Показники крові у риб у нормі
Лейкограма ставкових риб
Біохімічний метод
Прибіохімічному дослідженнівизначають такі показники крові риб як: рівень глюкози, кальцію, фосфору, загального білка, білірубіну, ЛФ, ЛДГ, АлАт, АсАт та ін.
Імунологічний метод
Дозволяє визначати у сироватці крові фракції білків: альбумінів, α, β, γ-глобулінів, імуноглобулінів тощо.
Серологічний метод
Дозволяє в сироватці крові риб виявити специфічні антитіла або антиген і встановити напруженість імунітету до збудників заразних хвороб.
У іхтіопатології застосовуютьпрямі (РА - реакція аглютинації, РП - реакція преципітації)інепрямі (РН - реакція нейтралізації, РІГА - реакція імунної гемагглютинації, РПГ - реакція пасивної гемагглютинації, ОФР , РНДФ – реакція непрямої імунофлуоресценції)серологічні реакції.
Способи взяття крові у риб
Кров для дослідження у риб береться зсерця,хвостової артерії, кукси хвостаабозябрових вен. Вибір способу взяття крові залежить від розміру риби та обсягу, необхідного для аналізу.
Взяття крові проводять, попередньо знявши луску, видаливши слиз і, обробивши шкіру 70% спиртом.
1. При взятті крові зсерця,місце уколу знаходиться в середині відрізка, що з'єднує основу грудних плавців (у форелі) і трохи вище цієї точки - у коропових риб. Голку вводять у місце уколу, під кутом 45°, щодо фронтальної площини.
2. При взятті крові з хвостової артерії місце уколу знаходиться в точці, утвореній при умовному перетині середньої лінії і лінії, що йде перпендикулярно від анального отвору у сеголетков, і від заднього краю анального плавця - укоропових риб старшого віку
3. При взятті крові з кукси хвоста зрізають спинний і анальний плавці, видаляють луску, слиз, протирають шкіру спиртом, потім відсікають хвостове стебло по медіальній лінії за анальним плавцем і збирають кров у стерильний посуд.
4. Взяття крові можливе ззябрових вен. Попередньо видаляють зяброву кришку і вводять ін'єкційну голку у вену, в основі однієї з зябрових дуг.
З отриманої крові відразу ж готують тонкі мазки, які забарвлюють за Паппенгеймом. Для цього висушені мазки занурюють у кювету з розчином Май-Грюнвальда (0,3-0,5 г еозинметиленового синього + 100 мл метилового спирту) на 5 хвилин, потім промивають дистильованою водою (рН = 6,81) протягом 2 хвилин і дофарбовують у розчині Романівського 25-30 хвилин. Пофарбовані мазки промивають водопровідною водою та висушують на повітрі. У кожному мазку підраховують 100 клітин та виводять лейкограму.
Спеціальні лабораторні методи досліджень:
5. Біологічна проба.
Паразитологічне дослідження
Це послідовне розтин органів та тканин з метою виявлення паразитів. Для дослідження береться не менше 15 живих або щойно заснули риб кожного виду та віку і не менше 25 екземплярів личинок риб.
Для виявлення паразитів використовують компресійний спосіб, коли тканину або орган поміщають між склом, здавлюють до прозорості, а потім досліджують під мікроскопом. Для визначення інтенсивності інвазії гельмінтів та ракоподібних враховують в абсолютних величинах, а найпростіших – у 25 полях зору мікроскопа (7 х 10, 7 х 40 залежно від величини паразита).
Порядок проведення роботи наступний:
1. Огляд риби (крустацеози, бделлози,постодиплостомоз, філометроїдоз). Зішкріб скальпелем слизу з поверхні тіла та дослідження її під мікроскопом у краплі води або ізотонічного розчину натрію хлориду під покривним склом (найпростіші).
2. Беруть кров із серця або хвостової артерії та готують мазок, який фіксують 5 хвилин у метиловому спирті та забарвлюють за методом Романовського.
