Спосіб оцінки ступеня тяжкості порушення агрегації еритроцитів
Власники патенту UA 2447450:
Винахід відноситься до медицини, а саме до внутрішніх хвороб і може бути використане для оперативної оцінки порушень мікроциркуляції.
В останнє десятиліття як за кордоном, так і в Україні досягнуто суттєвих успіхів у створенні принципово нових підходів у дослідженні реологічних властивостей крові в клінічній практиці. Необхідність застосування простих та інформативних діагностичних тестів для виявлення внутрішньосудинних порушень мікроциркуляції визначається потребами практичної охорони здоров'я у вирішенні проблем методології діагностики та корекції гемореологічних порушень при лікуванні хворих з різною патологією, а також для прогнозування результатів та контролю ефективності терапії.
Одним з найбільш важливих патологічних феноменів, що виникають у системі мікроциркуляції, є внутрішньосудинна агрегація формених елементів крові /переважно еритроцитів/(Фірсов Н.М., Сірко І.В., Приєжжев А.В. Сучасні проблеми агрегометрії цільної крові. Тромбоз, гемостаз реологія 2000 № 2 (2) С.9-11 Муравйов Л. В. Тихомирова І. А. Борисов Д. В. Аналіз впливу плазмових і клітинних факторів на агрегацію еритроцитів різних вікових популяцій Фізіологія людини 2002 , Т.28 №4, С.144-148). У зв'язку з цим є актуальним дослідження агрегаційного потенціалу еритроцитів та правильна її інтерпретація.
В основі патогенезу багатьох захворювань та їх ускладнень лежать процеси порушення агрегації еритроцитів, що ініціюють розвиток тромбозу судин. Необхідність дослідження агрегації еритроцитів є очевидною, а стандартизовані прилади відсутні. У різних лабораторіях існують різні способи оцінки агрегації еритроцитів, що ускладнює інтерпретацію отриманихданих. Часто використовуваним методом кількісного визначення агрегації еритроцитів є фотометричний спосіб реєстрації зменшення інтенсивності світла, що розсіюється кров'ю після припинення перемішування досліджуваного зразка спеціальних кюветах. Апарати, що використовують цей ефект, були розроблені як у нашій країні (Левтов В.А., Левкович Ю.М., Ашкеназі І.Я., Потапова І.В. Про дослідження агрегаційних властивостей крові. – Фізіологія людини, 1978, т.п. 4, №3, с.504-513.;Люсов В.А., Білоусов Ю.Б., Парфьонов А.С. Метод визначення агрегації еритроцитів.- Кардіологія, 1978, №8, с.15-21; А. Селезньов, Г. І. Назаренко, В. С. Зайцев Клінічні аспекти мікрогемоциркуляції Л., Медицина, 1985, с.103-106), так і за кордоном (Schmid-Schnnbein Н., Eline £.А. , Tolger Е, Velocity of red cell aggregation (RCA): photometric determination of half-teme and aggregation constant.-Bibl. J. V. Aggregation properties of erythrocytes of whole blood under stres stress backscattering nephelometry. Однак цей спосіб вимагає спеціальної апаратури і включає складні підрахунки, тому не дозволяє лікареві швидко оцінити вираженість порушень мікроциркуляції пацієнта і, відповідно, внести корективи в лікування. Відсутність стандартизованих приладів призводить до відмінності в геометрії течії і в способах реєстрації світла, що виходить зі зразка крові, що веде до відмінності одержуваних результатів.
Широко відомий прямий оптичний метод визначення агрегації еритроцитів, рекомендований для використання комітетом експертів ВООЗ зі стандартизації в гематології.Guidelines на вибір laboratory tests для monitoring acute phase response. J. Clin. Pathol. 1988., V.41, P.1203-1212). Цей метод зручний і простий у виконанні і відповідає наступним вимогам: агрегація еритроцитів враховується в умовах, що виключають її штучне посилення, агрегація враховується при стандартному вихідному об'ємному співвідношенні маси еритроцитів і плазми, що наближається до фізіологічного, для розведення плазми агрегатів) використовують те ж суспензуюче середовище (плазма±агрегуюча речовина), кількісне визначення агрегації в камері (Горяєва) дозволяє одночасно оцінити величину і форму агрегатів візуально (Fernandez de СМ. et al., 1989).
