Гіпофізи, що використовуються для ін’єкції різних видів риб
Слід враховувати, що гонадотропні гормони в ряді випадків мають видову специфічність, що виражається в тому, що гонадотропні гормони одних видів риб виявляються неефективними при використанні на інших видах. Так, гонадотропіни риб сімейства окуневих (судак, окунь та ін) не викликають дозрівання у коропових риб.
При проведенні гіпофізарних ін'єкцій потрібно використовувати гіпофізи тих видів риб, які містять ефективний гонадотропний гормон. Для стимуляції дозрівання статевих клітин осетрових слід користуватися гіпофізами риб тієї самої родини. При гіпофізарних ін'єкціях риб сімейства коропових (коропа, сазану, білого амуру і товстолобика) потрібно використовувати гіпофізи сазана. Для отримання зрілих статевих клітин у окуневих (судак та ін) потрібно застосовувати ацетоновані гіпофізи риб того ж сімейства, а також гіпофізи сазану. Для ряду об'єктів рибництва можна застосовувати гіпофізи ссавців, зокрема хоріонічного гонадотропіну.
Проведення гіпофізарних ін'єкцій у коропових риб
Для гормональної стимуляції дозрівання сазану чи коропа застосовують гіпофізи сазану, ляща весняної чи осінньої заготовки.
Існує кілька схем проведення ін'єкцій у коропових риб. При ранньому отриманні ікри необхідно використовувати схему дробу гіпофізарних ін'єкцій. У цьому випадку перша доза гіпофізарного матеріалу має бути невеликою, 1/3 частиною загальної дози, стимулюючи тільки швидкість розвитку ооцитів, не викликаючи порушень. Дробна схема в залежності від ступеня зрілості яєчників застосовується по-різному.
1. Отримання ікри від риб, яєчники яких перебувають у стані, близькому до зрілості (це IV, близько V стадії). Самки цієї групи, як правило, мають м'яке округле черевце. Ядра у більшості ооцитівстаршої генерації розташовуються біля оболонки.
У діапазоні нерестових температур стабільні результати дозрівання таких самок можна отримати при дворазовому введенні гонадотропного матеріалу. Розмір доз гіпофізарних ін'єкцій залежно від температури води буде різною. З підвищенням температури дози гонадотропного матеріалу необхідно знижувати. Одночасне дозрівання самок можна отримувати при температурі води 19-20 0 С та величині першої дози гонадотропного матеріалу 0,3 мг/кг, а другий 2 мг/кг. Проміжок між першою та другою ін'єкцій має бути 12 годин. За коротший проміжок часу в ооцитах не встигають відбутися необхідні морфологічні зміни, спричинені введенням першої (невеликої) дози гонадотропного гормону. У цьому випадку ін'єкція другої (більшої) дози гормону може спричинити порушення процесів дозрівання.
2.Отримання ікри від риб, яєчники яких далекі від зрілості. До цієї групи слід віднести самок, у яких більшість ооцитів старшої генерації має ядро, розташоване у центрі. Хороших результатів дозрівання (90-100%) таких самок можна досягти при поступовому введенні доз гонадотропного матеріалу, що збільшуються. Невеликі дози гормону, що поступово збільшуються, стимулюють процеси дозрівання ооцитів, прискорюючи просування ядра до оболонки, і готують яйцеклітину до нормальної реакції на великі дози гормону. Без такої попередньої підготовки ооцитів запровадження великих доз гормону, необхідні овуляції, викликає порушення розвитку ікри.
Для стимуляції розвитку ооцитів, ядра яких ще в центрі, найбільш зручно застосовувати триразові ін'єкції, у яких перша доза повинна становити 0,2 мг/кг, друга – 0,4 мг/кг, а третя – 2 мг/кг. За відсутності овуляції ікри частини самок після третьоїІн'єкції стимуляцію можна продовжувати, при цьому доза кожної наступної ін'єкції має бути збільшена на 0,25-0,5 мг/кг. Проміжок часу між введенням першої та другої доз гормонального матеріалу дорівнює 6 год. Третя ін'єкція проводиться через 12 год після другої, проміжок часу введення кожної наступної дози – 24 години.
Самці добре дозрівають після одноразового введення гонадотропного матеріалу. Порівняно із самками їм за один раз вводиться половинна доза ацетонованих гіпофізів.
Ін'єктування самців проводять одночасно із запровадженням самкам останньої порції гіпофізів.
При штучному отриманні ікри дуже важливо вловити момент дозрівання яйцеклітин, інакше самки самостійно помітять ікру. Для цього за 2-3 години до наміченого терміну дозрівання проводять перевірку самок. Відлік часу передбачуваного дозрівання виробляють від другої чи третьої ін'єкції залежно від обраної схеми. Тривалість дозрівання ікри залежить від температури води.
При температурі 20 0 З самки віддають ікру через 12-14 год після останньої за схемою ін'єкції. У разі відсутності дозрівання перевірку самок проводять повторно через 1,5-2 години.
Визначення термінів отримання ікри
Після ін'єкції стежать за умовами утримання виробників та перебігом дозрівання статевих залоз. Особливо ретельно спостерігають за самками. Самці дозрівають раніше.
Взятие від самки ікри слід проводити тоді, коли закінчується овуляція всієї ікри або коли її більша частина вже овулювала, а решта підготовлена до овуляції (ооцити вийшли з фолікул). Потрібно проводити частий огляд самок. Перші ознаки підготовки до взяття ікри: м'яке черевце, під час підйому риби значно западає черевна стінка. Можна за допомогою щупа взяти кілька ооцитів для проведенняаналізу, при якому встановлюють, видно чи ні зародковий пляшечку.
