Тест дегрануляції опасистих клітин сполучної тканини, Алергічні захворювання
У крові кролів багато базофілів (від 4 до 12%). Непрямий тест ставиться на ізольованих базофілах кролів. Кров з гепарином, взята з вушної вени кролика, центрифугується у вузьких пробірках протягом 5 хв зі швидкістю 300 об/хв. Потім відсмоктується білувата лейкоцитарна плівка, яка утворюється між плазмою та еритроцитами. Попередньо готуються предметні стекла з барвником, навіщо на предметне скло наносять краплю 0,3 % спиртового розчину нейтрального червоного. На підсохлий барвник наносять краплю (0,05 мл) сироватки хворого, краплю базофільної плівки (кролячі) і краплю алергену. Паралельно ставлять контролі з алергеном без сироватки хворого та із сироваткою, але без алергену. Предметне скло після обережного помішування суміші накривають покривним та підраховують базофіли. Про результати реакції судять за кількістю дегранульованих базофілів (під мікроскопом при ув. 600). Підраховують 20 або 40 клітин у різних полях зору. З них враховують кількість змінених базофілів. Результат виражається у відсотках. За показника понад 10—15 % тест вважається позитивним. Відсоток дегранульованих базофілів у контролі не повинен перевищувати 2-3%.
Позитивна реакція свідчить про наявність підвищеної чутливості до того чи іншого алергену, а негативний результат її не виключає.
Тест дегрануляції опасистих клітин сполучної тканини. При виконанні тесту Шеллі доводиться стикатися з низкою труднощів: отримання хорошої лейкоцитарної плівки, взяття крові в одного і того ж кролика не частіше 1 разу на тиждень, нестійкість базофілів, схильність до спонтанної деструкції. У зв'язку з цим останнім часом все ширше застосовується тест із опасистими клітинами щура.
Для проведення дослідженнянеобхідно отримати завись опасистих клітин. Інтактний щур забивається шляхом обезголовлення. Внутрішньочеревно вводиться 5-7 мл ізотонічного розчину натрію хлориду або розчину Тироде, підігрітого до 37 °С. Проводиться легкий масаж черевця протягом 15 хв. Потім черевна порожнина розкривається і її вміст стікає в пробірку, нагріту до 37 °С і змочену гепарином. Отриману суспензію, що містить опасисті клітини, необхідно тримати в термостаті при 37 ° С весь час дослідження.
До початку досвіду, який ставиться аналогічно тесту Шеллі, необхідно подивитися 1 препарат (суспільство гладких клітин, нанесену на попередньо забарвлене нейтральним червоним предметне скло) під мікроскопом. Якщо в препараті багато спонтанно дегранульованих опасистих клітин, то опасисті клітини цього щура використовувати в досвіді не можна.
Оцінка тесту проводиться, як у попередньому тесті (Шеллі) за відсотком змінених опасистих клітин, але підраховується більша кількість клітин (50-100). Позитивним вважається тест більше 10%, за відсутності деструкції у контролю (0-3%).
На противагу попередньому існуєтест гальмування прямої дегрануляції опасистих клітин.
Цей тест ставиться з опасистими клітинами щура, попередньо сенсибілізованими. У реакції беруть участь сенсибілізовані опасисті клітини перитонеальної рідини щурів, досліджувана сироватка та алерген.
Суспензію сенсибілізованих опасистих клітин наносять на заздалегідь забарвлене нейтральним червоним предметне скло, додають краплю (0,05 мл) специфічного алергену. Виходить прямий тест дегрануляції опасистих клітин. Реакцію читають через 10-15 хв стояння у термостаті. Підраховують відсоток дегранульованих клітин. Далі беруть серії предметного скла, на кожне з яких наносять одне з розведень досліджуваної.сироватки, краплю алергену та краплю сенсибілізованих опасистих клітин щура. Підраховують відсоток дегранульованих клітин. Результати порівнюють із попередніми даними (прямого тесту). За титр приймають розведення сироватки хворого, здатне гальмувати дегрануляцію опасистих клітин попередньо сенсибілізованої тварини.