Поліедрин - Довідник хіміка 21
Хімія та хімічна технологія
Бакуловіруси інфікують лише безхребетних, у тому числі багатьох комах. У ході інфекційного процесу утворюються дві форми. Одна представлена окремими віріонами, які вивільняються з інфікованої клітини господаря, як правило клітини середньої кишки, і здатні інфікувати інші клітини цього органу. Друга складається з багатьох віріонів, укладених у білковий матрикс. Білок цього матриксу називається поліедрін, а сама структура - поліедроном. Синтез поліедрину починається через 36-48 годин після інфекції і триває 4-5 діб, поки заражені клітини не лізують і господарський організм не загине. Після цього безліч таких частинок вивільняється та потрапляє в середу, де від інактивації їх захищає білковий.
Промотор гена поліедрину надзвичайно сильний, а цикл розвитку вірусу залежить від наявності самого гена. Отже, заміна останнього геном чужорідного білка з подальшою інокуляцією отриманим рекомбінантним бакуловірусом культури клітин комахи може призвести до синтезу великої кількості гетерологічного білка, який завдяки подібності систем внесення посттранс-ляційних модифікацій у комах і ссавців буде близьким. того білка, який цікавить дослідника. Виходячи з цього на основі бакуловірусів були розроблені вектори для експресії генів, що кодують білки ссавців та вірусів тварин.[c.144]
Система на основі бакмід дозволяє створити ще одну плазміду Е. соІ, в якій між промотором і сайтом термінації гена поліедрину вбудований ген-міщень (плазміда-донор). У донорній плазміді ген стійкості до гентаміцину та одиниця експресії гена-міщені фланковані нуклеотидними.послідовностями, які[c.147]
Поліедрін (Polyhedrin) Білок капсиду бакуловірусів накопичується у великих кількостях у ядрах уражених клітин комах.[c.557]
Інтерес до бакуловірусів як потенційних переносників рекомбінантних генів і систем, що забезпечують їхню експресію, виник після виявлення їх здатності до синтезу великої кількості вірусних білків на пізніх стадіях інфекції. Зокрема, це стосується вірусних поліедрину та білка р10, гени яких знаходяться під контролем сильних пізніх промоторів і які можуть бути видалені без шкоди для розмноження вірусів. Тому заміщення зазначених генів рекомбінантними супроводжується посиленою експресією останніх.[c.182]
Інтерферонові гени клоновані в векторах експресії в бактеріальних і дріжджових клітинах, в клітинах комах і ссавців. Як промотори використовували переносні промотори Пташне і співр. [235], промотор фага Я, [55], промотор поліедрину [224а] та промотор 1гр [78, 278]. Інтерферони також експресували у вигляді гібридного білка[c.44]
Субгрупа А складається з вірусів ядерного поліедрозу (КРУ), які в процесі внутрішньоклітинного розвитку утворюють в ядрі клітини кристалічні білкові тіла включення - поліедри, більш-менш геометрично правильна форма і розміри яких є специфічними для кожного виду вірусу. Поліедри складаються з білка поліедрину, і їх розміри коливаються від 1 до 15 мкм. При кристалізації поліедрину в ядрах клітин паличкоподібні вірусні частинки, що формуються тут же, в більшості потрапляють всередину поліедрів. Поверхня поліедрів покривається полісахаридною мембраною.[c.415]
Регуляторні механізми, що забезпечують синтез поліедрину або гранулину, представляють значнийінтерес, оскільки ці білки продукуються у більших кількостях, ніж будь-які інші відомі вірусні білки, синтезовані при інфікуванні еукаріотичних клітин. Поліедрин до результату інфекції[c.415]
Важливо відзначити, що поліедрін, який синтезується в цитоплазмі клітини, транспортується в ядро, де він кристалізується. Можливо, таким чином поліедрін видаляється із внутрішньоклітинного пулу, що зменшує негативний вплив суперпродукції даного чужорідного білка на метаболізм клітини та зумовлює його тривалий синтез.[c.416]
Одночасно з поліедрином у великій кількості синтезується р10 білок. Даний білок є структурним елементом скупчень волокон, що виявляються в ядрі і цитоплазмі клітин, інфікованих бакуповірусом, і відіграє важливу роль у формуванні електронно-щільних утворень в ядрі і в зборці поверхневої полісахаридної мембрани поліедрів.[c.416]
За допомогою розробленої векторної системи вірусу ядерного поліедрозу каліфорнійської совки в лабораторії Л. Міллера в 1984 р. було створено варіант даного вірусу, в геномі якого під контролем промотора гена поліедрину знаходився структурний ген /3-галактозі-дази Е. сої. При додаванні в середу галактози Xgal бляшки гібридного вірусу забарвлювалися в синій колір. Даний фенотипічний маркер потім успішно використовували в інших лабораторіях і для інших вірусів.[c.418]
Pu. 15.2. Нуклеотидна послідовність плазмід інтеграції в районі вбудованого ген поліедрину ДатШ-лінкера. Ініціаторний та термінаторний триплети обведені рамкою. Послідовність лінкера підкреслена. Прогалини в послідовностях позначають делецію[c.419]
Точка ініціації транскрипції гена поліедрину знаходиться в положенні - 49.[c.420]
Успіхи експериментів з клонування та експресії чужорідних генів у складі гена поліедрину вірусу ядерного поліедрозу каліфорнійської совки (табл. 15.2) демонструють перспективність застосування даного вектора для ефективної продукції білків різного походження. В даний час бакуловірусна система суперпродукції чужорідних білків є невід'ємною частиною багатьох генно-інженерних досліджень.[c.421]
Генетична інженерія (2004) - [c.415, c.416]