Методи фіксації ґрунтомешканцівбезхребетних

Більшість почвообитающих безхребетних може бути ідентифікована лише після їх фіксації, і тільки для енхітреїд та деяких груп молюсків розроблені методи прижиттєвого визначення.

Тому спосіб фіксації має значення як визначення матеріалу, так його збереження в колекціях.

Для фіксації представників мезофауни та мікроартропод найбільш широко застосовуються 70-80 °-ний етиловий спирт і 4%-ний формалін. При розведенні спирту та формаліну для приготування фіксатора необхідно використовувати дистильовану, дощову або кілька разів кип'ячену воду. У разі розведення цих реактивів жорсткою водою часто спостерігається випадання пластівцевого осаду, який псує фіксований матеріал. Не допускається також використовувати воду, пофарбовану оксидами важких металів, яка може змінити фарбування та структуру покривів тварин.

При тривалому зберіганні в спирті або формаліні тварини втрачають пружність покривів і розм'якшуються, або, навпаки, зморщуються, стають крихкими і ламаються. У таких випадках їх ідентифікація або використання більш тонких морфологічних досліджень стає неможливим. Нині окремих груп грунтових безхребетних розроблені специфічні методи фіксації з урахуванням особливостей покривів і структури тварин і рекомендуються різні фіксуючі суміші, складені з урахуванням розчинів спирту чи формаліну.

Личинок комах з сильно склеротизованими покривами, таких, як дротяники і несправжньодротяники, а також літобоїд, фіксують 70°-ним спиртом з додаванням гліцерину (2-3%). Гліцерин сприяє збереженню еластичності покривів. Через 2-3 тижні матеріал переносять у чистий 70 °-ний спирт, в якому він зберігається роками.

При фіксації личиноккомах з більш м'якими покривами (личинки м'якотіл, жужелиць, азілід) рекомендується додавати в спирт деяку кількість формаліну для запобігання покривам тварин від мацерації. Для тривалого зберігання цих личинок необхідно за кілька тижнів перенести в спирт.

Великі личинки з білими м'якими покривами (личинки пластинчатоусих, довгоносиків, багатьох двокрилих) у спирті або формаліні темніють і втрачають свою форму, внаслідок мікробіальних та автолітичних процесів, що розвиваються в їхньому кишечнику після фіксації, поки фіксатор не просочить всі внутрішні органи. Тому їх рекомендується фіксувати окропом. Личинок заливають окропом, а після того, як вони спливають, поміщають у спирт. При обварюванні окропом відбувається згортання білків, що сприяє збереженню форми тіла та забарвлення покривів. Великих личинок слід поварити окропі. 2-3 хв. При цьому потрібно стежити, щоб поверхня води, в якій личинки варяться, була спокійною. При бурхливому кипінні бульбашки повітря, що виділяються з тканин тварин, можуть деформувати їхнє тіло. При обварюванні окропом у м'яких личинок розправляються покриви і на них стають видні різні структури, які важко помітити на живих або зафіксованих іншими способами тварин. Часто ці зовнішні структури мають діагностичне значення. Тому в деяких визначальних таблицях опис будівлі тварин дається за матеріалом, фіксованим окропом (Brauns, 1968). Після фіксації окропом личинок рекомендується деякий час тримати в спирті з домішкою формаліну, а потім переносити їх у чистий 70°-ний спирт.

Особливі труднощі становить фіксація гусениць. Здебільшого це форми з м'якими покривами, що потребують спеціальної обробки для збереження форми тіла. Однак фіксаціяокропом або формаліном руйнує забарвлення та малюнок покривів, які є важливими діагностичними ознаками. Для фіксації гусениць пропонується спеціальна суміш наступного складу: спирт, саліцилова кислота, кухонна сіль (реактив), дистильована вода.

2 г саліцилової кислоти розчиняють у 100 мл 96°-ного спирту. Розчин змішують із 100 мл 1%-ного розчину кухонної солі. Цей фіксатор можна використовувати через 24 години після приготування. У нього вміщують Живих гусениць. Рівень фіксуючої рідини повинен бути не менше ніж на 0,5 см вище за рівень фіксованого матеріалу. Фіксатор, як і фіксований матеріал, повинен зберігатись у темряві. При цьому фарбування гусениць зберігається від 5-6 міс. до 5 років (Мержеєвська, 1965).

