Культивування вірусів у культурі клітин - Основи ветеринарної вірусології - Інформація

Культивування вірусів у культурі клітин

Культури клітин та тканин – це шматочки органів та тканин, вирощених у живильному середовищі поза організмом, зберігають життєздатність, а деякі розмножуються.

Для культивування необхідні:

- Вихідний матеріал (тканини ембріонів, клітини нирки, шкіри, селезінки). Обов'язкове дотримання правил асептики та антисептики;

- температура має бути 36 -38 градусів Цельсія;

- живильне середовище, яка повинна мати буферність і ізотонічність, тобто. включати Na, K, Ca, Mg, Cl, фосфати, карбонати;

- РН середовища має бути 7,2 – 7,4 одиниць;

- усі поживні елементи, особливо глюкоза, що відповідає за енергетичний обмін;

- вітаміни, які є коферментами.

Середовища бувають двох видів:

1. натуральні чи природні ( кров, амніотична рідина);

2. 2.синтетичні та напівсинтетичні (з хімічних речовин, сольові розчини – розчин Ерла та розчин Хенкса)

Методика зводиться до такого:

1. добору культури клітин;

2. отримання вірус-містить матеріалу;

3. підготовці для зараження;

4. зараження клітин виукраїнсодержащим матеріалом;

5. культивування вірусу у клітинах;

6. індикації вірусу у культурі клітин;

7. збору культуральної рідини та ідентифікації у ній вірусу.

Вибір культур клітин. Не всяка клітина чутлива до будь-якого вірусу. Вірус до первинної культури зазвичай успішно адаптується за умови, якщо культура отримана з органів тварини, природно сприйнятливого до цього вірусу. Однак адаптація вірусу до клітин, що перевиваються, більш складна, а в ряді випадків нездійсненна. Для культивування деяких вірусів досіневідомо жодної клітинної системи. Для культивування вірусу використовують зазвичай молоді клітини, тобто в перший день формування моношару, а в деяких випадках (для парвовірусів свиней) клітини заражають при їх посіві, так як вірус інтенсивно розмножується за наявності клітин, що діляться (коли вони знаходяться в стадії логарифмічного росту ).

Для цього відбирають пробірки (або матраци) із суцільним клітинним моношаром, переглядаючи їх під малим збільшенням мікроскопа. Ростове живильне середовище зливають, клітини 1-2 рази промивають розчином Хенкса, щоб видалити сироваткові антитіла та інгібітори. У кожну пробірку вносять по 0,1-0,2 мл матеріалу, що містить віукраїн, і похитуванням розподіляють його рівномірно по шару клітин. У такому вигляді пробірки (матраци) залишають від 1 до 2 год при 22 або 37 "З для адсорбції вірусу на поверхні клітин. Потім виукраїнсодержащий матеріал видаляють з пробірок (матраців) і наливають підтримуюче середовище (в пробірку 1-2 мл, матраци близько 10% його об'єму) При виділенні вірусу з патологічного матеріалу деякі проби (фекалій та ін.) можуть надавати токсичну дію на клітини, тому після адсорбції вірусу моношар клітин відмивають 1-2 рази розчином Хенкса (або живильним середовищем) і потім наливають підтримуюче середовище .

Пробірки (матраци) герметично закривають гумовими пробками і ставлять на інкубацію в термостат при 37 °С. Найбільш широко застосовують стаціонарне інкубування. При цьому матраци кладуть у горизонтальному положенні, пробірки - під кутом 5 ° так, щоб моношар клітин виявився під живильним середовищем (чортом вгору). У ряді лабораторій заражені культури клітин інкубують на системі, що обертається, — ролерах. Використовуючи цей метод, вдається отримувати великий вихід вірусу, що має більш високий інфекційний титр, ніж пристаціонарне культивування.

Для кожної проби матеріалу зазвичай використовують не менше 4-10 пробірок із культурою клітин. Для контролю залишають 4-6 пробірок із незараженою культурою клітин, у яких замінюють ростове середовище на підтримуючу.

У культурах клітин, заражених вірусом, живильне середовище можна змінювати протягом 7 днів, а рН середовища (6,9—7,4) підтримувати з допомогою 7,5%-ного розчину бікарбонату натрію. При більш тривалому культивуванні інфікованих клітин (аденовіруси та ін) середовище змінюють.

Усі пробірки (матраци) після зараження клітин щодня досліджують під малим збільшенням мікроскопа, порівнюючи культури клітин, заражені вірусом, із контрольними.

У термостаті вірусні частинки, що адсорбувалися на клітинах, проникають усередину їх і починається їх репродукція. Нові вірусні частинки залишають (повністю або частково) клітини, в яких вони утворилися, проникають у неуражені клітини, репродукуються в них, переходять у нові клітини та вражають їх. Так продовжується доти, доки є живі непошкоджені клітини. Внаслідок цього процесу практично всі клітини в матраці або пробірці уражаються вірусом, хоча абсолютно всі майже ніколи не уражаються.

Анатомія рис. 4 Дихальна система людини складається з тканин та органів, що забезпечують легеневу вентиляцію та легеневе дихання. До повітроносних шляхів відносяться: ніс, порожнина носа, носоглотка, горло, трахея, бронхи та бронхіоли. Легкі складаються.

Вплив освітленості, рівня та течії води на рибця Течі впливають на фізичні, хімічні та біологічні процеси, що відбуваються у водоймах. Теплі течії, що приносять тепло в холодноводні райони, створюють сприятливі умови для розвитку кормових організмів, а отже, і для ри.

Опис Головаконя - витягнута, суха, з великими живими очима, широкими ніздрями і великими або середньої величини загостреними і рухливими вухами. У домашнього коня вуха помірної величини (набагато менше половини голови). Грива довга.

---