ЖИВИЛЬНІ СЕРЕДОВИЩА - Студопедія
Патогенні бактерії, що цікавлять ветеринарних мікробіологів, відрізняються за здібностями засвоювати ті чи інші поживні речовини та розмножуватися у певних умовах. Ці властивості мікробів враховують при виготовленні середовищ для їхнього вирощування, а нерідко і для диференціації.
Поживні середовища за призначенням поділяються на:загальновживані,придатні для культивування багатьох бактерій;диференціальні,що дозволяють розрізняти бактерії різних видів та пологів;елективніісередовища,сприяють розмноженню бактерій певних видів і пригнічують зростання інших мікробів;спеціальні,найбільш оптимальні для вирощування бактерій тих чи інших видів.
За консистенцією розрізняють поживні середовищащільні, рідкіінапіврідкі.
В даний час деякі найбільш уживані середовища стандартизовані та випускаються медичною промисловістю у сухому вигляді. До таких середовищ, що використовуються у ветеринарних лабораторіях, відносяться:
агар живильний, рН 7,4-7,6;
агар живильний "Д" (дріжджовий); агар вісмут-сульфіт;
агар з еозином і метиленовим синім (середовище Левіна);
бактоагар Плоскірєва (бактоагар «Ж»);
середовище Буліра (МПБ з манітом та нейтральротом);
середовище Кітта – Тарацці;
середовище Ендо (фуксин-сульфітний агар);
середовище для кольорового ряду з індикатором ВР та глюкозою;
середовище для кольорового ряду з індикатором ВР та лактозою;
середовище для кольорового ряду з індикатором ВР та мальтозою;
середовище для кольорового ряду з індикатором ВР та манітом;
середовище для кольорового ряду з індикатором ВР та сахарозою.
Крім того, випускаються додаткові компоненти до живильнихсередовищ: пептон бактеріологічний, жовч суха та гідролізат лактальбуміну в розчині Хенкса.
Однак більшість поживних середовищ зазвичай готують на місці, включаючи і перераховані вище середовища.
Приготування середовищ із сухих препаратів. Їх готують згідно з вказівками на етикетках банок. Наважку сухого живильного середовища всипають у стерильну колбу з нещільною ватною пробкою і вливають необхідну кількість дистильованої води. Середовище розплавляють і кип'ятять при постійному помішуванні на повільному вогні, захищеному азбестованою сіткою. Готове середовище, яке не підлягає автоклавуванню, остуджують у теплій водяній бані до 50 0 С і відразу розливають у стерильні чашки (пробірки) у боксі.
Поверхня столу, на якому розрізняють агар, повинна бути строго горизонтальною. У чашки наливають не менше 15 мл середовища, ставлять одна на одну, не допускаючи перекосу, і накривають рушником. Коли агар застигне, чашки з наявністю значного конденсату ставлять кришками донизу для підсушування. У термостат із відкритою вентиляцією.
Розплавлене середовище, що підлягає автоклавуванню, розливають у пробірки та колби в потрібних обсягах і того ж дня стерилізують при заданому режимі. Вийняті з автоклава пробірки з агаром залишають застигати у стовпчиках або скошують. Верхній край косяка повинен бути не вище 2/3 пробірки, а нижній - не доходити на 1 см до її дна. Коли треба скошувати багато агару, то щоб уникнути передчасного його застигання пробірки тримають у водяній бані при 50 0 С.
Розплавлений агар у колбах охолоджують до 50 0 С і розливають у чашки як описано вище, або зберігають у застиглому вигляді. При необхідності його розплавляють на водяній бані або парою і розливають у відповідний посуд. Довго перетримувати агар у рідкому вигляді не слід, тому що цього він гіршийзастигає.
Вимірювання концентрації водневих іонів (рН) колориметричним способом по Міхаелісу. Патогенні бактерії здебільшого можуть нормально розмножуватися тільки в середовищах, що мають нейтральну, слабокислу або слаболужну реакцію. До кожного мікроба існують свої відомі межі цієї реакції. Сухі рецептури поживних середовищ готують із урахуванням цих вимог. Але при виготовленні середовищ на місці визначення їхньої реакції (рН) обов'язкове. З цією метою зазвичай користуються методом Міхаеліса.
Набір Міхаеліса випускають у двох випадках, що відрізняються лише розмірами. У наборі є:
а) три шкали по дев'ять кольорових стандартів пробірок, що містять розчини індикаторів: а-дінітрофенолу, паранітрофенолу та метанітрофенолу; на кожній пробірці вказано назву індикатора та якому рН відповідає забарвлення його розчину;
б) флакони з робочими розчинами індикаторів;
в) компаратор Вальполя, що є колодкою з трьома парами вертикальних гнізд, трьома наскрізними оглядовими отворами 11 матовим склом на задній стороні колодки;
г) комплекти пробірок та піпеток.
У мікробіології при виготовленні поживних середовищ користуються майже виключно шкалою стандартів з метанітрофенолом, оскільки їх рН від 6,8 до 8,4.
Порядок визначення рН безбарвних розчинів. В одну з пробірок великого набору наливають 6 мл випробуваного розчину і 1 мл робочого розчину відповідного Індикатора (якщо набір малий, то пробірку наливають відповідно 0,6 мл і 0,1 мл) перемішують і ставлять пробірку в середнє гніздо переднього ряду; по обидва боки її поміщають стандарти з тим самим індикатором, що мають найбільш подібне за інтенсивністю забарвлення з випробуваним розчином. Перегляд ведуть у світлі, що проходитьвікна. Якщо колір розчину однаковий з одним із стандартів, то їх рН рівні; якщо він є проміжним між стандартами, припустимо 7,0 і 7,2, його рН приймають заПорядок визначення рН бульйону та інших кольорових середовищ. Передній ряд гнізд заповнюють, як описано вище; в задньому ряду компаратора поміщають посередині пробірку з 7 мл дистильованої води, а з боків - пробірки з бульйоном. Це робиться для вирівнювання умов досвіду, оскільки вимірюється рН кольорової рідини.
Якщо рН живильного середовища в пробірці нижче заданого, то її підлужують 0,4%-ним розчини їдкого натру. Вносять вимірювальною піпеткою одну краплю, перемішують і перевіряють результат. При необхідності луг додають, точно з огляду на її витрату. Піпетку заздалегідь треба вивірити, т. е. дізнатися, який обсяг має її крапля.
Зважаючи на те, що при стерилізації поживних середовищ їх рН падає, при підлужуванні випробуваної проби (а потім і всього середовища) її рН встановлюють на 0,2-0,3 вище заданого кінцевого рН.
Кількість лугу, необхідне коригування рН всього обсягу середовища (розчину), дізнаються за формулою
Так як виправлення рН всього об'єму проводить 10% розчином їдкого натру, то знайдений об'єм розчину лугу треба зменшити в 25 разів.
Для приблизного визначення рН середовища (розчину) можна використовувати індикаторні папірці «Фан» та інші, але за умови, що індикатор при змочуванні папірця не змивається зі своєї смужки, а її показання перевірені за допомогою набору Міхаеліса або потенціометра.
Чи не знайшли те, що шукали? Скористайтеся пошуком: