Випробувана сироватка крові у розведенні 1 5
Кров для дослідження беруть стерильно в кількості 8-10 мл з ліктьової вени натщесерце. під час менструацій, у вагітних в останні 2 тижні перед пологами та у породіль у перші 10 днів після пологів, у новонароджених у перші 10 днів життя. Практично не придатні для дослідження гемолізовані сироватки та сироватки хворих на жовтяницю.
Взята кров відразу ж прямує до лабораторії. Якщо це неможливо, вона зберігається у холодильнику при температурі 4°С не більше 48 годин.
Для знищення природного комплементу випробувану сироватку інактивують шляхом нагрівання на водяній бані за температури 56-58°С протягом 30 хвилин.
Комплемент - комплексне з'єднання в основному білкових фракцій, що сприяє лізису сенсибілізованого клітинного антигену (гемолізу, бактеріолізу і т.д.). Його виявляють у свіжій сироватці крові, лімфі та тканинних рідинах людини та тварин. У нормальній спинномозковій рідині комплементу немає.
При вживанні гемолізину до баранячих еритроцитів найбільшою активністю до еритроцитів барана має комплемент морської свинки. Комплемент людини значно менш активний і для постановки реакції не використовується, а інактивується. У РЗК як комплемент застосовують сироватку крові морської свинки. Комплемент використовують свіжим, консервованим (до свіжої сироватці додають 4% сухої борної кислоти та 5% натрію сульфату), ліофільно висушеним (у день постановки реакції його розчиняють у 1 мл сухого комплементу додають 1 млізотонічного розчину натрію хлориду).
Безпосередньо перед постановкою реакції проводять титрування комплементу, тобто визначають мінімальну кількість комплементу, сприяє повному гемолізу доданої кількості сенсибілізованих баранячих еритроцитів.
Гемолітична система (еритроцити, барана, гемолітична сироватка)
Індикатором РСК, тобто показником результату дослідження, служить реакція гемолізу. У цій реакції у присутності комплементу беруть участь два компоненти: еритроцити барана та гемолітична сироватка.
У РЗК використовують еритроцити барана, які, порівняно з еритроцитами інших тварин, не такі тендітні і більш стійкі, не піддаються швидкому гемолізу при відмиванні та при зберіганні в ізотонічному розчині натрію хлориду.
Гемолітичну сироватку одержують шляхом імунізації кролика еритроцитами барана. Її інактивують протягом 30 хвилин за температури 56°С.
Результати РЗК оцінюють залежно від наявності або відсутності гемолізу в дослідних пробірках. Наявність гемолізу пояснюється тим, що через відсутність у випробуваній сироватці сифілітичних антитіл реакція антиген-антитіло не відбувається, і весь комплемент йде на реакцію баранячі еритроцити-гемолізин. У той час як при наявності специфічних антитіл комплемент повністю йде на реакцію антиген-антитіло, що призводить до затримки гемолізу.
Максимальна позитивність реакції Вассермана позначається 4+ (різко позитивна реакція) і відповідає повній затримці гемолізу, 3+ (позитивна реакція) - відповідає значній затримці гемолізу, 2+ (слабкопозитивна реакція) - частковій утриманні гемолізу, 1+ (сумнівна реакція) - незначна гемолізу. Негативна реакція Вассермана характеризується повнимгемолізом у всіх пробірках досвіду.
Якісна РСК дає лише деяке уявлення про кількість реагінів та антитіл. Позначення 4+ залишається постійним незалежно від різної максимальної кількості.
Кількісне визначення реагінів та антитіл має значення при оцінці результатів протисифілітичного лікування. Кількісний метод постановки РСК надає допомогу при диференціальній діагностиці свіжого та рецидивного вторинного сифілісу, раннього та пізнього прихованого сифілісу, при виявленні неспецифічних хибнопозитивних реакцій, але цінність його в цих випадках не абсолютна. Зазвичай при свіжому вторинному сифілісі РЗК буває у високому, титрі, а при рецидивному вторинному сифілісі - у низькому. Однак у деяких випадках спостерігають і зворотну залежність. Низькі титри неспецифічних хибнопозитивних реакцій відрізняють їхню відмінність від специфічних реакцій. Але це не є правилом, в окремих випадках відзначається протилежне явище, відмічено дуже високі – 1:320 та навіть 1:5120 – титри неспецифічних серологічних реакцій при деяких захворюваннях несифілітичної етіології.
Кількісна методика постановки РСК полягає у використанні зменшення кількості випробуваної сироватки, а в іншому методика реакції залишається звичайною. Випробовувану сироватку розводять ізотонічним розчином натрію хлориду в наступних пропорціях: 1:5, 1:10, 1:20, 1:40, 1:80, 1:160, 1:320, а при необхідності і далі. Титром реагінів досліджуваної сироватки крові є останнє розведення, у якому спостерігається затримка гемолізу.
Таблиця 1. Врахування результатів реакції Вассермана