Прилади, методи та середовища для культивування анаеробів

Ексикатор – скляна лабораторна посудина з притертою кришкою. У його донній частині є додаткова ємність, куди наливається суміш пирогаллола та їдкого натру або гідросульфіту натрію та двовуглекислої соди. На сітку-підставку поміщають посіви та притирають кришку за допомогою вазеліну. Ексікатор поміщають у термостат.

Метод Фортнера. У чашку Петрі наливають поживний агар з 1-2% глюкози. Посередині чашки стерильним скальпелем вирізають канавку шириною приблизно 1 см. Одну половину чашки засівають культурою аеробів (сарцина, кишкова паличка), другу - культурою анаеробів або матеріалом, що досліджується на їх наявність. Засіяну чашку закривають, герметизують і поміщають дном вгору в термостат. Аероби, що швидко ростуть, поглинаючи кисень, створюють тим самим сприятливі умови для зростання анаеробних мікроорганізмів.

Метод Перетца. У стерильну чашку Петрі поміщають скляні палички, куди кладуть скляні пластинки чи предметні скла. У пробірку з 20 мл розплавленого та охолодженого до 50 0 С МПА з 10% глюкози (pH 7,0-7,2) вносять досліджуваний матеріал і додають 2-4 краплі 10% натрію гідросульфіту на 10% розчині вуглекислої соди. Вміст пробірки швидко перемішують і виливають у чашку з таким розрахунком, щоб агар заповнив простір між скляною пластинкою та дном чашки. Чашки інкубують при 37 0 С 24-48 годин. Колонії анаеробів виростають під скляною пластинкою.

Метод Вейон-Віньяля. У пробірку з 0,5% розплавленим і охолодженим до 40-45 0 З цукровим агаром вносять досліджуваний матеріал і перемішують. При необхідності матеріал розводять шляхом перенесення наступні 2-3 пробірки з розплавленим агаром. Вміст пробірок набирають у пастерівські піпетки. Після заповнення піпетки витягнутий кінець запаюють, апротилежний кінець закривають стерильною ваткою та заливають парафіном. Трубки поміщають у термостат; через 2-3 діб в агарі виростають глибинні колонії, видимі в світлі, які можна ізолювати. Для цього трубку надрізають напилком вище рівня наміченої колонії, надламують, а колонію вилучають петлею і пересівають для накопичення чистої культури у відповідне живильне середовище.

Метод Біттнера. До кришки чашки Петрі з посівом досліджуваного матеріалу або виділеної культури анаеробів прикріплюють пакет з фільтрувального паперу, що містить пирогаллол, К2СО3 і тальк. Чашку герметизують за допомогою парафіну або скотчу. Вміст пакету зволожується рахунок утворюється конденсату, і інгредієнти вступають у реакцію, що супроводжується поглинанням О2 і виділенням СО2.

Газ-пак (Generbag anaer). Система Generbag anaer складається з повітронепроникних пакетів, виготовлених з прозорої пластмаси та генераторів, що містять суміш речовин, що поглинають кисень. Послідовність роботи: вийняти генератор із пакета, помістити в нижню частину повітронепроникного пакета, потім помістити чашки (або пробірки) з посівами та за допомогою спеціальної скріпки закрити пакет. Інкубація при 37°С.

Середовище Кітта-Тароцці. Містить м'ясо-пептонний бульйон, 0,5% глюкози і 0,15% агару. На дно пробірки для адсорбції О2 поміщають шматочки вареної печінки або фаршу шаром 1-1,5 см і заливають 6-7 мл середовища. Середовище перед посівом регенерують (прогрівають 15-20 хв на водяній бані для видалення повітря, а потім швидко охолоджують). Після посіву середу заливають вазеліновим маслом та поміщають у термостат.

Напіврідкий цукровий агар (високий стовпчик). У пробірку з 6-7 мл розплавленого та охолодженого до 40-45 0 З напіврідкого поживного агару,містить 0,5-1% глюкози, вносять досліджуваний матеріал і перемішують. Посіви поміщають у термостат.

