Застосування методу ІФА у птахівництві

Ціни на ВАКЦІНИ дивіться на сайті СІЛЬГОСПТОРГИ.РФ

А.А. Черніков, технічний консультант компанії «БіоЧек» у країнах СНД,

Спостерігаючи за еволюцією поширення хвороб птиці у світі, стає зрозумілим, що настав час концентрувати свої зусилля на запобіганні захворюванням, а не на їхньому лікуванні. До такого висновку підштовхують щонайменше дві передумови. По-перше, звужується гамма дозволених до застосування у птахівництві лікарських засобів. По-друге — витрати, що виникають внаслідок захворювання птиці (навіть якщо поголів'я вилікувано), стають надто великими.

Виходячи з цього, стратегія запобігання захворюванням повинна базуватися на якості обслуговування ферм, генетичної стійкості птиці та на комплексі діагностичних та профілактичних заходів. Саме максимально рання діагностика інфекційних захворювань є гарантом зниження можливих економічних втрат.

У цій статті ми зупинимося на одному з найперспективніших методів діагностики – імуноферментному аналізі (ІФА, ELISA).

Метод ІФА характеризується високою чутливістю, швидкістю одержання результатів, масовістю досліджень. Завдяки простоті, специфічності та високій чутливості метод ІФА дуже зручний для скринінгу великої кількості зразків, при цьому досліджуваної сироватки потрібно в мікродозах (1 мкл). Слід зазначити, що ІФА є безпечним, так як використовуються інактивовані антигени. На відміну від інших методів діагностики ІФА дозволяє використовувати автоматичне обладнання: для обліку результатів – спектрофотометр та для проміжних стадій – промивач планшет (вошер). Це значно прискорює, автоматизуєроботу лабораторії, знижує трудові витрати та вплив людського фактора на кінцевий результат.

Принцип методу заснований на здатності антитіл пов'язувати відповідні антигени, утворюючи комплекси «антиген-антитіло», які потім після обробки іншими реагентами набувають видимого оком забарвлення. Інтенсивність останньої (оптичну густину) визначає прилад – спектрофотометр. Значення оптичної щільності прямо пропорційно кількості антитіл у сироватці крові, що потім перераховується до титру.

В даний час можливість постановки ІФА-методу у власній лабораторії має практично будь-яке підприємство середнього розміру. Обладнання не займає багато місця, не потребує спеціального обслуговування та навичок роботи. Компоненти для проведення самої реакції поставляються в готових наборах, що комерційно продаються — тест-системах.

Протягом останніх років на ринку України з'явилося багато виробників ІФА-наборів. Серед них заслужене місце займають набори голландського виробництва BioChek B.V. — за їхню незмінну якість, оптимальну ціну і, найголовніше, — переваги в роботі.

Використання імуноферментного аналізу від BioChek надає наступні можливості:

1. Створити загальну систему контролю (референтний контроль та референтна куряча сироватка), що дозволяє бути впевненим у правильності роботи компонентів набору, дотримання умов та методики реакції.

2. Скласти та проаналізувати епізоотичну ситуацію щодо особливо небезпечних вірусних хвороб птахівництва. Оцінити ступінь імунітету поголів'я та потенційних проблем зі здоров'ям та продуктивністю птиці.

3. Створити власну базу титрів птахофабрики у програмі «BioChek», що у подальшому дуже полегшує обробку ізберігання результатів. Слід розуміти, що інтерпретація отриманих результатів потребує досвіду, який напрацьовується шляхом збирання та зберігання інформації та подальшого порівняння її з раніше отриманими результатами. Тільки тривалий, систематичний контроль стад дозволяє користувачам програми BioChek встановити свої власні стандарти для очікуваних (цільових) титрів, тобто створити базові дані для своїх стад. З цього випливає, Це необхідно тому, що базові дані є специфічними для кожної птахофабрики і можуть змінюватися в залежності від породи та віку птиці, типу вакцин та програм вакцинацій, а також інших можливих відмінностей в умовах утримання птиці.

4. За допомогою методичних вказівок «BioChek» розробити та застосувати схему серомоніторингу для ремонтних, батьківських та товарних стад.

5. Провести моніторинг вакцинації. При цьому ми оцінювали та оптимізували такі необхідні параметри програми вакцинації, як час проведення вакцинації (прогнозування дати вакцинації) згідно з рівнем материнських антитіл, вид програми (яка вакцина – жива чи інактивована, проміжна чи гаряча, кількість вакцинацій), метод застосування вакцини.

При створенні власних базових даних за титрами та коефіцієнтом мінливості (CV) це дає можливість провести оцінку ефективності програми вакцинації (рис. 1, 2).

