Гематологічне дослідження

За змінами, що відбуваються в крові, можна судити про патологічні процеси, що протікають в організмі риб. Результати досліджень крові з урахуванням клінічних, епізоотологічних та патологоанатомічних даних дозволяють уточнити діагноз хвороби (табл. 12, 13, 14, 15).

Кров для дослідження беруть пастерівською піпеткою із судин гемального каналу хвостового стебла. Місце взяття обробляють 70%-ним спиртом, просушують ватним тампоном.

Визначення кількості еритроцитів та лейкоцитів. Кров набирають у змішувач меланжера, використовуваного для підрахунку еритроцитів ссавців, до мітки 0,5 або 1 і насмоктують рідину для фарбування та розведення крові до мітки 101 (розчин А: нейтральрот - 25 мг; натрій хлористий - 0,6 г, вода 100 мл, розчин Б: кристалвіолет – 12 мг, натрій лимоннокислий – 3,8 мг, формалін – 0,4 мл, вода дистильована – 100 мл). Розчин А набирають до половини розширення змішувача, розчин Б - до мітки 101. (Готують ці розчини безпосередньо перед дослідженням, зберігати можна в холодильнику не більше тижня.) Під дією розчинів лейкоцитів ядра забарвлюються в фіолетово-червоний колір, а цитоплазма - в рожевий. В еритроцитах ядра забарвлюються у синій колір.

Після наповнення знімають гумову трубку зі змішувача, захоплюють його між великим і середнім пальцями і сильно струшують 2-5 хв, після чого випускають з капіляра 3 краплі рідини, а 4 краплею заряджають лічильну камеру.

Принцип методу зводиться до підрахунку формених елементів (еритроцитів, лейкоцитів) у камері Горяєва. Спочатку під малим збільшенням мікроскопа знаходять сітку та встановлюють рівномірність розподілу клітин, а потім підраховують їх. Еритроцити вважають у 5 квадратах (80 малих),розташовані по діагоналі камери Горяєва. У кожному малому квадраті враховують еритроцити, що знаходяться всередині нього, і ті, що стосуються або лежать на його верхній та лівій лініях.

Кількість еритроцитів визначають за формулою

де m – загальна кількість клітин у 80 квадратах; γ – ступінь розведення крові; Х - число еритроцитів 1 мкл.

Лейкоцити підраховують у 25 великих квадратах, поділених на малі (400 малих), і визначають за формулою

лімфоцити- невеликі клітини, трохи менше еритроцитів. Майже вся клітина заповнена ядром, цитоплазма видно як вузького обідка навколо ядра. По Романівському ядро забарвлюється у фіолетово-рожевий колір, цитоплазма – у блакитний.

Моноцити- найбільші клітини, бобоподібне ядро, розташоване ексцентрично, цитоплазма вакуолізована, зернистість відсутня.

Нейтрофіли- круглі клітини, мають овальне, паличкоподібне або сегментоване ядро, розташоване біля краю клітини. Залежно від віку та форми ядра клітини поділяють на мієлоцити, юні, паличкоядерні та сегментоядерні. Зернистість у цитоплазмі забарвлюється по Романівському - Гімзі у фіолетово-рожевий колір.

Еозинофіли- за морфологією подібні до нейтрофілів. У цитоплазмі знаходяться великі численні зернятка рожевого кольору.

Базофіливідрізняються наявністю в цитоплазмі зерен фіолетового кольору.

Висушений та фіксований метанолом або спирт-ефіром (1:1) мазок крові забарвлюють фарбою Романовського – Гімза. Розчин фарби попередньо розводять нейтральною дистильованою водою (1-2 краплі на 1 мл води). Розведену фарбу підшаровують під предметне скло, покладене мазком вниз або фарбують мазки в контейнерах. Залежно від температури повітря та якості фарби мазок забарвлюють30-60 хв. Після фарбування препарат швидко обполіскують водою, висушують на повітрі, проглядають під мікроскопом з імерсійним об'єктивом. Зазвичай прораховують 200 лейкоцитів загальноприйнятим способом.

Визначення вмісту гемоглобіну.

Метод Салі. У градуйовану пробірку гемометра Салі до мітки 2 піпеткою наливають децинормальний розчин соляної кислоти. Капілярною піпеткою набирають кров до мітки 20 мкл і вносять у пробірку із соляною кислотою. Потім перемішують скляною паличкою та залишають на 5 хв. Після чого добірку по краплях доливають дистильовану воду, перемішують і підбирають колір робочого розчину до збігу з кольором рідини в стандартних пробірках.

Кількість гемоглобіну крові відраховують по нижньому меніску на градуйованій пробірці. Виражають у р%.

Фотометричний метод. Мірною піпеткою в пробірку обережно наливають 5 мл розчину, що трансформує (бікарбонат натрію - 1 г, червона кров'яна сіль - 0,2, ціанистий калій або натрій - 0,05 г, дистильована вода - до 1 л). Піпеткою від гемометра Салі додають 20 мкл крові, промиваючи її розчином шляхом поперемінного вдування та видування. Вміст пробірки перемішують та залишають на 20 хв у холодильнику. Потім розчин з пробірки наливають у кювети ФЕК та, використовуючи зелений світлофільтр, проводять вимірювання. Розрахунок гемоглобіну (г/л) виробляють за формулою Х = D540 · 367,1 г/л, де D540 - показання ФЕК; 367,1 – коефіцієнт перерахунку.