ОЦІНКА КЛІТИННОЇ ЦИТОТОКСИЧНОСТІ

Класичний феномен цитотоксичності - здатність Т-лімфоцитів розпізнавати клітинні елементи, що несуть ознаки генетичної чужорідності (зокрема, клітини, модифіковані вірусом, пухлинні клітини, алогенні та ксеногенні клітини), та знищувати їх. NK-клітини, на відміну від Т-лімфоцитів, розпізнають як чужорідні клітини організму, що втратили антигени головного комплексу гістосумісності (молекули МНС). Інші клітини (наприклад, В-лімфоцити, моноцитарно-макрофагальні клітини, еозинофіли, нейтрофіли тощо) також здатні до цитотоксичності, але ця функція пов'язана із залученням антитіл проти клітинимішені - КМ (антителозалежна клітинна цитотоксичність)Ф інших агентів. У фізіологічних умовах, тобто. в нормі, цитотоксичність клітин імунної системи спрямована на руйнування та елімінацію старіючих та пошкоджених клітин, таким чином забезпечуючи кліренс багатоклітинного організму від віджилих клітин та продуктів їхнього розпаду.

Основні клітини, що мають цитотоксичність, - антигенспецифічні цитотоксичні лімфоцити (ЦТЛ), NK (природні кілери), а також клітини мієлоїдного ряду (макрофаги, нейтрофіли).

Цитотоксична активність клітин-кілерів реалізується при безпосередньому синаптичному контакті лімфоциту (клітини-ефектора - КЕ) з КМ. При цьому КМ індукується апоптоз.

У зрілому диференційованому цитотоксичному лімфоциті формуються гранули, що містять перфорин та гранзими. Після утворення синапсу між КЕ та КМ гранули концентруються в області контакту і потім звільняються у напрямку КМ. Перфорин при контакті з мембраною КМ полімеризується та вбудовується в мембрану, формуючи в ній пору діаметром близько 100 Ǻ. У цей час проникають гранзими - ферменти, що ініціюють апоптоз КМ.

Індукція апоптозу в КМможе також відбуватися через CD95 молекули (інша назва Fas), що містять домен смерті. Лігандом CD95 служить молекула FasL (CD178), що експресується на ЦТЛ, NK-клітинах. У деяких випадках КЕ самі стають «жертвою» Fas-опосередкованого апоптозу. Експресуючи Fas-молекули,

вони можуть проконтактувати з клітинами, що несуть Fas-ліганд, наприклад, при потині подолати гематоенцефалічний бар'єр. Підвищена експресія Fas (CD95) молекул на активованих лімфоцитах демонструє їхню здатність до апоптозу при фізіологічних процесах, що не відбулися, проліферації та диференціювання після активації. Вважається, що такий процес може призвести до феномену, позначеного як імунодефіцит, спричинений активацією (Ковальчук Л.В., Чередєєв А.М.).

У системіin vitroступінь руйнування КМ наближається до лізису. Методів оцінки функціональної активності ЦТЛ існує кілька, проте «золотим стандартом» досі вважається «хромовий тест». Під «хромом» мають на увазі сіль натрію хромату, що містить радіоактивний ізотоп хрому - Na2 51 CrO4, яку використовують для мічення КМ. Таку мітку підібрали досвідченим шляхом як щодо задовольняє наступним критеріям: вільно проникати у живі клітини і виходити звідти, поки клітина жива. Мітка не вступає в міцні з'єднання з внутрішньоклітинними структурами і має можливість вийти в позаклітинне середовище з гине КМ.

Вибір КМ - окреме творче завдання, яке експериментально вирішують відповідно до цілей конкретного дослідження. Найчастіше як КМ використовують пухлинні або заражені вірусом клітини. Коли КМ обрані, подальша схема експерименту коротко є наступне.

наступна лекція = = gt;
ОЦІНКА ПРОЛІФЕРАТИВНОЇ АКТИВНОСТІЛІМФОЦИТІВЗв'язування з тетрамерними структурами класу MHC I