Для личинок комах та багатоніжок зі світлими або прозорими покривами рекомендуються також наступні суміші, в яких зберігаються фарбування та структура покривів тварин без попередньої обробки окропом:

спирт (96 ° -ний) -6 мл, формалін (40%-ний) - 15 мл, крижана оцтова кислота - 2 мл, дистильована вода - 30 мл (van Emden, 1958; Гіляров, 1964);
спирт (96 ° -ний) - 750 мл, ефір - 250 мл, крижана оцтова кислота - 30 мл, формалін (40%-ний) - 3 мл (Wallwork, 1970).

Дощових черв'яків фіксують слабким розчином формаліну, в якому вони спочатку дуже активно рухаються, звиваються і потім гинуть у скрученому стані. Відразу після того, як тварини перестануть рухатися в розчині, їх треба вийняти, розправити на фільтрувальному папері і стерти ваткою слиз. Через кілька хвилин, коли черв'яки трохи підсохнуть і зафіксуються в розправленому стані, їх поміщають у довгі хімічні пробірки з 4%-ним розчином формаліну, в якому вони довго зберігають форму тіла і можуть використовуватись дляморфологічних досліджень (Малевич, 1951).

Мермітіди, виявлені в грунті, фіксуються в 40°-му спирті, або 3-4%-ному формаліні, або в спеціальній суміші - рідини Барбагалла наступного складу: 100 мл дистильованої води, 30 мл 40%-ного формаліну, 8 г кухонної солі (Реактив). Ця суміш є ізотонічний розчин, в якому мермітіди зберігають еластичність покривів і забарвлення. У ґрунті ці черв'яки зустрічаються в сильно скрученому стані. Тому перед фіксацією їх потрібно розправляти. Розправлення проводиться у воді під час нагрівання до 40°С. До води іноді додають 1% хлоральгідрату. При цьому м'язи хробаків розслаблюються і хробаки розтягуються. Процедура розтягування триває близько години. У нерозправлених черв'яків покриви тверднуть і стають крихкими. Якщо вони були зафіксовані в нерозправленому стані, їх слід розтягувати в суміші 35-50 °-ного спирту з молочною кислотою щодо 1: 1 протягом 18-24 год. Потім черв'яків відмивають від молочної кислоти спиртом (Положанцев, Артюховський, 1963).

Дрібні безхребетні, що відносяться до мікрофауни, фіксуються при екстракції з ґрунту 70° спиртом. Нематоди фіксуються послідовно 5- та 10%-ним розчином формаліну, в останньому вони можуть і зберігатися довгий час. «Для визначення та підрахунку кількості мікроартроподів та нематодів, як правило, практикується приготування постійних або тимчасових препаратів на предметному склі. Для визначення нематод, симфілу та простигматичних кліщів рекомендується приготування тимчасових препаратів з лактофенолом, який змішується з полівініловим спиртом щодо 1:1. Цей склад одночасно просвітлює покриви і цим полегшує визначення (Wallwork, 1970).

Для панцирних кліщів та коллембол, як правило, використовується рідина Фора-Берлезе, зручна для швидкого приготування постійних препаратів: гуміарабік - 30 г, дистильована вода - 50 г, хлоральгідрат - 200 г, гліцерин - 20 г. При приготуванні цієї суміші гуміарабік заливають спочатку водою і витримують у термостаті при 37 ° С до повного розчину. Потім додають гліцерин та хлоральгідрат і цю суміш ще дві доби витримують у темному місці, а потім фільтрують через скляну вату. При використанні рідини Фора-Берлезе препарати можна заливати тварин після первинної фіксації їх спиртом без попереднього зневоднення (Гіляров, 1964).

Постійні препарати мікроартропод, однак, рідко повністю задовольняють вимоги систематиків. При мікроскопічному вивченні матеріалу деякі деталі будови тварин неможливо розглянути. Тому останнім часом все ширше поширюється застосування тимчасових препаратів на предметних шибках з виїмкою. Вилучення неповністю прикривається покривним склом, і в цей відкритий простір піпеткою вносять краплю молочної кислоти або гліцерину. Тварин поміщають у цю краплю поруч із краєм покривного скла. При мікроскопічному вивченні тварин їх можна повертати легким рухом покривного скельця, або тонкою голкою. Після цього тварин знову можна повертати до спирту або іншого постійного фіксатора. Колекції кліщів рекомендується зберігати у рідині, що складається з 1 частини гліцерину та 9 частин 70°-ного спирту. Кліщів поміщають у поліетиленові мікропробірки, заповнені до країв цією рідиною (Вагг, 1973). Тривале зберігання в молочній кислоті не рекомендується останнім часом, оскільки тварини в ній стають крихкими і згодом у них можуть відламуватись хети, кінцівки та інші деталі, необхідні для ідентифікації.