Вакцина проти сальмонельозу курей та спосіб профілактики сальмонельозу курей
Використання: ветеринарна біотехнологія, засоби специфічної профілактики сальмонельозу курей, вакцина проти сальмонельозу курей, спосіб профілактики сальмонельозу курей. Сутність винаходу: вакцина проти сальмонельозу курей містить суспензію штаму Sal. enteritidis ВГНКИ N204 та желатино-сахарозний стабілізатор в ефективній кількості. Атенуйований штам Sal. enteritidis ВГНКИ N204 отриманий шляхом введення у вихідний стійкий рифампінстійкий штам Sal. enteritidis N204 плазміди з подальшим відбором інсерційних мутантів. Використання нової вакцини проти сальмонельозу курей, що містить в основі культуру атенуйованого штаму Sal. enteridis ВГНКИ N204, у ветеринарній практиці дозволяє підвищити безпеку птиціпоголів'я до 90%. 2 с.п.ф-ли, 1 табл.
Винахід відноситься до ветеринарної біотехнології, зокрема засобів специфічної профілактики сальмонельозу курей.
Sal. enteritidis, що адаптувалася до організму курей, викликає значний відхід курчат (до 10-12%) та сальмонеллоносійство у дорослих курей. Інфіковані сальмонелами продукти забою птиці є одним із основних джерел збудника сальмонельозної токсикоінфекції у людини.
Широка поширеність Sal.enteritidis серед курей, значні матеріальні збитки, заподіяні птахівництву, небезпека для людини, відсутність ефективних лікувальних препаратів, роблять необхідним пошук засобів специфічної профілактики цього сальмонельозу у курей.
Відома вакцина проти пуллорозу-тифу курей, що містить суспензію клітин штаму Sal.gallinarum - pullorum N 9 і стабілізатор (Gordon et al., 1959). Вакцина застосовувалася на обмеженому поголів'ї курей. Вакцину вводили підшкірно дорослому птаху з метою отримання трансоваріального імунітету у курчат. Штам 9R не має генетичнихмаркерів для диференціації від епізоотичних штамів і як будь-який штам у формі R має неповноцінну антигенну структуру за рахунок втрати бічних ланцюгів в молекулах полісахариду клітинної стінки. Крім того, вакцина зі штаму 9R викликає у вакцинованої птиці патологоморфологічні зміни в яєчниках, характерні для пуллорозу, що зробило цю вакцину непридатною для практичного широкого застосування.
Метою винаходу є вакцина проти сальмонельозу курей, що володіє нешкідливістю, високою антигенною та імуногенною активністю.
Поставлена мета досягається одержанням вакцини, що містить суспензію клітин штаму Sal. enteritidis 204, сахарозу, желатин та дистильовану воду при наступному співвідношенні компонентів мас./об.%: Суспензія клітин штаму Sal.enteritidis 204 з концентрацією 175-250 млрд.
мікробних клітин в 1 см 3 42,0-55,0 Сахароза 5,0-7,5 Желатин 1,5-2,0 Вода дистильована Інше Спосіб профілактики сальмонельозу курей передбачає введення в організм курчат 2-3-денного віку з водою вакцини , Що містить суспензію клітин штаму Sal.enteritidis 204 з концентрацією 175-250 млрд/см 3 мікробних клітин у кількості 42,0-55,0 см 3 і сахарозо-желатиновий стабілізатор у кількості 45-48 см 3 з розрахунку 0,5-1 ,0 млрд/см 3 мікробних клітин на одного курча, дворазово з інтервалом 2 дні після 1-24-годинної голодної витримки.
Штум Sal.enteritidis 204, що використовується для виготовлення вакцини, отримують шляхом цілеспрямованої селекції з епізоотичного штаму Sal.enteritidis 126. Штам депонований у колекції бактеріальних культур Всесоюзного державного науково-контрольного інституту ветеринарних препаратів за номером 204.
П р і м е р 1. Отримують стійкий до рифампіцину мутант (Rif r ) вірулентного штамуSal.enteritidis 126, висів завис бактерій (1 млрд/см 3 ) на МПА, що містить 100 мкг/см 3 рифампіцину. Rif r -мутант зберігає вихідну вірулентність для мишей (ЛД50 = 36 мікробних клітин).
За допомогою кон'югації Rif r -мутант вводять плазміду Р VD 3::Tn7 не здатну реплікуватися в клітинах Sal.enteritidis при температурі 43 про С. Вирощують трансконьюганти Sal.enteritidis 126 Rif r (P VD 3::Tn7) на МПА з (20 мкг/см 3 ) при температурі 43 про З відбирають інсерційні мутанти Sal.enteritidis 126 Rif r ::Tn7.
В експериментах на білих мишах виявляють клони мутантів, при зараженні которми (внутрішньочеревно, доза 5х10 4 мікробних клітин) виживало б 100% тварин.
Штам Sal.enteritidis 204 виявлено при аналізі 54 інсерційних мутантів.
Штам Sal. enteritidis 204 характеризується наступними властивостями та ознаками.
Морфологія – дрібні грамнегативні палички без суперечок та капсул, мають активну рухливість, перетріх. Розмір паличок 2-3 х 0,6-0,7 мк.
Культуральні властивості - на м'ясопептонному бульйоні утворює рівномірне помутніння через 5-7 год культивування при температурі 37 про; потім утворюється ніжна плівка і випадає сіро-білий осад, що легко розбивається. На м'ясопептонному агарі утворює через 18-20 год зростання при температурі 37 про З колонії діаметром 0,8-1,5 мм у S формі, сіро-білі, прозорі, круглі, гладкі, дрібнозернисті, опуклі. Через 2-3 доби розмір колоній збільшується до 2-3 мм. Факультативний аероб.
