Санітарно-мікробіологічне дослідження обладнання, рук та спецодягу персоналу
Бактеріальне забруднення визначають шляхом вивчення мікрофлори змивів, зроблених з рук та поверхонь досліджуваних об'єктів.
Залежно від цілей дослідження у змивах визначають:
1) загальну бактеріальну обсіменіння з перерахунком на 1 см 2 досліджуваної площі;
3) наявність золотистого стафілокока, синьогнійної палички та інших патогенних мікробів.
Вимоги до мікробіологічної чистоти: присутність БГКП, синьогнійної палички, протеїв, стафілококу в змивах не допускається.
Відбір проб. З робочих столів, обладнання, рук та спецодягу персоналу проби відбирають методом змивання стерильним ватним тампоном.
Взяття змивів роблять стерильним ватним тампоном або марлевими серветками, розміром 5х5 см, простерилізованими у паперових пакетах або чашках Петрі. Для зволоження тампонів та серветок у стерильні пробірки наливають по 2 мл стерильного фізіологічного розчину. Серветку захоплюють стерильним пінцетом, зволожують фізіологічним розчином з пробірки, після протирання об'єкта, що досліджується, поміщають в ту ж пробірку.
При контролі дрібних предметів змив забирають із поверхні всього предмета. При контролі предметів з великою поверхнею змив проводять у кількох місцях досліджуваного предмета площею приблизно 100-200 см 2 .
Змив зі шкіри операційного поля і рук хірургів виробляють стерильними марлевими серветками розміром 5х5 см 2 змоченими в розчині нейтралізатора або в фізіологічному розчині. Руки обстежуваного протирають, починаючи з тильної частини долоні, далі долоню, міжпальцеві поверхні, нігтьові ложа та піднігтьові поверхні.
Для визначення загального мікробного числа у досліджуваному змиві до 2 мл ізотонічного розчину хлориду натрію, що використовується для зволоженнятампона (або серветки), додають ще 8 мл і тампон ретельно відмивають струшуванням зі скляними намистами протягом 10 хв. Відмивну рідину (1:10) засівають глибинним способом по 0,5 мл на 2 чашки Петрі з МПА. Посіви інкубують при температурі 37°С протягом 48 годин. Потім підраховують кількість колоній, що виросли, роблячи перерахунок на 1 см 2 досліджуваної поверхні.
Для визначення БГКП виробляють посів у середу збагачення, для чого тампон (марлеву серветку) занурюють у середовище Кесслера або 10-20% жовчний бульйон. Через добу інкубування при 37 ° С роблять пересівання на середовище Ендо. Після інкубації в термостаті при 37°С протягом 18-24 год, підозрілі колонії мікроскопують, пересівають у середу Гісса з глюкозою і витримують при 43°С 24 год. Потім роблять облік результатів.
Для виявлення стафілококів роблять посів безпосередньо з тампона на жовтково-сольовий агар. Крім того, як середовище накопичення використовують бульйон з 6,5% хлориду натрію і бульйон з 1% глюкози, розлиті по 0,5 мл у пробірки, куди засівають по 0,2-0,3 мл змивної рідини. Посіви інкубують при 37°С протягом 24 год, а потім пересів на чашки з ЖСА. Подальше дослідження проводиться за загальноприйнятою методикою виявлення стафілококів.
Для виявлення синьогнійної палички спеціальні посіви можна не виробляти. Зазвичай колонії синьогнійної палички вдається виявити на кров'яному агарі чи середовищі Ендо. Колонії, підозрілі на синьогнійну паличку, пересівають на скошений агар, що містить 2-5% гліцерину або маніту. Колонії синьогнійної палички дають на поверхні скошеного агару рясний ріст із зеленуватим відтінком, маслянистої консистенції з характерним медовим запахом. Виділену культуру забарвлюють за Грамом, мікроскопують, визначають гемолітичні властивості.шляхом висіву на чашку із кров'яним агаром.
