Вакцина від віспи
Вакцина - це жива вакцина для профілактики натуральної віспи. Для виробництва оспенной вакцини використовують вірус коров'ячої віспи та осповакцини. Останній є вірусом натуральної віспи, ослабленим внаслідок багаторазових пасажів через організм корів та інших тварин, внаслідок чого він втратив здатність викликати віспу, але при введенні в організм людини створює імунітет до неї. Для виробництва оспенной вакцини використовують корів, телят, овець, іноді буйволів, кроликів, а також курячі ембріони та культури тканин. Тваринам голять шкіру і роблять безліч дрібних надрізів, у які втирають вірус коров'ячої віспи чи вірус осповакцини. Через 4-5 днів, коли утворюються віспи пустули, тварин забивають, шкіру обробляють фенолом, обмивають водою і зіскаблюють віспини. Завис подрібненого зіскрібка віспин називається вісповим детритом. Опінова вакцина може бути рідкою (коли віспінний детріт розводять у 4-5 разів гліцерином) або сухий (коли до детриту додають 10% білкового наповнювача, а потім розливають в ампули і піддають вакуумному сушінню). Запаяна ампула сухої оспенной вакцини при зберіганні у холодильнику (t° 2— 4°) зберігає свою активність щонайменше 12 місяців, тоді як рідка вакцина — трохи більше 3 місяців. У СРСР переважно готували суху оспенную вакцину. Перед проведенням віспощеплення суху осінню вакцину розводять гліцерином, який зазвичай додається до кожної ампули вакцини.
Оспенная вакцина (vaccinum variolae) - жива вакцина для профілактики натуральної віспи, у виробництві якої використовують віруси коров'ячої віспи та осповакцини (вакцини), споріднені в антигенному відношенні вірусу натуральної віспи.
Вірус коров'ячої віспи - збудник віспи корів, характерним симптомом якої єосвіту на вимені корів бульбашок, що містять вірус. Заражаючись цим вірусом при доїнні хворих на віспу корів, людина набуває імунітету до натуральної віспи.
Походження вірусу осповакцини недостатньо зрозуміле. Його розглядають як вірус натуральної віспи, що змінився під впливом пасажів через організм корів або інших тварин і втратив здатність викликати віспу у людини, але зберіг імунізуючу здатність. Практично вірус осповакцини ототожнюють із вірусом коров'ячої віспи, оскільки відмінності між ними виявляються лише за спеціальних методів дослідження.
Вірус коров'ячої віспи було вперше використано попередження натуральної віспи Дженнером (Е. Jenner, 1796). Оспенную вакцину готують або у рідкому вигляді (суміш оспінного матеріалу з гліцерином), або у вигляді сухої вакцини, яку перед вживанням розводять гліцерином. Для виробництва оспенной вакцини можуть бути використані різні тварини (корови, телята, вівці, рідко – буйволи, кролики), курячі ембріони та культури тканин (див.). Вакцину від віспи, одержувану шляхом нашкірного зараження тварин, прийнято називати дермальною, на відміну від віспової ововакцини, що готується на курячих ембріонах, та тканинної вакцини від віспи, що готується з використанням культур тканин in vitro. Як виробничі штами використовують вірус коров'ячої віспи або осповакцини. Штами мають бути генетично однорідними, достатньо імуногенними і здатними викликати утворення доброякісних оспин на шкірі щеплених людей, кроликів і на хоріон-алантоїсній оболонці курячих ембріонів.
Для отримання дермальної оспенной вакцини СРСР використовують корів і телят, рідше ослів. Після вибривання області живота тварин інфікують у скарифіковану шкіру вакцинним штамом, ретельно втираючи щепленийматеріал у надрізи шкіри. Через 4-5 днів у період максимального вмісту вірусу в оспинах тварин, що розвинулися, вбивають. Зняту шкіру обробляють фенолом, обмивають водою і зіскаблюють віспини. Зішкріб ретельно подрібнюють і одержують найдрібнішу завись — віспінний детрит. Для виготовлення рідкого препарату детрит розводять гліцерином, так що кінцевий продукт є сумішшю 1 ч. детриту з 4-5 ч. 40-80% гліцерину. Для виготовлення сухої дермальної оспенной вакцини до осіннього детриту додають наповнювач - суміш курячого білка з сахарозою, рідше за 10% розчин желатину або кінської сироватки. Оспенный детрит з наповнювачем розливають в ампули, висушують у замороженому стані під вакуумом (див. Ліофілізація) і запаюють. Суха вакцина від віспи стійкіша до високих температур і при зберіганні на холоді зберігає активність не менше 12 міс. За цих умов рідка вакцина придатна трохи більше 3 міс. Тому в СРСР готують лише суху дермальну вакцину від віспи.
