Глюкозооксидазним методом
Принцип методу.Метод заснований на специфічності дії ферменту глюкозооксидази. Цей фермент окислює глюкозу в присутності молекулярного кисню з утворенням глюконолактону, що спонтанно гідролізується до глюконової кислоти. Глюкозооксидаза окислює глюкозу з утворенням пероксиду водню (Н2О2), який під дією пероксидази реагує з 4-аміноантипірином та фенолом. В результаті утворюється забарвлена в рожевий колір з'єднання, оптична щільність якого при 510 нм пропорційна концентрації глюкози у зразку.
глюкоза + О2 + Н2О → глюконова кислота + Н2О2
2 Н2О2 + 4-аміноантипірин + фенол → хінонімін + 4Н2О
Обладнання:КФК, центрифуга, термостат, штативи, пробірки, піпетки, біологічний матеріал, реактиви, що містяться в робочому розчині.
| пробірки | |||
| дослідна проба, мл | стандартна проба, мл | холостий проба (Н2О), мл | |
| Сироватка крові | 0,02 | - | - |
| Калібрувальний розчин глюкози (еталон) | --- | 0,02 | --- |
| Робочий розчин |
Пробірки інкубують у термостаті при 37 про 15 хвилин, потім колориметрують на КФК при зеленому світлофільтрі в кюветах з товщиною шару 5 мм проти холостої проби (Н2О). Рожеве забарвлення стійке протягом 1 години після інкубації.
Розрахуноквмісту глюкози виробляють за формулою:
З = х З стандарт, де
Еоп- оптична щільність проби;
Єст -оптична щільність калібрувальної проби;
Нормальні величини: · Новонароджені – 2,8-4,4 ммоль/л
- діти – 3,9 -5,8 ммоль/л
- дорослі – 3,9 – 6,2 ммоль/л
Гіпоглікемія (ГГК).Підвищення рівня глюкози в кровіобумовлено безліччю причин, відповідно до яких розрізняють дві групи гіперглікемії.
2. Екстраінсулярні (неінсулярні) – не залежать від впливу інсуліну.
Найбільш важливе значення у формуванні ГГК мають такі процеси: посилений розпад глікогену; підвищений неоглюкогенез; гальмування синтезу глікогену; зниження утилізації глюкози тканинами під впливом гормональних антагоністів інсуліну: соматотропіну, глюкортикоїдів, тироксину, тиреотропіну.
Аліментарні гіперглікемії відзначають при надмірному надходженні глюкози в кров (наприклад, гіперглікемія при цукровому навантаженні). Печінкові гіперглікемії зустрічаються при дифузних ураженнях печінки.
Стійка та виражена гіперглікемія найчастіше супроводжує цукровий діабет. Прийнято виділяти інсулінзалежний цукровий діабет та інсуліннезалежний цукровий діабет, або, відповідно, цукровий діабет I типу та цукровий діабет II типу. Формування цукрового діабету I типу пов'язано, насамперед, із порушеннями синтезу та обміну інсуліну.
Друга група гіперглікемій пов'язана, перш за все, з гіперфункцією ендокринних залоз, які продукують гормони – антагоністи інсуліну. Вона спостерігається при таких захворюваннях, як синдром та хвороба Іценка-Кушинга, акромегалія, тиреотоксикоз, феохромоцитома, глюкоганома. Рівень глюкози в крові підвищується і при деяких захворюваннях печінки (зокрема, у 10-30% хворих на цироз печінки), гемохроматозі (пігментний цироз печінки, бронзовий діабет).
Гіпоглікемія (ГПГ)- зниження вмісту глюкози в крові - найчастіше пов'язана з абсолютним або відносним підвищенням рівня інсуліну в крові. Позапанкреатична гіпоглікемія відзначається внаслідок порушення балансу між вираженістю процесів глікогенолізу та гліконеогенезу у печінці.при гострих та хронічних гепатитах, цирозах, гострій та підгострій дистрофії печінки, алкогольній інтоксикації, отруєннях миш'яком, фосфором, при тривалій механічній жовтяниці, застійній печінці, первинному або метастатичному раку печінки. Зниження концентрації глюкози в крові часто спостерігається у хворих, які страждають на рак стравоходу та інші злоякісні пухлини позапанкреатичної локалізації (фіброму, фібросаркому, нейрому), а також при неприборканому блюванні, анорексії, печінковому діабеті, уремії, рясній лактації.
Гіпоглікемія може бути центрального походження внаслідок перенесених психічних травм, енцефаліту, субарахноїдального крововиливу, пухлини мозку.
1. Спадкові порушення травлення вуглеводів.
2. Які види гіперглюкоземії вам відомі?
3. Які причини патологічної гіперглюкоземії?
4. У чому причина виникнення інсулінзалежного цукрового діабету?
5. Якими є біохімічні причини виникнення спадкових захворювань: а)глікогенозів? б) аглікогенозів? в) фруктоземії? г) галактоземії?
6. Якими є біохімічні зміни вуглеводного обміну при голодуванні?
7. Принцип методу визначення толерантності до глюкози.