Відразу після взяття крові розкривають порожнину серця, випускають кров на скло і під мікроскопом досліджують на наявність сангвінікол.
3. Мікроскопують плавці (найпростіші, моногенеї, рачки).
4. Досліджують зябра. Видаляють зяброві кришки, з двох сторін відсікають зяброві дуги і досліджують їх на наявність великих паразитів, потім роблять зіскрібок і переглядають його під малим і більшим збільшенням. Скальпелем відокремлюють зяброві пелюстки від дуг і компресійним способом переглядають під мікроскопом (найпростіші, моногенеї, личинки трематод, цисти мікроспоридій).
5. Проводять дослідження очей. Відокремлюють очне яблуко, витягають кришталик. Компресійним способом досліджують під мікроскопом (диплостомоз, міксоспоридію).
6. Розкривають порожнину тіла, оглядають та витягують внутрішні органи: кишечник і, пов'язані з ним, органи (печінка, жовчний міхур, селезінку), кишечник відсікають у ротової порожнини та анального отвору; гонади, плавальний міхур, нирки, сечовий міхур. Відпрепаровані органи поміщають у бактеріологічні чашки, стежачи за тим, щоб вони не торкалися один одного і були постійно вологими.
Оглядають черевну порожнину (личинки цестод, нематод, трематод). Потім досліджують жовчний та сечовий бульбашки, їх розрізають та вивчають вміст під мікроскопом (амебоїди, міксоспоридії, трематоди, інфузорії). Досліджують печінку, селезінку, гонади, нирки, жирову тканину. Невеликий шматочок відкожного органу досліджують під мікроскопом під мікроскопом на наявність спор міксоспоридій. Потім компресійним способом під МШС (трематоди, цестоди, нематоди).
Кишечник поділяють на невеликі частини і кожну розрізають уздовж, здійснюючи огляд вмісту (мікро- та макроогляд). Потім під мікроскопом досліджують зіскрібок зі слизової оболонки кишечника і компресійно вивчають кишечник (найпростіші, трематоди, цестоди, нематоди).
Плавальний міхур оглядають зовні, а потім роблять зіскрібок і компресійно досліджують під мікроскопом.
Мускулатуру звільняють від шкіри, роблять через 0,5 мм поперечні розрізи, візуально оглядають, розсовуючи їх препарувальною голкою. Компресійно досліджують 1 см мускулатури (цестоди, нематоди, трематоди).
Мікологічне дослідження
Для мікологічного дослідження беруть проби від щойно загиблих чи живих риб. У замороженому вигляді їх можна зберігати до 3-ї доби, а в консерванті до 2-ї доби.
Підтвердження або виключення мікозної природи хвороби здійснюється за допомогою таких методів:
-мікроскопічне дослідження– найважливіший метод виявлення та дослідження грибів, що дозволяє встановити наявність гриба, його локалізацію, котрий іноді вид;
-гістологічне дослідження– метод дослідження ураженої тканини при мікозах, є основним методом діагностики, оскільки багато грибів неможливо культивувати на штучних живильних середовищах;
Культивування грибів дозволяє вивчити морфологію колоній, типові форми спороношення, зберегти культури та отримати інфекційний агент для біопроби.
Бактеріологічне дослідження
Дослідження засноване набактеріоскопічномутасерологічномуметодах дослідження.
Бактеріоскопічнийметод дослідження дозволяє виявити в патматеріалі бактерії та орієнтовно діагностувати захворювання (мікобактеріоз, вібріоз). Бактеріологічний метод дослідження має найбільш важливе значення, оскільки дозволяє отримати чисту культуру мікробів, вивчити їх морфо-культуральні властивості, біохімічні властивості, визначити вірулентність та чутливість до антибіотиків, що особливо важливо при виборі лікувальних препаратів.
Серологічнийметод застосовують при імунологічних дослідженнях: додатковому типуванні збудника, виявленні специфічних антитіл у сироватці крові хворих на риб.