Після багаторазових пасажів від одного теля іншого вакцинний штам може ослабнути. Вірулентні властивості відновлюють, проводячи штам через сприйнятливий організм іншого виду. У СРСР використовують два методи збереження вакцинних штамів: пасажі теля-кролик-теля і теля-осел-теля. Щеплювальний матеріал, отриманий при пасажі через організм кролика, називається лапиною, через організм осла - азініною, через організм людини - ретровакциною.
Оспіну ововакцину готують шляхом зараження 12-денних курячих ембріонів в алантоїсну порожнину вірусом дермовакцини. Через 72 години після зараження хоріон-алантоїсну оболонку вилучають, ретельно гомогенізують і змішують зі стабілізатором (10% желатину, 50% курячий білок або молоко).
Тканинну оспенную вакцину отримують зараженнямкультур тканин органів чи зародків здорових тварин. Культуральну рідину збирають у період повної дегенерації заражених клітин та змішують з наповнювачем (5% пептон або суміш жовтка курячого яйця з сахарозою). Ововакцина та тканинна вакцина випускаються у сухому вигляді.
Оцінку якості вакцини від віспи проводять шляхом визначення бактеріального забруднення, нешкідливості, імуногенності та термостабільності. Вакцина від віспи має бути повністю вільна від патогенних бактерій, що встановлюють, заражаючи нею мишей чи морських свинок. У дермальній вакцині від віспи допускається присутність непатогенних для людини мікробів, проте вони повинні утворювати не більше 1000 колоній при посіві 1 мл вакцини. Для придушення мікрофлори допускається використання антибіотиків у мінімальних кількостях.
Специфічну активність готової вакцини від віспи перевіряють на кроликах (метод Грота) та морських свинках (метод Гінса). Оцінюючи активності за першим методом кроликам внутрішньошкірно вводять випробуваний препарат у різних розведеннях. Вакцина вважається придатною, якщо за 96 год. сума діаметрів інфільтратів, що утворилися на місцях введення вакцини, не менше 30-35 мм. При визначенні активності методом Гинса заражають морських свинок (на скарифіковану рогівку) різними концентраціями щеплювального матеріалу. Вакцина, що викликає у розведенні 1: 10 000 і вище виражений кератит, придатна до вживання. Одним із способів перевірки віспи вакцини є також первинна вакцинація дітей. Вакцина від віспи вважається придатною, якщо вона дає не менше 90% позитивних реакцій за кількістю дітей та 70% успіху за кількістю щеплених надрізів.
Крім цих методів, ВООЗ рекомендує визначати активність вакцини від віспи зараженням кроликів на скарифіковану шкіру та курячих.ембріонів на хоріон-алантоїсну оболонку. Вакцина від віспи вважається придатною, якщо при нанесенні на скарифіковану шкіру кролика в розведенні до 1:10 000 викликає через 4-7 днів характерні поодинокі віспінні везикули, а в розведенні 1:1000 зливні поразки. Визначення активності на курячих ембріонах зводиться до зараження 12-денних зародків хоріон-алантоїсної оболонки.
Термостабільність сухих оспенных вакцин визначають витримуванням сухих препаратів при 37 ° протягом 4 тижнів; після цього терміну вакцина від віспи має відповідати зазначеним вище вимогам.
У СРСР профілактики віспи використовується переважно дермальна вакцина від віспи, найбільш апробована практикою. У США, Швейцарії поряд із дермовакциною застосовують ововакцину. Тканинну вакцину від віспи застосовують у Швеції, Голландії та Мексиці.