Ферментативні властивості - зброджує з утворенням кислоти та газу глюкозу, мальтозу, маніт, сорбіт, ксилозу, левульозу, галактозу, маннозу, тригалозу, декстрин, гліцирин, дульцит інозит, утворює сірководню, не зброджує, цукор, аліцин , адоніт, незгортає молоко, не утворює індол, нітрити редукує в нітрати.
Антигенна структура - аглютинується сальмонельозними монорецепторними "0" сироватками: 1, 9, 12 і "Н" сироватками: g, 1, 7. Неспецифічна фаза "Н" антигену (1 і 7) виявляється не завжди.
Генетичні маркери - штам стійкий до стрептоміцину (150 мкг/см3), рифампіцину (200 мкг/см3), триметоприму (200 мкг/см3). Маркери стійкості стабільно зберігаються після 10-кратного пересівання на м'ясопептонному агарі, 5-кратного пасажу через білих мишей і 5-кратного пасажу через курчат.
Вірулентність для білих мишей. Вихідний штам Sal.enteritidis 126 має ЛД50 для мишей лінії Balb/с-18, для безпородних білих мишей - 5 мікробних клітин. ЛД50 штаму Rif r становить відповідно 36 і 14 мікробних клітин, а для атенюйованого штаму Sal.enteritidis 204 - 1,6х10 6 і 5,6х10 6 мікробних клітин.
Імуногенність - виживання білих мишей та курчат, імунізованих атенуйованим штамом 204, становить після зараження 5-7 ЛД50 вірулентного вихідного штаму Salmonella enteritidis 80-95% від числа заражених при загибелі 90-100% тварин.
П р і м е р 2. Реактор ємністю 200-500 л заповнюють на 1/3 бульйоном Хоттінгера і стерилізують при температурі 120 про З протягом 1 год. 5,5% обсягу середовища. Культивування проводять протягом 10-12 год при температурі 37 1 про З постійно працюючої мішалці зі швидкістю 120 5 об/хв і подачі стерильного повітря в кількості 2 0,2 об'єму/хв. Накопичення мікробних клітин становить 35-50 млрд/см3 середовища.
Вирощену культуру беруть в облогу на роторній центрифузі типу СГО-100 при 12-15 тис. об/хв. Бактеріальну масу знімають з ротора вламінарному боксі і змішують у співвідношенні 1:2 зі стабілізатором, що містить сахарозу, желатин та дистильовану воду.
Вакцину розфасовують у флакони об'ємом 10 см 3 і висушують ліофільно.
Вакцина проти сальмонельозу курей серії 1 має наступний компонентний склад, мас. /про. % : Суспензія клітин штаму Sal.enteritidis 204 з концентрацією 175 млрд/см 3 55,0 Сахароза 5,0 Желатин 1,5 Вода дистильована Вакцина проти сальмонельозу курей серії 2 має наступний компонентний склад, мас./об.%: Суспензія штаму Sal.enteritidis 204 з концентрацією 212,5 млрд/см 3 48,5 Сахароза 6,25 Желатин 1,75 Вода дистильована Інша Вакцина проти сальмонолезу курей серії 3 має наступний компонентний склад, мас./об.%: Суспензія клітин штаму .enteritidis 204 з концентрацією 250 млрд/см 3 42,0 Сахароза 7,5 Желатин 2,0 Вода дистильована Решта П р і м е р 3. Визначають оптимальну імунізуючу дозу запропонованої вакцини серії 2 для 2-3-денних курчат. Курчат витримують 18-24 год без води та корму, після чого імунізують шляхом випоювання вакцини з водою дворазово з інтервалом 2 дні в дозі 0,5 млрд. живих мікробних клітин на курча. Курчат заражають через 10-12 днів після випоювання другої дози вакцини внутрішньом'язово в дозі 10 ЛД50 вірулентним штамом Sal.enteritidis N 126.
Досвід виконують у трьох повтореннях. У кожному досвіді використовують по 20 вакцинованих та 20 невакцинованих курчат. Результати наведено у таблиці Серед вакцинованих курчат виживання склало за трьома групами 90% при загибелі 83,3% курчат у контролі.
Використання запропонованої вакцини у ветеринарній практиці дозволить підвищити ефективність протиепізоотичних заходів при сальмонельозі курей.
ВАКЦИНА ПРОТИ САЛЬМОНЕЛЕЗУ КУР І СПОСІБПРОФІЛАКТИКИ САЛЬМОНЕЛЕЗУ КУР.
Вакцина проти сальмонельозу курей, що містить суспензію клітин вакцинного штаму і сахарозо-келатиновий стабілізатор, що відрізняється тим, що в якості вакцинного штаму вона містить штам Salmonella enteritidis ВГНКИ 204 з концентрацією живих мікробних клітин (175-95) компонентів, об.%: Суспензія клітин штаму Salmonella enteritidis ВГНКИ N 204 з концентрацією (175-250)10 3 клітин/см*9 93 - 42,0 - 55,0 Сахароза - 5,0 - 7,5 Желатин – 1,5 – 2,0 Дистильована вода - Інше 2. Спосіб профілактики сальмонельозу курей, що включає введення в організм курчат вакцинного препарату, який відрізняється тим, що як вакцинний препарат використовують вакцину, що містить наступні компоненти, об.%: Суспензія клітин штаму Salmonella enteritidis ВГНКИ N 204 з концентрацією (175-250)10 9 клітин/см 3 - 42,0 - 55,0 Сахароза - 5,0 - 7,5 Желатин – 1,5 – 2,0 Дистильована вода - Інше яку вводять курчатам 2-3-денного віку з водою шляхом випоювання з розрахунку (0,5-1,0)10 9 мікробних клітин на одного курча, дворазово з інтервалом 48 год після 18-24-годинної голодної витримки.