фарбування мікроорганізмів
фарбування мікроорганізмів, один з широко застосовуваних методів мікробіологічної техніки, що полягає в фарбуванні клітин мікроорганізмів спец. барвниками.
фарбування мікроорганізмів проводиться для з'ясування їх морфології, фізіології, стану, деталей внутрішньої будови. Орієнтовне фарбування досягається простими способами фарбування, при яких застосовується якийсь один барвник: метиленовий синій або водно-спиртовий розчин фуксину. Простими способами фарбування користуються для виявлення в матеріалі мікроскопованих мікробів, визначення їх кількості, форми і розташування. Препарати, що містять тканинні та клітинні елементи, краще фарбувати метиленовим синім, який забарвлює тло препарату значно слабше, ніж тіла мікробних клітин. При складних диференціальних способах фарбування користуються 2 барвниками, з яких одна фарба є основною, а друга - додатковою. Крім барвників при складних способах фарбування застосовують знебарвлюючі речовини: спирт, кислоти та ін. Диференціальне фарбування дозволяє виявити різні клітинні структури, визначити особливості хімічного складу. Так, ліпіди, що містяться в клітинах, забарвлюються осмієвою кислотою в чорний, а Суданом — в червоний колір; метахроматин випадає у вакуолях у вигляді червоних зерен при фарбуванні нейтральним червоним, розчин Люголя забарвлює глікоген у коричневий, а гранульозу – у синій колір. Найбільш поширений метод диференціального забарвлення - забарвлення за Грамом, що є важливою діагностичною ознакою. Всі мікроорганізми можна розділити на 2 групи - грампозитивні та грамнегативні. Дріжджі, молочнокислі бактерії фарбуються за Грамом (тобто грампозитивні), мають синьо-фіолетовий колір; оцтовокислі бактерії не фарбуються за Грамом - мають червоний колір. Методзаснований на тому, що протоплазма одних видів мікроорганізмів утворює міцну, нерозчинну в спирті сполуку йоду з барвником; в інших видів це з'єднання не утворюється. Для фарбування препарат фіксують і обробляють карболовим розчином фіолетового генціанового, потім розчином Люголя. Препарати для фарбування готують на предметному склі. З рідких культур краплю матеріалу петлею наносять на предметне скло та розподіляють по поверхні. З культури на щільному середовищі петлею беруть невелику кількість досліджуваного матеріалу та розтирають у краплі води чи фізіології, розчину на предметному склі. Мазку дають висохнути на повітрі, потім фіксують. Найпростіший спосіб – фіксація жаром. Тримаючи скло мазком вгору, його тричі проводять через полум'я газового або спиртового пальника. Щоб уникнути перегріву препарату, час фіксації не повинен перевищувати 5-6 с, а час прямого впливу полум'я - 2 с. Для фіксації препаратів застосовують також різні хімічні речовини та сполуки: етиловий та метиловий спирти, суміш Нікіфорова (спирт та ефір для наркозу у співвідношенні 1:1) та ін. При цьому скло з висушеним мазком занурюють у склянки з фіксуючою речовиною, а потім висушують на повітря. Дуже поширене прижиттєве фарбування нефіксованих клітин мікроорганізмів. Вживання флуоресцентних барвників (наприклад, акридинового помаранчевого) у поєднанні з люмінесцентною мікроскопією дозволяє розрізняти живі та мертві клітини мікроорганізмів: перші забарвлюються у зелений колір, другі – у червоний. О. м. користуються при визначенні фізіологічного стану дріжджів. Для цього застосовують водний розчин метиленового синього (1:10000). Мертві клітини швидко забарвлюються у синій колір, живі клітини не забарвлюються. У стадії бродіння дріжджові клітини характеризуються наявністю великогокількості запасних поживних речовин у вигляді глікогену та жиру. Глікоген забарвлюється розчином Люголя у червоно-бурий колір. Стадія голодування характеризується відсутністю запасних поживних речовин у клітинах дріжджів, що виявляється при фарбуванні їх розчином Люголю у жовтий колір.
Література: Лабінська А. С. Мікробіологія з технікою мікробіологічних досліджень. - 4-те вид. - Москва, 1978.