Спосіб діагностики нейросифілісу
Винахід відноситься до медицини, а саме до неврології та дерматології. Визначають кількість сфінгомієліну у лікворі хворих за допомогою проточної тонкошарової хроматографії. При рівні сфінгомієліну у кількості від 3,0 до 3,7 мг% діагностують не ускладнений сифіліс. При рівні сфінгомієліну у кількості від 8,7 до 11,1 мг% – нейросифіліс. Даний спосіб має якісно новий підхід і високу ефективність.
Винахід відноситься до медицини, а саме до неврології та дерматовенерології.
Нейросифіліс – загальна назва різноманітних клінічних форм ураження нервової системи сифілітичної етіології, що характеризуються схильністю до прогресування за відсутності адекватного лікування. Термін "нейросифіліс" включає широкий спектр поразок ЦНС, які з прогресуванням захворювання поступово трансформуються один в інший. Зміни нервової системи зустрічаються у 25-90% хворих на сифіліс. Діагностика нейросифілісу нерідко представляє складне завдання, встановлення правильного діагнозу можливе лише у 30-70% випадків. Це пов'язано з тим, що виявлення характерних для нейросифілісу неврологічних симптомів і синдромів нині утруднено тим, що структура сифілітичних уражень нервової системи змінилася у бік переважання стертих та прихованих форм із незначною або відсутністю неврологічною симптоматикою. З іншого боку, виявлення у хворих на сифіліс тих чи інших неврологічних порушень не може бути підставою для діагностики нейросифілісу, оскільки ці порушення нерідко є наслідком різних захворювань та уражень нервової системи несифілітичної природи. Тому основну роль у діагностиці нейросифілісу відіграє лабораторне дослідження сироватки крові та спинномозкової рідини. Дослідженнясироватки крові хворих (серологічне дослідження) проводиться з використанням нетрепонемних (реакція Вассермана, мікрореакції преципітації з кардіоліпіновим антигеном) та більш чутливих та специфічних трепонемних тестів (реакція імунофлуоресценції – РІФ, реакція іммобілізації трепонем – РІТ). Однак при діагностиці нейросифілісу слід враховувати, що серологічні реакції на сифіліс можуть бути хибнопозитивними за наявності багатьох інших захворювань несифілітичної природи. Так, хибнопозитивні нетрепонемні та трепонемні тести можуть відзначатися у хворих на ВІЛ-інфекцію/СНІД, а хибнопозитивна реакція Вассермана виявляється при дослідженні сироватки крові у 10% осіб похилого віку. Тому основним підтверджуючим методом діагностики нейросифілісу нині є лабораторне дослідження спинномозкової рідини хворих за допомогою нетрепонемних та трепонемних тестів.
Однак імуноферментний спосіб ліквородіагностики технічно складний, дорогий і тому доступний небагатьом лабораторіям. Для застосування цього способу потрібні спеціальні тест-системи, більшість з яких не адаптовані до дослідження спинномозкової рідини.
Автори пропонують власний спосіб діагностики нейросифілісу за допомогою дослідження вмісту сфінгомієліну в лікворі хворих методом проточної тонкошарової хроматографії на шарах силікагелю в системі хлороформ-метанол-аміак.
