Мікробіологічна діагностика ієрсиніозів
Ентеропатогенні ієрсинії(Yersinia enterocolitica, Yersinia pseudotuberculosis)викликають кишкові інфекції, що характеризуються ураженням лімфоїдного апарату кишечника, токсико-алергічними ускладненнями, розвитком генералізованих процесів.
Мікробіологічна діагностика ієрсиніозів включає бактеріологічне та серологічне дослідження.
Бактеріологічне дослідження. натрію, потім роблять посіви на агар CIN, Сірова або середовище Ендо, які після посіву інкубують при 32 ° С протягом 24-48 год або 24 год при 37 0 С і стільки ж при кімнатній температурі. Паралельно посіви поміщають у холодильник за температури +4 0 З (ієрсинії добре ростуть за низьких температур). Пересіви з середовища накопичення виконують на 3, 5, 10, 15 добу на зазначені вище поживні середовища.
На 2-й (3-й) день вивчають первинні посіви. Ентеропатогенні ієрсинії утворюють дрібніші колонії, ніж інші ентеробактерії, на середовищіCINколонії мають червоний центр і безбарвну периферію («бичаче око»), на середовищі Ендо колонії безбарвні або з більш інтенсивно забарвленим центром. УY. enterocolitica іуY. pseudotuberculosis часто спостерігається дисоціація колоній з переходом у R (шорсткі) форми. Характерні для ієрсиній колонії пересівають для накопичення чистої культури на скошений МПА чи середовище Ресселя чи Олькеницького.
На 3-й (4-й) день проводять ідентифікацію чистої культури за біохімічними та антигенними властивостями (біовар, серогрупа за допомогою РА у культур, вирощених при температурі нижче 30 0 С),враховують температуру фізіологічного оптимуму єрсиній (28-30 0 С), визначають чутливість до антибіотиків. Збудники ієрсиніозу та псевдотуберкульозу оксидазонегативні, ферментують до кислоти глюкозу, мають нітратредуктазу та інші властивості (див. табл. 5).
На відміну від збудника псевдотуберкульозу, бактерії видуY. enterocolitica за біологічними властивостями гетерогенні, включаючи безумовно-патогенні, умовно-патогенні (збудники опортуністичної інфекції або харчового отруєння) та непатогенні для людини ієрсинії. Визначення факторів вірулентності уY. enterocolitica передбачає постановку реакцій аутоаглютинації та кальційзалежності, піразинамідазного тесту, визначення плазмідасоційованих антигенів.
Тест аутоаглютинації. У дві пробірки з середовищем Кларка засівають досліджуваний штам, інкубують протягом 24 годин одну пробірку при 37 0 С, іншу - при 26 - 28 0 С. За наявності вірулентності бактерії, вирощені при 0 температур Склеюються у вигляді пластівців, що осідають на дно і стінки пробірки. Культура, інкубована за температури 26 – 28 0 С, не аглютинується.
Визначення піразинамідазної активності. На скошене середовище з піразинамідом, засівають досліджувані культури, вирощені при температурі 25-30 0 С на ПА, інкубують при тій же температурі протягом 48 годин, після чого змочують скошену поверхню розчином сульфату залишаючи пробірку при кімнатній температурі протягом 15 хв. У пробірках з культурами патогенних ієрсині кольори середовища залишаються без змін; непатогенні ієрсинії змінюють колір скошеної частини середовища на коричневий.
Тест кальційзалежності ставлять на кальцій-дефіцитному агарі, який готують шляхом додавання розчину оксалатунатрію до розплавленого МПА. Після перемішування вносять 4 мл 0,5М розчину магнію хлориду. Досліджувану культуру засівають на 2 чашки з кальцій-дефіцитним агаром, одну чашку інкубують 24 - 48 годин при 37 0 С, іншу - при 26 - 28 0 С. За наявності вірулентності при дефіциті кальцію у клітин, інкубованих при 37 ° С (але не 26 - 28 0 С), припиняється зростання бактерій, при цьому колонії на чашці або мають карликові розміри (Y. enterocolitica), або відсутні зовсім (частіше уY. pseudotuberculosis).При 26 - 28 0 С так само, як у непатогенних ієрсинії при двох температурних режимах, спостерігається зростання колоній звичайних розмірів.
Серологічне дослідження полягає у постановці РА, РНГА або ІФА з ієрсиніозними діагностикумами та парними сироватками крові хворих з підозрою на ієрсиніоз з метою визначення специфічних антитіл.
Генодіагностика – виявлення типових фрагментів ДНК патогенних ієрсиній у клінічному матеріалі або харчових продуктах методами ДНК-ДНК-гібридизація або ПЛР-аналізу.
Самостійна робота студентів
1. Бактеріологічний метод. Вивчення культуральних (на середовищі Ендо та скошеному МПА) та біологічних (тести аутоаглютинації та кальційзалежності, визначення піразинамідазної активності) властивостейY.enterocolitica (демонстрація).
2. Серологічний метод облік РНГА, поставленої з ієрсиніозним еритроцитарним діагностикумом та сироватками крові хворого, взятими на 3 та 10 дні захворювання (демонстрація).
3. Серологічний метод облік ІФА, поставленої із сироватками крові хворого, взятими на 3 та 10 дні захворювання (демонстрація).