Фіксація (гістологія)

Фіксація- обробка зразка, призначеного для мікроскопування, з метою зберегти наскільки це можливо їх структури в незмінному стані [1] . В іншому випадку під дією власних ферментів, дії гнильних організмів і з інших причин зразок стає непридатним для дослідження. Застосовується в гістології та мікробіології, патологічній анатомії. Найбільш поширені хімічні методи фіксації; у мікробіології часто застосовується фіксація нагріванням.

Фіксація зразка передує його фарбуванню, за винятком вітального фарбування. У гістології фіксація є етапом, наступним відразу після отримання зразка.

Зміст

Фіксатори мають працювати швидко.
Не повинні викликати деформацію тканин або робити їх крихкими.
Повинні переводити клітинний вміст у стан, нерозчинний у воді та інших рідинах, що використовуються при подальшій обробці препарату.
Не повинні викликати затемнення препарату, а навпаки, сприяти його просвітленню.
Не повинні утворювати у клітинах артефактів фіксації.
Не повинні перешкоджати фарбуванню препарату вибраним методом. Це особливо актуально при використанні імуногістохімічних методів фарбування; Наприклад, з використанням звичайного формаліну антигенні структури часто виявити не вдається, у разі рекомендується використовувати забуференный (нейтральний) формалін.

Універсальних фіксаторів, однаково придатних для будь-яких цілей, немає. Вибір фіксуючого розчину ґрунтується на його перевагах та недоліках для роботи з конкретним видом матеріалу та придатністю для конкретного методу мікроскопічного дослідження.

Формалінові

Найбільш поширений тип фіксуючого розчину.Простий, дешевий, відносно небезпечний для працюючого. Використовуються водні розчини формальдегіду в чистому вигляді та у складі сумішей з іншими речовинами, наприклад, з оцтовою кислотою. Недолік формалінових фіксаторів – зайве ущільнення тканин [2] . Крім того, при використанні чистого формаліну часто можливе випадання білого осаду (кристали мурашиної кислоти). Тому найчастіше використовують "забуферений" нейтральний формалін.

Чистий етиловий спирт використовують у поодиноких випадках, так як він може викликати зморщування матеріалу.

Суміш Шаффера - складається з 2 частин 80% етилового спирту та 1 частини формаліну. Тривалість фіксації 1 - 2 дні.
Суміш Карнуа - з 6 частин абсолютного етилового спирту, 3 частин хлороформу та 1 частини оцтової кислоти. Готується безпосередньо перед вживанням. Тривалість фіксації 1/2 - 3 години. Суміш придатна для фіксації об'єктів, що мають щільні оболонки (комахи, круглі черви).
Рідина Дитріха - суміш етилового спирту, формаліну, оцтової кислоти та води. Тривалість фіксації 8 – 24 години. Придатна для членистоногих [3] .

На основі пікринової кислоти

Об'єкти, зафіксовані сумішами на основі пікринової кислоти, є нестійкими у воді, тому після фіксації об'єкт переносять у 70% спирт. Після фіксації об'єкт набуває жовтого забарвлення, що зазвичай не заважає роботі.

Суміш пікринової та оцтової кислот. Насичений розчин пікринової кислоти в 10% оцтової. Придатна для дрібних та ніжних об'єктів.
Суміш Буена. 15 частин насиченого водного розчину пікринової кислоти, 5 частин формаліну, 1 частина оцтової кислоти. Тривалість фіксації 2:00. Потім об'єкти можуть тривалий час не псуючись зберігатися безпосередньо в розчиніфіксатора [3].

Обережно! Отрута!Псує металеві предмети.

Фіксуючі суміші на основі сулеми працюють повільно. Застосовуються у гістології. Хороші ядерні фіксатори [4].

Осмієва кислота

Фіксатори на основі осмієвої кислоти мало змінюють структуру тканин та клітин. Відмінні ядерні фіксатори. Фарбують жири в темний колір [5]. В електронній мікроскопії застосовується як контрастна речовина. Надзвичайна отруйність та висока ціна обмежують застосування осмієвих фіксаторів.