Санітарно-бактеріологічне дослідження перев'язувального, шовного та іншого хірургічного матеріалу
Дослідження перев'язувального, шовного та іншого хірургічного матеріалу проводять на стерильність. Контроль стерильності виробів проводять шляхом занурення в живильні середовища. У виняткових випадках, коли необхідно перевірити стерильність інструменту великих розмірів, проби забирають методом змиву, марлевою стерильною серветкою розміром 5х5 см 2 , попередньо зволоженою стерильним фізіологічним розчином або стерильною водопровідною водою.
Посіви досліджуваного матеріалу роблять у боксі з дотриманням правил асептики. Кетгут попередньо витримують добу в 10% розчині гіпосульфіту для нейтралізації спиртового розчину йоду, в якому його зазвичай зберігають, а потім ще добу в дистильованій стерильній воді. Шовк перед посівом добу витримують у стерильній дистильованій воді.
Досліджуваний матеріал вносять у дві пробірки з цукровим бульйоном Хоттінгера, в тіогликолеве середовище та бульйон Сабуро. Посіви в цукровому бульйоні та тіогліколевому середовищі інкубують при 37°С, а серед Сабуро — при 20—22°С. Посіви витримують у термостаті протягом 14 діб, переглядаючи їх щодня. З появою зростання мікробів роблять мазок, фарбують за Грамом, мікроскопують. Подальший перебіг дослідження залежить від виду мікроорганізму.
Матеріал вважається стерильним за відсутності зростання у всіх пробірках.
Дослідження на носійство золотистого стафілокока
Для виявлення носіїв золотистого стафілокока медичний персонал ЛПЗ, а також пологових будинків, дитячих лікарень, дитячих поліклінік, відділень патології новонароджених, недоношених обстежують при вступі на роботу танадалі - 1 раз на 6 місяців.
Забір матеріалу з передніх відділів носа здійснюють одним стерильним ватним тампоном з обох половин носа. Збір матеріалу із зіва проводять з поверхні мигдаликів стерильним ватним тампоном, або шляхом змиву. У разі обстежуваний полоще горло 5,0 мл стерильного фізіологічного розчину. Змив збирають у стерильну колбу (бажано з намистом), закривають пробкою і струшують протягом 10-15 хвилин до отримання однорідної суспензії. При цьому обов'язковою умовою є взяття матеріалу натще (не раніше, ніж через 2-3 години після їди). Посів досліджуваного матеріалу на живильні середовища повинен проводитися не пізніше ніж через 2 години після його забору.
Посів на жовтково-сольовий або жовтково-молочно-сольовий агар проводять тампоном, яким забирали матеріал. Тампон слід багаторазово повертати, щоб перенести на живильне середовище максимальну кількість взятого матеріалу. В іншому варіанті: взятий тампоном матеріал поміщають у пробірку з 0,5 мл стерильного розчину фізіологічного. Тампон обполіскують рідини струшуванням пробірки протягом 10 хвилин, потім віджимають про внутрішні стінки пробірки і видаляють. Рідина багаторазово перемішують піпеткою. Окремою піпеткою на чашку із ЖСА наносять 0,1 мл досліджуваного змиву і ретельно розтирають шпателем.
При посіві змиву із зіва на живильне середовище наносять 0,1 мл рідини і розтирають по поверхні середовища шпателем.
Чашки інкубують 2 доби при температурі 37ºС, після чого підраховують загальну кількість колоній, що виросли, і окремо колоній різної морфології. Особливу увагу звертають на колонії, що мають лецитиназну активність. Роблять перерахунок обсяг рідини, використовуваної для змиву, чи один тампон.
Масивність обсіменіння,що виражається показником 10 2 мікробних клітин, що знімаються на тампон, є показником помірної обсіменіння верхніх дихальних шляхів. При такому обсімені виділення збудника у зовнішнє середовище, як правило, не має місця. Якщо показник 10 3 і більше мікробних клітин, що знімаються на тампон, обсемененность висока. При такому обсімені відбувається виділення збудника у зовнішнє середовище як за різних експіраторних актів, так і при спокійному диханні. Повторне виділення мікроорганізмів у високій концентрації (10 3 КУО і більше) свідчить про мікробоносійство. Для санації мікробоносія проходять спеціальні процедури із застосуванням антимікробних впливів.
Санітарно-мікробіологічне дослідження харчових продуктів