РІФ аналіз крові на сифіліс, діагностика сифілісу РІФ у лабораторії

Реакція іммобілізації блідих трепонем (РІБТ). Обов'язковою умовою є виключення перед обстеженням прийому хворим на антибіотики, які надають токсичну дію на бліді трепонеми, викликаючи їх неспецифічне знерухомлення.

Позитивні результати РІБТ виявляються приблизно з середини свіжого вторинного періоду сифілісу, і можуть довго зберігатися після проведеного лікування. При необхідності метод використовують для виявлення АТ у СМР, це дослідження відрізняє висока специфічність, але низька чутливість (близько 40%).

РІБТ мало придатна для діагностики ранніх форм сифілісу через пізнє (не раніше 8-9 тижнів від моменту зараження) появу АТ-іммобілізинів; Спосіб може давати хибнопозитивні результати, особливо у хворих з аутоімунною патологією, злоякісними захворюваннями, діабетом. Крім того, РІБТ – досить складний, трудомісткий та дорогий аналіз, що вимагає високої кваліфікації персоналу та наявності віварію, у зв'язку з чим останніми роками він використовується лише в окремих лабораторіях. У діагностиці РІБТ застосовується як реакція-арбітр при розбіжності результатів інших серологічних досліджень, для диференціювання хибнопозитивних результатів та при встановленні діагнозу пізніх форм сифілісу.

Реакція зв'язування комплементу з трепонемним антигеном (РСК з ТА).Чутливість методу - близько 80%, специфічність - 98%. Метод входив до складу комплексу стандартних серологічних реакцій на сифіліс, регламентованого наказом МОЗ СРСР № 1161 від 02.09.1985 «Про вдосконалення серологічної діагностики сифілісу». В даний час використання цієї реакції, як і РЗК з кардіоліпіновим антигеном, обмежено окремими лабораторіями.

Реакціяімунофлуоресценції (РІФ). Для діагностики сифілісу використовують кілька модифікацій РИФ: РИФ-ц – виявлення АТ у СМЖ, РИФ-200 (тестируемую сироватку перед реакцією розводять у 200 раз); РІФ-АБС (РІФ з абсорбцією), IgM-РІФ-АБС (для визначення АТ IgM). За чутливістю та специфічністю РІФ-АБС не поступається РІБТ, але виконання цього методу набагато простіше. Результати РІФ-АБС стають позитивними з 3-го тижня після зараження (до появи твердого шанкеру або одночасно з ним), це метод ранньої діагностики сифілісу. Непоодинокі позитивні результати дослідження через багато років після повноцінного лікування раннього сифілісу, а у хворих з пізнім сифілісом - протягом десятиліть.

Покази для виконання РІФ-абс:

позитивні результати НТТ у вагітних за відсутності клінічних та анамнестичних даних, що свідчать про сифіліс;
обстеження осіб з різними соматичними та інфекційними захворюваннями, за яких відзначають позитивні результати НТТ;
обстеження осіб із клінічними проявами, характерними для сифілісу, але з негативними результатами НТТ;
рання діагностика сифілісу;
у частині випадків – як критерій успішності протисифілітичного лікування: перехід позитивної РІФ-абс у негативну після лікування є 100% критерієм вилікуваності сифілісу.

IgM-РИФ-абс застосовують для роздільного виявлення АТ класів Ig, що становить особливий інтерес при діагностиці вродженого сифілісу, коли АТ до трепонеми, синтезовані в організмі дитини, представлені IgM, а АТ IgG мають материнське походження. Показаннями для проведення цього дослідження є: діагностика вродженого сифілісу; оцінка результатів лікування раннього сифілісу

РІФ маєвисокою чутливістю (98,5%) та специфічністю (99,6%) практично при всіх формах сифілісу. Недоліками РІФ є: неможливість автоматизації дослідження та обліку результатів; проблеми приготування якісного антигену із суспензії блідих трепонем, отриманих з яєчка зараженого кролика; суб'єктивізм щодо оцінки результатів.

Реакція пасивної гемаглютинації (РПГА). Зіставлення результатів, отриманих при використанні РПГА та РІБТ, РІФ-АБС, КСР, МРП показало високу чутливість і специфічність РПГА при діагностиці сифілісу, що збігається з результатами РІФ-АБС.

РПГА може бути виконана в якісному та кількісному варіантах, існують їх макро-і мікромодифікації. Кількісний метод РПГА дозволяє оцінити концентрацію специфічних трепонемних АТ у крові. Титри від 1:640 і нижче характерні для пацієнтів, лікованих з приводу сифілісу у минулому. Вищі титри – зазвичай для активної нелікованої інфекції.

Позитивні результати РПГА, як правило, відзначають через 3 тижні після появи твердого шанкеру і далі у пацієнтів, які перенесли сифіліс протягом багатьох років, нерідко довічно.

Чутливість РПГА становить 76% при первинному сифілісі; 100% при вторинному сифілісі; 97% при прихованому сифілісі; 94% при пізньому сифілісі. Специфічність РПГА вища, ніж специфічність РІФ-АБС, становить 99%.

Завдяки співвідношенню високої специфічності, чутливості, простоти виконання, стандартизації реагентів серед трепонемних тестів для серодиагностики сифілісу РПГА стабільно займає лідируючу позицію в клінічній практиці у світі.

Особливі переваги ІФАполягають: у високій чутливості та специфічності методу; автоматизації постановки реакції; високого ступеня стандартизації; можливостідослідження великої кількості зразків сироваток; у кількісному обліку та об'єктивній документації отриманих результатів; можливості одночасного визначення титру протитрепонемних АТ різних класів (IgG та IgM) в одному зразку; придатності для ранньої діагностики сифілісу та діагностики вродженого сифілісу; у зручності застосування для тестування крові у службі переливання крові; застосування як підтверджуючого специфічного трепонемного тесту. Чутливість ІФА 98-100%, специфічність 96-100%.

До недоліків ІФА можна віднести: непридатність для дослідження поодиноких зразків; більш тривалий термін до отримання результату і менший термін придатності ІФА-наборів, наприклад, порівняно з РПГА.

Імунний блот (ІБ).Одним із сучасних методів діагностики сифілісу є ІБ для визначення АТ IgG або IgM до певних АГ блідої трепонеми.

Метод має високу чутливість (до 100%), специфічність (98%) і відтворюваність (100%). Дослідження дає можливість вивчення спектра АТ відразу до кількох АГ T.pallidum, застосування високоочищених рекомбінантних та пептидних АГ, що знижують до мінімуму неспецифічну реактивність сироваток.

Все це визначає можливість переваги застосування методу ІБ перед іншими трепонемними тестами для верифікації діагнозу сифілісу в складних випадках, зокрема, для діагностики сифілісу в другій половині інкубаційного періоду, прихованого вродженого сифілісу в перші дні життя дитини, для виявлення прихованого сифілісу у осіб зі слабким відповіддю, а також для диференціювання хибнопозитивних результатів інших тестів.