Середовище для контролю стерильності (СКС). Зростання багатьох анаеробних мікроорганізмів можливе тільки на середовищах з низьким окислювально-відновним потенціалом. Тому в середовищі додають відновники, наприклад, тіогликолеву кислоту або її сіль натрієву, цистеїн, аскорбінову кислоту. Функції відновників виконують інші компоненти середовища: глюкоза, пептон. СКС містить поживний бульйон, вітамінний препарат ЕКД, NaCl, Na2CO3, глюкозу, тіогліколят натрію, цистеїн, агар (0,75%). Середовище розливають у пробірки по 6-7 мл.

Контрольні питання

Завдання для виконання у процесі самопідготовки

У зошиті перепишіть схеми виділення чистих культур аеробів та анаеробів та впишіть мету посіву на кожному етапі.

Заповніть таблицю "Культивування анаеробів".

№Спосіб культивуванняСутність способуВикористовувані
приладиметодисереди
1.Фізичний
2.Хімічний
3.Біологічний
4.Комбінований

Самостійна робота студента на практичному занятті

1. Ознайомлення із поживними середовищами. Вивчіть живильні середовища та розподіліть їх за призначенням: основні, спеціальні, елективні, диференційно-діагностичні.

2. Методи посіву бактеріальних культур із дотриманням правил асептики. Ознайомтеся з особливостями техніки пересіву бактеріальних культур на щільні та рідкі живильні середовища.

3. Виділення чистої культури бактерій-аеробів. Ознайомтеся із методом отримання ізольованих колоній шляхом посіву на чашціз живильним середовищем (демонстрація викладачем). З суміші бактерій приготуйте мазок, пофарбуйте за Грамом, мікроскопуйте, замалюйте. Зробіть посів суміші бактерій на чашку з живильним середовищем, вкажіть мету посіву.

4. Методи культивування та виділення чистих культур анаеробів. Ознайомтеся з апаратурою для культивування анаеробів. З посіву на середовищі Кітта-Тароцці приготуйте мазок, пофарбуйте Грамом, мікроскопуйте, замалюйте. Уважно простежте за демонстрацією викладачем посіву методом Вейнберга в трубки Вейон-Віньяля.

ЗАНЯТТЯ 7

ВИДІЛЕННЯ ЧИСТИХ КУЛЬТУР БАКТЕРІЙ (ПРОДОВЖЕННЯ) МЕТОДИ СТЕРИЛІЗАЦІЇ

Знання методів стерилізації необхідне лікареві будь-якої спеціальності. Тому слід ретельно вивчити цей матеріал і знати саме методики, апаратуру, режим стерилізації.

Мета самопідготовки

Після самостійного вивчення теми студент має знати:

- культуральні характеристики бактерій;

- поняття про стерилізацію, дезінфекцію, асептику та антисептику, методи стерилізації;

Вихідний рівень знань

Для засвоєння матеріалу потрібно знати:

- схему виділення чистої культури аеробів та анаеробів;

- Умови, необхідні для культивування мікробів;

- характеристику зростання мікробів на щільних і рідких поживних середовищах; морфологію колоній бактерій, пігменти бактерій.

Мета заняття

1. Вивчити культуральні властивості бактерій.

2. Ознайомитись з особливостями бактеріологічного методу виділення чистих культур анаеробних мікроорганізмів.

3. Ознайомитись з основними методами стерилізації, що застосовуються у мікробіології та медицині.

План вивчення теми

1. Повторіть схему виділення чистоїкультури бактерій – аеробів та анаеробів.

2. Поняття про культуральні властивості мікробів;

а) умови, необхідні для культивування цього виду (живильне середовище, рН, гН2, температура, аеробні або анаеробні умови);

б) характер зростання цього виду мікробів на живильних середовищах.

3. Пігменти бактерій, їх характеристика.

4. Методи стерилізації.

Після вивчення теми студент має вміти

1. Охарактеризувати колонії мікроорганізмів.

2. Провести посів ізольованих колоній на скошений живильний агар.

3. Вибрати засоби, режим стерилізації відповідно до конкретних завдань.