищі VLB-S7-S, на противагу, наприклад, середовищі МRS, практично не ростуть дріжджі та інші бактерії, крім молочнокислих. вона змінює колір із зеленого на жовтий, що дозволяє легко визначити наявність інфікованості і навіть, певною мірою, встановити її рівень. -S-бульйон), так і у вигляді агаризованого середовища (VLB-S7-S-агар). Вибір форми середовища визначається завданням, що стоїть перед мікробіологом. Процес виявлення джерела інфекції можна здійснювати двома способами. Перший спосіб кількісний і заснований на висіві зразка з підрахунком кількості виросли в даному обсязі проби сторонніх мікроорганізмів. На основі підучених даних визначають, чи перевищує виявлений рівень обсіменіння допустима кількість цих мікроорганізмів в даній точці контролю, визначене схемою мікробіологічного контролю, що діє на даному заводі. Другий спосіб - використання якісної моделі, тобто висів на середовища з отриманням відповіді - є зростання мікроорганізмів чи ні. Для швидкого виявлення джерела інфекції іноді другий спосіб буває краще внаслідок своєї простоти, так як при пошуку джерела інфекції часто важливий сам факт появи мікроорганізму на якійсь стадії процесу, але не важ-но його кількість. Прикладом ефективного визначення молочнокислих бактерій якісним методом є їх виявлення за допомогою рідкого середовища VLB-S7-S-бульйон. У МІЦ «Пиво і напої XXI століття», фахівці якого на прохання підприємств часто проводять виявлення джерел інфікування на різних стадіях виробництва, активно використовують це середовище таким чином. Досліджувану пробу, обсяг якої вибирається в залежності від передбачуваного ступеня інфікування виробництва молочнокислими бактеріями, фільтрують через мембранний фільтр 0,45 мкм на встановленні мембранної фільтрації. Після закінчення фільтрації форагмент мембранного фільтра переносять у стерильну пробірку, яку попередньо наливають VLB-S7-S-бульйон. Культивування молочнокислих бактерій здійснюють при температурі 300С, бажано - в анаеростаті. Однак, як показала практика, у тому випадку, якщо рівень середовища в пробірці досить високий, можливе вирощування молочнокислих бактерій без анаеростату. Пробірки необхідно культивувати не менше 5-7 діб, але при дуже низькому рівні інфікування тривалість культивування рекомендується збільшувати. Для виявлення точної динаміки появи молочнокислих бактерій за стадіями виробництва напоїв та їх кількісного визначення рекомендується використовувати VLB-S7-S-агар. У цьому випадку після закінчення фільтрації мембранний фільтр переносять не в пробірку з VLB-S7-S-бульйоном, а поміщають у чашки Петрі на поверхню VLB-S7-S-агару. Чашки поміщають в анаеростат і культивування ведуть при тих же умовах, що і при використанні VLB-S7-S-бульйона. . Фахівці - мікробіологи МІЦ «Пиво та напої XXI століття», які багато років співпрацюють з ТОВ «ГЕМ», перевірили в роботі багато нових мікробіологічних приладів та звернули увагу на особливу зручність та фукціональність.використання деяких з них. Це в першу чергу відноситься до газопроникних пробок з пресованої целюлози для зберігання стерильних середовищ та культур. Ці пробки повністю замінюють пробки з вати, виготовлення яких потребує багато часу і терпіння. Вони надійно ізолюють мікробіологічні зразки та культури мікроорганізмів від попадання сторонніх мікроорганізмів з навколишнього середовища, забезпечуючи внаслідок гарної проникності для повітря активне зростання аеробних та факультативно-аеробних мікроорганізмів. Ці пробки витримують багаторазову стерилізацію в сухожаровій шафі або автоклаві і загалом дуже зручні у використанні. З урахуванням особливостей пересівів (фламбування, можливість замокання і т.п.) за даними МІЦ «Пиво і напої XXI століття», ці пробки використовуються більше 10 разів. Вони дають можливість при використанні однієї чашки провести одночасне виявлення мікроорганізмів на різних селективних середовищах при однаковій температурі, наприклад, для виявлення молочнокислих бактерій використовувати живильні агаризовані середовища VLB-S7-S-, NBB і MRS. У цьому випадку досліджуваний зразок фільтрують через мембранний фільтр 0,45 мкм на установці мембранної фільтрації. Після закінчення фільтрації мембранний фільтр розрізають частини, число яких відповідає секціям чашки. Кожна частина фільтра поміщається на поверхню агаризованих середовищ, заздалегідь розлитих у відповідні секції. Ці чашки також дають можливість на одному середовищі виявити мікроорганізми з 2-х або 3-х зразків одночасно. 45мкм на установці мембранної фільтрації. Після закінчення фільтрації частини різних мембранних фільтрів поміщають наповерхня агаризованого середовища, заздалегідь розлитої в секції. Таким чином, багатосекційні чашки значно знижують витрату поживних середовищ і зручні у використанні. Для мінізаводів і заводів невеликої потужності, які розводять чисту культуру дріжджів без установок ЧКД, можна рекомендувати використання полімерних контейнерів місткістю 10 л, які можна багаторазово автоклавувати. Ці контейнери чудово замінюють скляні колби і банки, істотно полегшуючи процес автоклавування великих обсягів поживних середовищ і сприяючи безпеці цього процесу. Дуже зручні у використанні скляні спиртівки з металевим оголовком і дуже хорошим ступенем притирання, а також міліметрові предметні скла з однаковою товщиною по всій поверхні, що виключає необхідність додаткової центрування мікроскопа при мікроскопуванні двох і більше препаратів, приготовлених на одному предметному склі або при мікроскопуванні препаратів, приготованих на різних предметних стеклах. Для відбору мазків можна рекомендувати практичні тубсери (стерильні ватні тампони з тримачем, поміщені в пластикові пробірки). При відборі проб, у ці пробірки можна залити будь-яке рідке живильне середовище, наприклад, при виявленні молочнокислих бактерій - VLB-S7-S-бульйон, при виявленні бактерій пологів Пектинатус і Мегасфера - NBB -бульйон. Будь-який мікробіологічний аналіз закінчується знищенням мікроорганізмів шляхом автоклавування («вбивкою», як висловлюються мікробіологи). Дуже добре підходять для цієї мети (особливо при використанні одноразового посуду) спеціальні мішки з термостійкого (до + 1500С) полімерного матеріалу місткістю 10-30 л, які складається матеріал, призначений для «вбивки» в автоклаві. При використанніодноразового посуду після автоклавування мішок з дезактивованим вмістом викидається у відведене для цього місце. Та тому, що кожен технолог знає, що якісний продукт від неякісного відрізняє увагу до дрібниць на всіх етапах виробництва та контролю. Саме завдяки цим дрібницям, дивлячись на Жигулі та будь-яку іномарку, ніколи не сплутаєш, де якусь з машин зроблено. -Дарти виробництва та контролю. І перевагу матимуть ті з них, хто приступить до цього раніше.