ПОБУДУВАННЯ КАЛІБРУВАЛЬНОГО ГРАФІКА

ТЕСТ НА ТОЛЕРАНТНІСТЬ ДО ГЛЮКОЗИ.

ПОБУДУВАННЯ ЦУКРОВИХ КРИВИХ

Вміст глюкози в сироватці в нормі 3,3-5,5 ммоль/л (до 6,1 ммоль/л). Підвищення (гіперглікемія) спостерігається після прийому їжі (аліментарна), шокових станах, при цукровому та стероїдному діабеті, при стресах, тиреотоксикозі та ін. Зниження (гіпоглікемія) відзначається при голодуванні, тривалій фізичній навантаженні, вагітності, пухлинах острівцевого апарату підшлункової залози, надмірному введенні інсуліну.

У здорової людини одноразовий прийом 50-100 г глюкози викликає тимчасове підвищення цукру в крові (харчову або аліментарну гіперглікемію), обумовлене тим, що при введенні відразу великої кількості глюкози печінка не встигає перетворити її на глікоген і частина її переходить у кров. Підвищення вмісту цукру в крові викликає посилене виділення інсуліну, який нормалізує концентрацію глюкози у крові вже через 2–2,5 години. Якщо ступінь гіперглікемії після навантаження цукрами перевищує нормальну і зберігається довше, ніж у здорових осіб, то говорять про порушену толерантність до вуглеводів. Найчастіше причиною порушення толерантності є інсулярна недостатність, тому тест на толерантність до глюкози зазвичай використовується для виявлення цукрового діабету.

Аналіз цукрових кривих

1. Перший підйом рівня цукру на крові (через 30 хв) відбиває силу рефлекторного подразнення симпатичних нервів у відповідь введення глюкози в травний тракт.

2. Подальше збільшення концентрації цукру в крові пов'язане зі швидкістю всмоктування вуглеводів, функцією печінки та решти периферичних органів. У здорової людини приблизно через 60 хв після цукрового навантаження рівень глюкози зростає на 50-70%.порівняно з рівнем глюкози натще.

3. Східна ділянка глікемічної кривої (через 90 хв) відбиває продукцію інсуліну і від стану парасимпатичної нервової системи, функції підшлункової залози, печінки та інших.

4. Остання точка на глікемічній кривій (через 2-2,5 години) обумовлена рівновагою всіх систем організму і в нормі повинна збігатися з цифрою вмісту цукру натще або трохи нижче.

ДІАГНОСТИЧНЕ ЗНАЧЕННЯ ВИЗНАЧЕННЯ ОБЛАСНИХ ПРОБ

У нормі білки плазми знаходяться в колоїдному стані і відрізняються високою стійкістю. При постановці осадових проб, що супроводжуються хімічним та фізичним втручанням, настає преципітація білків, що призводить до помутніння або утворення пластівців. Ступінь помутніння та час утворення пластівців відображає зміни стійкості білків плазми крові, характерні для окремих захворювань.

Тимолова проба

При взаємодії сироватки крові з тимоловим реактивом з'являється помутніння внаслідок утворення глобуліново-тимолово-ліпідного комплексу, інтенсивність якого змінюється турбідиметрично.

Проба має найбільше діагностичне значення при захворюваннях печінки. У нормі показники проби перебувають у межах 0–4 од. Позитивна проба спостерігається при епідемічному гепатиті, цирозах печінки, постгепатитному періоді. Тривале значне підвищення показників тимолової проби дає підстави підозрювати перехід гострого гепатиту на хронічний, тобто. вказує на активність процесу.

ДІАГНОСТИЧНЕ ЗНАЧЕННЯ ВИЗНАЧЕННЯ КІЛЬКОСТІ БІЛКУ У СИВОРОТКУ КРОВІ БІУРЕТОВИМ МЕТОДОМ.

ПОБУДУВАННЯ КАЛІБРУВАЛЬНОГО ГРАФІКА

Принцип методу: заснований на здатності білків, як поліпептидів,вступати у взаємодію Космосу з гідратом окису міді і давати продукт, пофарбований в синьо-фіолетовий колір. Інтенсивність фарбування прямо пропорційна вмісту білка в досліджуваному зразку.

Основні принципи та правила побудови калібрувального графіка:

2. Вибирають раціональний інтервал концентрацій стандартних розчинів досліджуваної речовини для колориметрування (40, 60, 80, 100, 120 г/л). На основі біуретової реакції з цим розчином білка набувають значення оптичної щільності для кожного стандартного розчину.

3. За даними, отриманими після колориметрування стандартних розчинів досліджуваного білка, будують калібрувальний графік раціонального масштабу. Для цього на міліметровому папері осі абсцис відкладають значення концентрації стандартних розчинів, а по осі ординат - відповідні значення оптичної щільності. За отриманими точками будують графік залежності оптичної густини від концентрації.

Хід роботи:

Приготування стандартних розчинів білка проводять шляхом розведення стандартного 10% розчину альбуміну згідно з таблицею:

№ пробірки	10% розчин альбуміну, мл	0,9% розчин NaCl, мл	Концентрація білка, г/л	Екстинкція (E)
1. 2. 3. 4. 5.	0,2 0,4 0,6 0,8 1,0	0,8 0,6 0,4 0,2 0,0	0,15 0,35 0,5 0,6 0,65

Виконання біуретової реакції: У 5 пробірок поміщають по 0,1 мл кожного стандартного розчину білка; у шосту – 0,1 мл 0,9% розчину NaCl (контрольний розчин); в 7, 8, і 9 пробірки вносять по 0,1 мл сироватки крові з пробірок «Завдання 1», «Завдання 2», «Завдання 3» (дослідний розчин). Далі у всі пробірки додають по 5 мл біуретового реактиву, перемішують, залишають на 30 хвилин.Інтенсивність забарвлення (екстинкцію) фотометрично визначають при довжині хвилі 540 - 560 нм проти контрольного розчину. Калібрувальний графік (залежність екстинкції від концентрації) будується за даними, виміряними для стандартних розчинів. Концентрацію білка в досліджуваній рідині (завдання 1,2,3) визначають графічно за калібрувальним графіком.

Без побудови калібрувального графіка можливий спрощений спосіб визначення вмісту білка в рідинах, що досліджуються. Для цього паралельно з дослідними пробами колориметрується лише один стандартний розчин, а результат вимірювання використовується для розрахунку невідомої концентрації білка в дослідних пробах (Сх) за формулою:

Ех * Сст Ех – екстинкція дослідної проби

Сх = –––––––––––– , де Ест – екстинкція стандартної проби

Ест Сст – концентрація білка у стандартній пробі