Штам бактерій bacillus subtilis, що несе властивість антибіотикорезистентності, що використовується для
Використання: біотехнологія, пробіотик, антибіотикостійкий штам Bacillus subtilis 3Н, виробництво лікувально-профілактичних препаратів, дисбактеріоз, ферментна недостатність органів травлення, гнійні інфекції, харчова алергія. Сутність винаходу: отриманий антибіотикостійкий штам Bacillus subtilis ГІБК N 248. Розміри клітин 1,5-4,0 мкм на 0,4-0,6 мкм, клітини грампозитивні, капсули не утворюють, утворюють суперечки, тип аеробний дихання. Росте на різних живильних середовищах. Розщеплює глюкозу, сахарозу, маніт, мальтозу. Гідролізує крохмаль, казеїн, сечовину, пептонізує молоко, розріджує желатин. Чи не розщеплює тирозин. Не утворює гемолізин та фібринолізин. Відновлює нітрати до нітритів. Утилізує цитрат. Утворює аміак та сірководень, не утворює індол. Пригнічує зростання стафілококів, протею, клебсієлл, кишкової палички, дріжджових грибів, стрептококів та синьогнійної палички. Штам має стійкість до поліміксину, рифампіцину, малочутливий до пеніциліну, лінкоміцину, стрептоміцину. Штам може бути використаний як виробничий для отримання препарату групи пробіотиків, який можна буде застосовувати спільно з антибіотиками. 3 табл.
Винахід відноситься до галузі біотехнології, зокрема до виробництва лікувально-профілактичних препаратів, які застосовують при розладах шлунково-кишкового тракту, дисбактеріозах, ферментної недостатності органів травлення, гнійних інфекціях, харчової алергії.
Відомий штам Bacillus subtilis 534, який використовується для отримання препарату "Споробактерін", який призначений для профілактики та лікування захворювань шлунково-кишкового тракту,дисбактеріози.
Однак відомий штам чутливий до антибіотиків за винятком поліміксину. Ця властивість штаму обмежує сферу застосування препарату при тяжких формах гнійно-запальних захворювань, лікування яких потребує спільного введення бактеріального препарату та антибіотика.
Метою винаходу є створення нового стійкого антибіотикостійкого штаму для отримання препарату вищевказаного призначення.
Технічний результат, що отримується від використання нового штаму виявляється у підвищенні ефективності лікування за рахунок можливості поєднаного застосування бактеріального препарату з антибіотиками. Штам Bacillus subtilis 3Н депонований у колекції ДІБК ім. Л.А.Тарасевича під N 248. Штам Bacillus subtilis 3Н отриманий в результаті багаторазового пересіву штаму Bacillus subtilis 534 через поживний агар із зростаючою концентрацією антибіотика.
Штам Bacillus subtilis 3Н характеризується такими властивостями.
Палички. Розмір клітин однодобової агарової культури (1,5-4,0)х(0,4-0,6) мкм, часто розташовані в ланцюжках. Клітини забарвлюються позитивно за Грамом, капсули не утворюють, утворюють внутрішні центральні суперечки.
Колонії на м'ясо-пептонному агарі частіше, шорсткі з фестончастими краями від білого до сірого та блідо-рожевого відтінків, рідше гладкі з рівними краями.
На м'ясо-пептонному бульйоні при 37 o З через 18-24 год утворюють плівку на поверхні та придонний осад.
Аероб, оптимальні умови зростання при температурі 37 o С та рН 6,0-7,5.
Розщеплює глюкозу, сахарозу, маніт, мальтозу. Дає позитивну реакцію Фогес-Проскауера на ацетоїн. Гідролізує крохмаль, казеїн, сечовину, пептонізує молоко, розріджує желатин. Чи не розщеплює тирозин. Продукує каталазу, лецитиназу. Не утворюєгемолізин та фібринолізин. Відновлює нітрати до нітритів. Утилізує цитрат. Утворює аміак та сірководень, не утворює індол.
Пригнічує зростання стафілококів, протею, клебсієлл, кишкової палички, дріжджових грибів, стрептококів та синьогнійної палички.
Штам має стійкість до поліміксину, рифампіцину, малочутливий до пеніциліну, лінкоміцину, стрептоміцину.
Порівняльні дані щодо антибіотикочутливості та антагоністичної активності штамів Bacillus subtilis 3Н та відомого представлені в табл. 1 та 2 (відповідно).
Дані таблиці. 1 показують, що новий штам має високу антибіотіостійкість Як видно з табл. 2 антагоністична активність штаму Bacillus subtilis 3Н стає більш високою в порівнянні з вихідним штамом Bacillus subtilis 534.
Використання штаму ілюструється наведеними нижче прикладами.
Приклад 1. Для вирощування штаму Bacillus subtilis 3Н використовують синтетичне середовище, що містить пептон, мальтозу, мінеральні солі та мікроелементи.
Штам Bacillus subtilis 3Н висівають на матраци з агаризованим синтетичним живильним середовищем, що містить пептон, мальтозу, мінеральні солі, мікроелементи і поміщають в термостат при 37 o С на 18-20 ч. Далі змиту з агару культуру засева складу в об'ємі 5 л і вирощують 3-4 години до досягнення культурою фази експоненційного росту. Цю культуру використовують як посівний матеріал для засіву реактора "Біор" місткістю 100 л. Вирощування проводять протягом 16-20 год до переходу культури у спорову форму. Отриману бактеріальну масу концентрують до (100-120)10 9 кл/мл, відмивають від живильного середовища стерильним 0,9%-ним розчином хлориду натрію. Розливають в ампули по (1,00,1) мл івисушують. Отриманий препарат названий "Бактиспорин", є сумішшю живих вегетативних клітин і спор.
Препарат "Бактиспорин" нешкідливий, не містить сторонньої мікрофлори. Залишкова вологість не перевищує 3,5% Має специфічну активність: кількість клітин в одній дозі препарату (1-5)10 9 кл/мл, антагоністична активність (зона затримки росту тестових штамів мікроорганізмів) становить 25-40 мм.
Таким чином, отриманий штам може бути використаний як виробничий для отримання препарату з групи пробіотиків, який можна буде застосовувати спільно з антибіотиками.
Штам бактерій Bacillus subtilis ГІБК N 248, що несе властивість антибіотикорезистентності, що використовується для отримання препарату "Бактиспорин".