Методи приготування та фарбування препаратів для мікроскопії - Студопедія
Етапи приготування мазка:
1. Препарати для мікроскопічного дослідження готують на чистих предметних стеклах, знежирюючи їх поверхню милом з подальшим видаленням сухої негігроскопічної ватою. Наносять на знежирену поверхню скла краплю водопровідної води (на добре знежиреному склі крапля розтікається).
2. Бактеріальну петлю, виготовлену з платинового, ніхромового або нікелінового дроту стерилізують прожарюванням до червона в полум'ї пальника, тримаючи її в полум'ї спочатку вертикально, а потім горизонтально, після чого обпалюють частину тримача, що примикає до петлі. Стерильну петлю використовують для взяття мікробної маси, тримаючи її у правій руці, як олівець. Пробірку або колбу з живильним середовищем беруть у ліву руку так, щоб поверхня зі зростанням культури була звернена вгору, виймають пробку з судини мізинцем правої руки, притискаючи її до долоні. Краї судини обпалюють в полум'ї пальника, вводять у нього прожарену петлю, торкаючись нею до внутрішньої поверхні судини або до живильного середовища, вільного від зростання мікроорганізмів, з метою охолодження петлі. Захоплюють невелику кількість мікробної маси, рівномірно розподіляючи її в краплі води у вигляді кухля або овалу діаметром близько 1 см. Якщо мікроорганізми вирощені на рідкому живильному середовищі, культуру наносять на скло петлею або стерильною піпеткою. Піпетку дезінфікують 3-5% розчином фенолу, залишки культури на петлі спалюють в полум'ї пальника і ставлять петлю вертикально в штатив або спеціальну склянку. Тонкий та рівномірний за товщиною препарат можна отримати, використовуючи методику приготування мазка крові. Для цього до краплі рідини або крові, нанесеної до кінця скла, підводять край шліфованого скла під кутом 45°, краплярозтікається по краю цього скла, після чого роблять мазок швидким рухом шліфованого скла. Мазок висушують на повітрі.
3. Висушений мазок з метою умертвіння мікробних клітин та прикріплення їх до скла фіксують. Зазвичай застосовують фізичний метод - фіксацію мазка над полум'ям пальника або спиртування триразово (по 1 сек) мазком нагору. Правильно зафіксований препарат, прикладений до тильного боку кисті, викликає відчуття вираженого тепла, але з печіння. У жодному разі скло не слід перегрівати і не фіксувати вологий мазок. Це призводить до деформації та різкого зменшення розмірів і так дрібного об'єкта дослідження. Хімічний метод фіксації більш щадний. Використовують етанол (10-15 хв), ацетон (5 хв), суміш Нікіфорова (суміш рівних обсягів етанолу та ефіру-10 - 15 хв), метанол (3 хв), пари осмієвої кислоти, формалін (кілька секунд).
4. Забарвлення препарату простим способом: на мазок за допомогою піпетки наносять 2-3 краплі розчинів водного фуксину (1-2 хв), метиленового синього (3-5 хв) або іншого барвника. Після закінчення фарбування мазок промивають водою, висушують фільтрувальним папером та мікроскопують за допомогою імерсійної системи.
Серед складних методів забарвлення мікроорганізмів широкого поширення набув метод Грама (зазвичай модифікації Синева), має велике диференціально-діагностичне значення в бактеріології.
Чи не знайшли те, що шукали? Скористайтеся пошуком: