Постійні мікроскопічні препарати

Опубліковано Ср, 01/02/2012 - 16:58 користувачем admin

постійні

Фіксатор Карнуа

  • спирт абсолютний (100 º) - 6 частин, 60 мл
  • крижана оцтова кислота – 1 частина, 10 мл
  • х лороформ – 3 частини, 30 мл

Протікає швидко, довго залишати у фіксаторі не слід (1 година). Зазвичай використовуються 6 кубів 100º спирту та 2 куби крижаної оцтової кісоти.

Проведення через спирти (після Карнуа)

Злити фіксатор, залити матеріал 96 º спиртом (3-4 зміни) до зникнення запаху оцтової кислоти. Витримати у цих спиртах 2-3 години або більше. Цей спирт можна використовувати для приготування фіксатора або промивання після нього. Перевести в абсолютний спирт – 2 рази на 1,5-2 години.

Подальша обробка універсальна: Суміш I – 1,5 години.

Суміш II – 1,5 години.

Суміш III – 1,5 години.

Хлороформ I - 2 години

Хлороформ II – 2 години (можна на ніч). Поставити до термостату (40ºС). Через 1-2 години на 60 ºС. Залишити на кілька днів до видалення запаху хлороформу та на смак (солодкість) (до 10 днів).

Різновид фіксатора Карнуа (у польових умовах):

  • спирт 96 º – 6 мл
  • оцтова кислота 100% – 1 мл

Фіксатор Мактвори

  • спирт 70 º – 90 мл – 18 мл – 9 мл
  • формалін – 5 мл –1 мл – 0,5 мл
  • оцтова кислота міцна – 5 мл – 1 мл – 0,5 мл

  • спирт 3 частини
  • оцтова кислота 1 частина

Після фіксації, матеріал обробляється протягом 24 годин 3%-ним водним розчином Сr2O3 для легкого нарізування зрізів на мікротомі.

Фіксатор FAA

  • спирт 70 º – 100 мл
  • 40% формалін (той, що впродажу) – 7 мл
  • крижана оцтова кислота - 7 мл.

У цьому фіксаторі матеріал витримується 3 доби, потім переводять у 70 º спирт (≈ на 2 години). У наступному 70 º спирті матеріал зберігається постійно.

Фіксатор Серра (класичний)

  • спирт 96º – 3 частини
  • 40%формалін - 1 частина

Фіксатор Серра (за Никифоровим)

  • спирт 96º – 7 частин
  • 40% формалін – 3 частини
  • оцтова кислота – 0,1 частини

  • спирт 70º - 100 мл, 40% формалін - 2 мл.
  • 10 мл формаліну на 100 мл спирту 70 º.
  • 4-10 мл 40% формаліну на 100 мл 50 º спирту.

Біоматеріал у цьому фіксаторі можна довго тримати.

Фіксатор Левицького (модифікація Навашина)

І суміш: (до 3-х днів)

ІІ суміш: (до 7-ми днів)

  • CrO3 1% - 15 мл
  • Осмій 2% - 2 мл
  • Вода дистильована – (18мл/35мл)

Промивати добу у проточній воді. Після зневоднення спиртами перед парафіном слід проводити через ксилол.

Фіксатор ФУС (спирт-формалін-оцтова кислота)

  • Крижана оцтова кислот а – 5 мл
  • 40% формалін, який у продажу - 5 мл
  • Спирт 50-70º - 90 мл

Фіксатор Бенслі

  • 2% Осмієва кислота – 2 мл
  • 10% Двохромовокисла кислота – 2 мл
  • Вода дистильована – 6 мл
  • Оцтова кислота - 1 крапля

Тримати 24 години, промити як завжди. До фарбування потрібно забарвлення перекисом водню.

Фіксатор Левитського

З усіх фіксуючих речовин (включаючи рідину) найкращі результати отримані:

  • 10%формалін - 9 частин
  • 1% хромова кислота – 1 частина

Суміш ІІ: (7 днів)

  • 1% хромова кислота – 15 частин
  • 2% осмієва кислота – 4 частини

Подальша обробка та забарвлення залізним гематоксиліном звичайна. Товщина зрізів 2 µ.

Фіксатор Ньюкамера

  • 6 частин – пропилового спирту
  • 3 частини – пропіонової кислоти
  • 1 частина – ацетону
  • 1 частина петролейного ефіру
  • 1 частина діокана

Фіксатор для морфологічних цілей Зберігати 1 добу, замінити на нову порцію і можна залишити у фіксаторі на будь-який термін.

Фіксатор Craf III

  • 0,3% хромова кислота
  • 2%оцтова кислота
  • 10%формалін

Обробка матеріалу – передфіксаційним розчином 8-гідрооксихіноліну (0,002 мол. водного розчину)

Приготування: 0,058 гідрооксихіноліну розчиняється в 200 мл теплої дистильованої води.

  • Обробка проводиться за температури проточної води (10-15ºС) протягом 3-4 годин.
  • Промивання у воді протягом 5 хвилин.
  • Фіксація по Карну протягом 24 годин.
  • Промивання та проведення для постійних препаратів. Промивання 96 º спиртом.
  • Забарвлення: після фіксації промивання, потім забарвлення в ацетоорсеїні (9 частин 2% орсеїну + 1 частина 1N НСІ) протягом кількох хвилин із слабким підігрівом. Потім об'єкт переноситься на предметне скло в краплю 1% ацетоорсеїну і роздавлюється (якщо матеріал зберігається в 70 º спирті, то перед фарбуванням він поміщається на 1 годину в 45% оцтову кислоту).

Приготування ацетоорсеїну: 2 г орсеїну на 100 см 3 крижаної кислоти. Злегка прокип'ятити, остудити та профільтрувати. Для отримання 1% ацетоорсеїну додати однакову кількість дистильованої води.

Автори статті: Ляпустіна Є.В., Сатарова Т.М.

Автор фото (мікротомний зрізфіксованої зернівки кукурудзи - постійний препарат) у статті: Ляпустіна О.В.