Для осетрових також розроблені графіки, якими можна визначити терміни отримання зрілої ікри після гіпофізарної ін'єкції.
По вертикальній осі відкладено час у годинах від моменту ін'єкції, горизонтальної осі відкладено середні температури за період дозрівання самок. Нижня крива показує, коли самки починають дозрівати, верхня показує час, після якого самки не дають ікру.
Методи отримання статевих продуктів та визначення їх якості
При наступі стадії плинності у виробників відбирають ікру. У самок, готових до нересту з генітального отвору, вільно витікає ікра при легкому натисканні.
Існує три методи відбору ікри:
Тема № 7. БІОЛОГІЧНІ ОСОБЛИВОСТІ ВИРОБНИКІВ, ОТРИМАННЯ ПІДЛОВИХ КЛІТИН І НАСІМ'ЯННЯ ІКРИ
Після отримання зрілих статевих продуктів, визначення їх якості та обліку приступають до осіменіння ікри. Основне завдання штучного запліднення створити умови, що забезпечують проникнення сперматозоїда в яйцеклітину.
Способи запліднення ікри
Існують три способи запліднення ікри: сухий, напівсухий, мокрий.
У практиці штучного риборозведення провідне місце займають сухий та напівсухий способи для таких риб, як лососеві, коропові, осетрові. Цей спосіб дає хороші результати за дотримання певних умов. Одним з них є облік тривалості контакту яєць та сперміїв у суміші з водою. Не у всіх риб спермії активізуються в порожнинній рідині і лише при розведенні водою набувають активності та зберігають життєздатність при контактуванні води та порожнинної рідини, в якій знаходиться ікра.
Сперма після контакту з водою активується, проте швидкістьрухи сперміїв у воді знижується досить швидко. Спермії форелі через 4 секунди після активації водою знижують швидкість руху, а через 8 секунд удвічі знижується швидкість руху. Спермії білуги вже через 2 хвилини після активації водою рухаються зі швидкістю, яка становить 72% від їхньої початкової. У коропа в ставковій воді лише окремі спермії зберігають здатність до руху зрідка до 2 хвилин. Більшість сперміїв коропа припиняє будь-який рух найчастіше вже через 30-50 секунд після активації водою. У горбуші та кети, що нерестують на швидкій течії, рухливість сперми у воді зберігається лише протягом 10-15 сек. В українського осетра та севрюги, які нерестують на повільнішій течії рухливість зберігається близько 230-290 сек.
Сперма, розведена у певному обсязі води, створює концентрацію сперміїв навколо ікринок. Для того, щоб відбулося запліднення, потрібна певна концентрація сперміїв, причому не однакова для різних ікринок. Встановлений оптимум розведення у воді сперми багатьох видів риб становить 1:200, що відповідає концентрації 107 сперміїв на 1 мл води, і ця концентрація є оптимальною для багатьох видів риб (осетрових і лососевих).
Спермії, потрапляючи у воду, набувають рухливості і, проникаючи через мікропилку в ікринку, запліднюють її. Ікру зазвичай запліднюють сумішшю сперми від трьох-п'яти самців. В результаті забезпечується високоякісне запліднення. У звичайних умовах осіменіння виробляють пізніше як за 10-20 хв. після взяття ікри, т.к. затримка може призвести до погіршення її якості. Через 2-3 хвилини після запліднення завершується запліднення ікри.
Підготовка ікри до інкубації
Після запліднення з икринкою відбуваються деякі зміни. Ікринка починає вбиративоду через перфоровану оболонку – хоріон. Наприклад, у лососевих у перші 40 хв. еластичність ікри зростає, потім поступово посилюючись досягає максимуму через 3 години після запліднення. Після запліднення ікринку під дією води виділяє в перивітеліновий простір осмотично активні речовини, які вбирають воду під оболонку. На той час порушена оболонка-хорион – ще остаточно не затверділа. Затвердівши, вона визначає готовність ікри до інкубації.
В даний час застосовують апарати, що дозволяють механізувати процес знеклеювання. Один з таких апаратів створений Орловим, є циліндром з подвійним дном, з'єднаний із системою подачі повітря від компресора. Знеклеювання виробляють наступним чином. У циліндр подають повітря, потім в нього наливають рідину, що знеклеює, і регулюють краном витрата повітря таким чином, щоб повітряні бульбашки інтенсивно перемішували її за допомогою перфорованого вкладиша, жорстко закріпленого в нижній частині ємності.
На осетрових заводах для знеклеювання ікри застосовують апарат, типу АОІ (апарат знеклеювання ікри), що є трубчастою рамою, на якій розміщено 5 судин для знеклеювання ікри, забезпечених водозбірниками і трубками для зливу води. На рамі вмонтовано відкидний столик для ємностей з відмитою ікрою та зливний лоток. У судини, куди за допомогою гнучких шлангів підводять воду і повітря, заливають розчин води з рідиною, що знеклеює, і закладають 10-15 кг заплідненої ікри. Повітря, що подається знизу, перемішує ікру і воду, в результаті чого відбувається її знеклеювання. Знеклеєну ікру промивають і зливають у приготовлені на столику ємності.
На Великолуцькому рибоводному комбінаті розроблено пристрій для механізованого відмивання ікрикоропових риб одночасно у 10 тазах. Воно складається із зварної рами, горизонтальних валиків, електродвигуна, клинопасової передачі. Робочі валики забезпечені пташиним пір'ям. Швидкість обертання валиків 1 об/сек. Процес підготовки до інкубації завершується залишенням ікри для набухання.