Мал. 1. Імунограма моніторингу сироваток крові курчат бройлерів після вакцинації протихвороби Ньюкаслана 12-й день, М±m, n=23

Вакцинація товарного бройлера на 12-й день призвела до бажаного результату, тобто у цього стада вироблений достатній рівень захисту до ньюкаслської хвороби до кінця циклу вирощування.

Мал. 2. Імунограмамоніторингу сироваток крові курчат бройлерів після вакцинації проти хвороби Ньюкасла на 21-й день, М±m, n=23

Вакцинація товарного бройлера на 21-й день призвела до загрозливої ситуації, коли певний час цей стадо було не захищено, і в цей час можливе проникнення вірусу Ньюкаслської хвороби до незахищеного сприйнятливого птаха.

Серологічний моніторинг є важливим інструментом у розробці та підтримці ефективних програм вакцинацій. Його метою є своєчасне забезпечення інформацією про імунний статус, покладаючись на яку, можна проводити ефективні заходи щодо зниження виробничих витрат та мінімізації збитків від хвороб.

Але все ж таки слід розуміти, що ІФА — це не панацея від усіх проблем птахівництва; Для встановлення достовірного діагнозу необхідно серологічні дослідження проводити у комплексі з клінічними спостереженнями та іншими лабораторними дослідженнями. У птахівництві є багато різних методів застосування вакцин. При аерозольні одноразової вакцинації за допомогою ІФА неможливо зробити аналіз якості проведеної вакцинації, оскільки створюється місцевий імунітет. При застосуванні інших методів, коли створюється гуморальний імунітет, ми маємо оцінювати інтенсивність, однорідність та стійкість відповіді у титрах після введення вакцини.

Мал. 3. Гістограма моніторингу сироваток крові курчат бройлерів (при вибої) після проведеної вакцинації проти хвороби Гамборо у 16-денному віці, М±m, n=23

Мал. 4: Гістограма моніторингу сироваток крові курчат бройлерів (при вибої) після проведеної вакцинації проти хвороби Ньюкасла в 12-денному віці, М±m, n=23

Як бачимо, виявлення рівня антитіл має сенс у порівнянні з відомимистандартами і якщо вони оцінюються після певного часу після вакцинації. Якщо титри антитіл підвищуються після імунізації, це свідчить про успішність проведеної вакцинації. Якщо титри у частині поголів'я високі, тоді як в іншій частині — нульові, тестування показує, що стадо, можливо, інфіковане або погано проведено вакцинацію.

6. Є ще одна дуже важлива здатність програмного забезпечення BioChek: це можливість провести профільування племінних стад.

Моніторинг племінного птаха проводиться у встановлені моменти після первинної та вторинної вакцинації. Первинну відповідь антитіл у сироватці крові птиці після контакту з інфекційним агентом або вакцинації можна виявити вже через 7-10 днів, і зазвичай вони досягають піку протягом 2-3 тижнів. Рівень антитіл зазвичай знижується через кілька днів після піку, оскільки патоген інактивується та виводиться. Вторинна імунна відповідь настає швидше після вторинного зараження або ревакцинації, ніж при первинній відповіді. Зазвичай рівень антитіл при вторинній відповіді знижується повільніше протягом тривалого часу. Правильно проведена первинна вакцинація є дуже важливою для отримання високих і стійких титрів протягом 40-тижневого продуктивного циклу. Проте, сам факт використання ефективних вакцин не є гарантом захисту поголів'я від вірусних хвороб. Важливу роль профілактиці цих хвороб грає схема використання вакцинних препаратів. Комбіноване застосування живих та інактивованих вакцин дозволяє поєднати в собі всі їхні переваги та має дві важливі цілі — як захист курей від вірусних хвороб протягом усього життєвого періоду, так і створення напруженого та тривалого імунітету у курчат, які були отримані від цих курей.

1. Імуноферментний аналіз є доступним, зручним, специфічним та високочутливим експрес-методом оцінки імунітету поголів'я птахофабрики.

2. Використання тест-систем та програмного забезпечення BioChek дозволяє скласти об'єктивну епізоотичну ситуацію в кожному господарстві/стаді, зберігати та аналізувати всю наявну інформацію, а також спостерігати зміну титрів у часі.

3. Застосування серологічного моніторингу є дуже важливим для складання ефективних програм вакцинації, контролю титрів у стаді та їх порівняння з цільовими титрами.

4. ІФА моніторинг — важливий інструмент зниження виробничих витрат, раннього виявлення можливих захворювань.

Для більш детальної інформації звертайтесь до офіційного дистриб'ютора компанії BioChek в Україні: ТОВ «Сімбіо», м. Москва, тел. (495) 984-53-11.