Спосіб здійснюється наступним чином. Спинномозкову рідину хворих у кількості 0,4 мл змішують з хлороформ-метанолом у співвідношенні 1:2, фільтрують у пробірки, осад на фільтрі промивають тричі сумішшю "хлороформ-метанол" (2:1), що містить 0,5% НСl за обсягом. До фільтрату додають 2-3 мл 0,02% розчину хлористого кальцію до утворення двох фаз: хлороформноїі водно-метанолової, потім 1-2 хвилини струшують і додають 2 мл хлороформу. Після чіткого розшарування верхню фазу відсмоктують, ліпіди, що залишилися в ній, екстрагують 2 мл хлороформу, екстракт промивають сумішшю хлороформ-метанол-0,02% хлориду кальцію (3:48:47), випарюють насухо в струмі азоту і розчиняють в 20-25 мкл хлороформ-метанол (2:1). Нанесений методом осадження шар адсорбенту висушують на повітрі, 15 хвилин активізують у сушильній шафі при температурі 120С і поділяють на 12-15 смуг шириною 4-5 мм кожна. За таких умов розподіл аналізованої речовини відбувається тільки в процесі розчинника, виключаючи можливість поздовжньої сорбції. Досліджуваний ліпідний матеріал у кількості 10-14 мкг наносять на пластинку, поміщену в плоску скляну камеру для проточної хроматографії. Час хроматографування фосфоліпідів у системі хлороформ-метанол-аміак (13:7:1) становить 60 хвилин. В результаті хроматографування досліджувана фракція сфінгомієліну чітко відокремлюється від розташованих поруч фосфатидилсерину і фосфатидилхоліну. Після хроматографування пластинку протягом 30 хвилин виявляють над розчином хромової суміші при 200°С, потім денситометрують (скануючий денситометр CS-9000 Shimadzu). За даними денситометрії будується калібрувальна крива з використанням стандартного препарату фосфатидилінозит фірми "Sigma" (США), який наноситься на окремі смуги силікагелю так, щоб концентрація ліпідного фосфору становила 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, . Ідентифікацію фосфоліпідних фракцій проводять за допомогою стандартних кольорових тестів фірми Sigma в діапазоні концентрацій від 0,2 до 8,0 мкг. При цьому можна в стандартних умовах аналізувати на кожній платівці одночасно до 15 проб.
Таким чином, даний спосіб маєякісно новим підходом та високою ефективністю, оскільки підвищення рівня сфінгомієліну в лікворі хворих у 2,5-3,5 рази може бути лабораторним діагностичним критерієм розвитку сифілітичного ураження нервової системи у хворих з сифілісом.
Хворий М., 38 років, вступив у неврологічне відділення для обстеження з діагнозом: Дисциркуляторна енцефалопатія неясної етіології. При надходженні скарги на головний біль, що посилюються при розумовій напрузі, часті запаморочення при ходьбі, легку слабкість у правій руці, поганий сон. Рік тому відзначався епізод слабкості у правих кінцівках, більше у руці при нормальному артеріальному тиску.
Під час огляду стан задовільний. Патології внутрішніх органів не виявлено. АТ 120/75 мм рт.ст. Пульс 72 за хвилину. У неврологічному статусі: свідомість ясна, менінгеальні симптоми не виражені. Зіниці округлої форми, нерівномірні (Д>S), реакція на світ млява, на акомодацію різко знижена, на конвергенцію збережена. Відзначаються легка амімія та асиметрія носогубних складок. Рухи кінцівок у повному обсязі, легке підвищення м'язового тонусу у правій верхній кінцівці. При дослідженні больової чутливості відзначається гемігіпестезія у правих кінцівках, більше у руці. Суглобово-м'язове, вібраційне та стереогностичне почуття не засмучені. Рефлекси зі слизових оболонок збережені; періостальні - нижньощелепний підвищений, з верхніх та нижніх кінцівок знижені, нерівномірні (Д>S), черевні також нерівномірні (S>Д). Відзначаються патологічні рефлекси: хоботковий, Маринеско-Радовичі, непостійний симптом Россолімо праворуч. Статична та кінетична координація не порушена. Шкала MMSE – легкі когнітивні порушення.
Враховуючи скарги хворого та виявлену неврологічнусимптоматику, включаючи патологію зіниць та зіниці реакцій, хворому рекомендовано проведення люмбальної пункції.
Спинномозкова рідина: збільшення білка (0,66 г/л), лімфоцитарний плеоцитоз 28 клітин на 1 мм. Вміст сфінгомієліну 9,6 мг%. Хворому діагностували менінговаскулярний сифіліс. Надалі отримані результати підтверджуючих тестів: реакція Вассермана та імунофлюоресценції (РІФ) у лікворі позитивні (4+).
Спосіб діагностики нейросифілісу, що включає дослідження ліквору, який відрізняється тим, що визначають кількість сфінгомієліну в лікворі хворих за допомогою проточної тонкошарової хроматографії і при рівні сфінгомієліну в кількості 3,0-3,7 мг% діагностують неускладнений сифіліс, а при рівні сфінгоміліну 7-11,1 мг% – нейросифіліс.