Для підвищення точності вимірювань, деталізації вимірюваних параметрів, оцінки виразності порушення агрегації еритроцитів постало питання про класифікацію агрегаційних порушень за ступенем тяжкості. Спроба класифікації гемореологічних порушень наведена в роботі Фірсова (Фірсов Н.М., Коротаєва Т.В., Вишлова М.А. Класифікація тяжкості гемореологічних пристроїв. Сб. «Реологічні дослідження в медицині» (вип.2), М., 2000, с.136-141). Приймаючи як прототип запропонований Фірсовим спосіб поділу гемореологічних порушень на ступеня - I, II та III ступінь тяжкості, ми пропонуємо як визначальний показник, що характеризує ступінь агрегаційного порушення, взяти відсоток неагрегованих еритроцитів. Цей показник доступний і простий визначення в будь-якій лабораторії, досить інформативний і вимагає великих матеріальних витрат.
Діяльність М.М. Фірсова (2000) наводиться принцип поділу на ступені тяжкості. За основу береться середнє значення показника (М), отриманого у здорових донорів, та стандартне відхилення (σ),визначальний розсіювання параметра навколо середнього значення. Саме стандартне відхилення є параметром, що надійно відокремлює одну середню величину від іншої на відстань своєї подвоєної величини (2σ). При нормальному розподілі в інтервалі М± знаходиться близько 70% всіх випадків, тому перекриття сусідніх розподілів відбувається тільки на 15%.
Технічний результат запропонованого способу оцінки ступеня тяжкості порушення агрегації еритроцитів полягає в тому, що як визначальний показник, що характеризує ступінь тяжкості агрегаційних порушень, розраховують відсоток неагрегованих еритроцитів (ПНЕ) за формулою, і при ПНЕ від 56 до 30% встановлюють I ступінь 30% до 4% - ІІ ступінь тяжкості, менше 4% - ІІІ ступінь тяжкості (див. таблицю).
За допомогою заявленого способу нами при гемореологічному обстеженні 66 практично здорових осіб виявлено середню величину та стандартне відхилення відсотка неагрегованих еритроцитів, що склала 69,0±13,0%. Таким чином, розподіл за ступенями тяжкості наступне: норма 82%-56%, І ступінь 56%-30%, ІІ ступінь 30%-4%, ІІІ ступінь менше 4%. Серед 66 обстежених практично здорових людей ПНЕ у нормальних межах спостерігався у 42 осіб (64%), І ступінь тяжкості – у 24 осіб (36%).
З 86 хворих на гіпертонічну хворобу без ураження органів мішеней нормальний рівень ПНЕ спостерігався у 24 осіб (28%), I ступінь порушення агрегації еритроцитів спостерігався у 49 осіб (57%), II ступінь у 13 осіб (15%). З 75 хворих на ішемічну хворобу серця та інфарктом міокарда нормальний рівень ПНЕ спостерігався у 6 осіб (8%), I ступінь порушення агрегації еритроцитів спостерігався у 37 осіб (49%), II ступінь у 30 осіб (40%), III ступінь у 2 осіб (3%)
Клінічнийприклад №1
При гемореологічному обстеженні рівень ПНЕ становив 42,86%, що стосується І ступеня тяжкості агрегаційних порушень. Інші реологічні параметри такі: середній розмір агрегату – 6,07; показник агрегації – 1,91; в'язкість крові при швидкості зсуву 200 с -1 - 4,5 мПа · с, при швидкості 50 с -1 -5,5 мПа · с, при швидкості зсуву 10 с -1 - 8,6 мПа · с, в'язкість плазми - 2 0 мПа · с; гематокрит – 36,8%.
Клінічний приклад №2
При гемореологічному обстеженні рівень ПНЕ становив - 17,54%, що стосується II ступеня тяжкості агрегаційних порушень. Інші реологічні параметри такі: середній розмір агрегату - 7,12, показник агрегації - 3,43, в'язкість крові при швидкості зсуву 200 -1 - 5,1 мПа·с, при швидкості 50 с -1 - 6,2 мПа·с при швидкості зсуву 10с -1 -10,1 мПа·с, в'язкість плазми - 1,8 мПа·с; гематокрит – 41,2%.
Клінічний приклад №3
При гемореологічному обстеженні ПНЕ склав – 3.97%, що відноситься до ІІІ ступеня тяжкості агрегаційних порушень. Інші реологічні параметри такі: середній розмір агрегату - 11,46, показник агрегації - 8,10, в'язкість крові при швидкості зсуву 200 -1 - 5,6 мПа·с, при швидкості 50 с -1 - 6,5 мПа·с , при швидкості зсуву 10 -1 - 19,2 мПа·с, в'язкість плазми - 2,7 мПа·с; гематокрит – 49,8%.
Таким чином, наведені приклади демонструють доцільність застосування відсотка неагрегованих еритроцитів з метою оцінки ступеня тяжкості порушення агрегації еритроцитів.