Гібридомна технологія отримання моноклональних антитіл

Введення антигену (бактерій, вірусів тощо) викликає утворення різноманітних антитіл проти багатьох детермінантів антигену. У 1975 р. Г. Келер та К. Міліптейн (лауреати Нобелівської премії) отримали моноклональні антитіла за допомогою гібридомної технології.

Моноклональні антитіла - це імуноглобуліни, що синтезується одним клоном клітин. Моноклональне антитіло зв'язується лише з однією антигенною детермінантою на молекулі антигену.

Гібридомна технологія - злиття за допомогою поліетиленглі-колю лімфоцитів селезінки попередньо імунізованих організмів певним антигеном з мієломними (раковими) клітинами, здатними до нескінченної проліферації (поділу). Гібридні клітини селекціонують у середовищі ГАТ (середовище, що містить гіпоксантин, аміноптерин і тимідин). Незлилися лімфоцити гинуть у будь-якій тканинній культурі. Мієломні клітини на цьому середовищі також гинуть, оскільки вони були дефектні за ГГФТ (гіпоксантин-гуанозин-фосфорибозилтрансфераз). Відбирають клони клітин, які синтезують необхідні антитіла (рис. 28). Потрібні клони можна зберігати у замороженому стані.

Таким чином, гібридоми є безсмертні клони клітин, що синтезують моноклональні антитіла.

Отримання та використання моноклональних антитіл - одне з істотних досягнень сучасної імунології. З їх допомогою можна визначити будь-яку імуногенну речовину. У медицині мічені ізотопами або в інший спосіб моноклональні антитіла можна використовувати для діагностики раку та визначення локалізації пухлини, для діагностики інфаркту міокарда. Отримано моноклональні антитіла до різних збудників: малярії, трипаносомозу, лейшманіозу, токсо-плазмозу та ін. Вчені вважають, що в найближчому майбутньому моноклональні антитіла займуть домінуюче положеннядіагностики хвороб. Для використання в терапії моноклональні антитіла можна з'єднувати з ліками (наприклад, з токсичними речовинами) завдяки специфічності антитіл вони доносять цю речовину безпосередньо до ракових клітин

моноклональних

Мал. 28. Отримання моноклональних антитіл (але Міліптейну, 1982)

або патогенних мікроорганізмів, що дозволяє значно підвищити ефективність лікування. Можна використовувати моноклональні антитіла (проти Н - Y-антигена) для визначення статі у великої рогатої худоби на передімплантаційній стадії розвитку, а також для стандартизації методів типування тканин при трансплантації органів, при вивченні клітинних мембран (так були вивчені антигени Т-лімфоцитів), побудови антигенних карток вірусів, збудників хвороб.

Лекція-15 Ембріогенетична інженерія.

План:КЛОНУВАННЯ ЕМБРІОНІВ ссавців

Ембріогенетична інженерія - це активна перебудова геному тварин шляхом втручання в їх розвиток на ранніх стадіях онтогенезу. Перебудова геному — це реконструкція ембріонів шляхом клонування, злиття чи безпосередньої ін'єкції у тому ядра чужорідної ДНК. Однак отримання ембріональних клонів, химерів або трансгенних тварин можливе лише в результаті успішної трансплантації реконструйованого ембріона.

Трансплантація - метод прискореного відтворення високопродуктивних тварин шляхом отримання та перенесення одного або декількох ембріонів від високоцінних тварин (донорів) менш цінним тваринам (реципієнтам). Використання трансплантації дозволяє отримувати від однієї генетично цінної самки вдесятеро більше потомства.

Технологія трансплантації спирається на великі досягнення в галузі біології розмноження тварин і включає наступніприйоми: 1) гормональне викликання суперовуляції; 2) запліднення донорів насінням виробників, оцінених за якістю потомства; 3) вилучення та оцінку якості ембріонів, збереження та пересадку або кріоконсервування ембріонів у рідкому азоті, відтавання та пересадку.

Трансплантацію ембріонів застосовують для наступних цілей:

розмноження генетично цінних особин; за допомогою цього методу може бути вирішене питання швидкого створення високопродуктивних ліній та сімейств, резистентних до хвороб;

отримання ідентичних тварин шляхом поділу ранніх ембріонів Це дає можливість вивчити взаємодію генотип — середовище, з'ясувати вплив спадковості на господарсько корисні ознаки. Технологія поділу ембріонів дозволяє одну половину отриманої бластоцисти піддати глибокому охолодженню, а з іншої виростити тварину. Якщо виробник (з однієї половини бластоцисти) виявиться генетично цінним, то є можливість відтворити його копію через певний проміжок часу;

збереження мутантних генів, мінімальних популяцій і генофон та порід;

отримання нащадків від безплідних, але генетично цінних за генотипом тварин;

5) виявлення шкідливих рецесивних генів та хромосомних аномалій;

підвищення стійкості тварин до хвороб;

боротьби з хворобами шляхом заміни імпорту та експорту тварин на імпорт та експорт кріоконсервованих ембріонів;

акліматизації імпортних тварин іноземних порід;

визначення статі ембріона та отримання тварин певної статі;

отримання химерних тварин, що розвиваються з ранніх ембріонів, сконструйованих із бластомерів різних тварин.