Визначення синильної кислоти
Визначення синильної кислоти
Якісне визначення. Проба з бензидиновим та пікратним папірцями. Досліджуваний матеріал (вміст шлунка або кормова речовина), попередньо добре розтертий у ступці, в кількості 10-15 г поміщають у конічну колбочку і злегка підкислюють 1% розчином соляної кислоти. Колбочку щільно закривають пробкою, до якої прикріплюють два індикаторні папірці на синильну кислоту — бензидинову та пікратну. Смужки папірців прикріплюють так, щоб вони не торкалися випробуваної речовини. Колбочку поміщають у термостат за нормальної температури 30—35 °С. За наявності синильної кислоти бензидиновий папірець синіє, а пікратна набуває червонувато-жовтогарячого забарвлення. Якщо папірці не змінюють свого кольору протягом 48 год, можна вважати, що синильної кислоти в досліджуваному матеріалі не міститься.
Проба з кратним папірцем може частково служити для грубого кількісного визначення синильної кислоти. В останньому випадку вона ставиться дещо іншим чином. Подрібнений матеріал поміщають у колбочку і, не підкислюючи його, змочують водою до консистенції напіврідкої кашки. Колбочку закривають пробкою з прикріпленої до неї смужкою пикратного папірця і ставлять у термостат при температурі 35-38 ° С на 4 год. рожева до середнього ступеня червоного - сотим часткам відсотка; інтенсивно-червона до темно-червоно-бурого кольору – десятим часткам відсотка.
Приготування бензидинового папірця: смужки фільтрувального паперу просочують 3%-ним розчином ацетату міді та висушують їх; перед вживанням їх змочують 20%-ним розчином оцтовокислого бензидину.
Пікратний папірець готуєтьсятаким чином: фільтрувальний папір просочують 1%-ним розчином пікринової кислоти, висушують, потім змочують 10%-ним розчином вуглекислого натрію; знову висушують і нарізують вузькими смужками. Папірець має лимонно-жовте забарвлення.
Для грубого кількісного визначення синильної кислоти в досліджуваному матеріалі можна застосувати пробу з гваяковим папірцем. Невелика кількість (10-15 г) досліджуваного матеріалу поміщають у конічну колбочку, змочують його дистильованою водою і підкислюють 5-6 мл 5% розчину виннокам'яної кислоти. Колбу закривають корковою пробкою з прикріпленою до неї смужкою паперу, просоченою розчином смоли гваякової. Такі папірці готують заздалегідь, просочуючи їх розчином наступного складу: 0,1 г гваякової смоли розчиняють у 50 мл 95-градусного етилового спирту, змішують цей розчин з 15 мл водного розчину сірчанокислої міді (1 : 1000) і цим змішаним розчином просочують.
За наявності синильної кислоти у взятій навішуванні досліджуваного матеріалу в кількості 0,05 мг гваякова папірець відразу ж інтенсивно синіє, при вмісті ж синильної кислоти в кількості 0,001 мг посиніння настає через 1-2 хв. Якщо протягом деякого часу папірець не змінює забарвлення, можна вважати, що синильна кислота та її солі у досліджуваному кормі відсутні.
Поява синього або синьо-зеленого фарбування може бути обумовлена наявністю синильної кислоти, ціанідами, окислюючими речовинами та аміаком. Тому справжня реакція має безумовне значення лише за негативному результаті, що свідчить про відсутність синильної кислоти. У разі позитивної якісної реакції при тій чи іншій із вищевказаних проб для уточнення питання про вміст синильної кислоти необхідно вдатися доподальшого дослідження корму більш специфічними методами.
Реакція утворення берлінської блакиті. Спочатку необхідно виділити синильну кислоту з досліджуваної речовини. Це може бути зроблено перегонкою з водяною парою. 100-150 г подрібненого корму змішують з водою до консистенції рідкої кашки, підкислюють виннокам'яною кислотою і переносять у круглодонну колбу. Потім колбу приєднують до холодильника, форштос якого опущений колбу з 5 мл води. Окремо нагрівають до кипіння пароутворювач і коли весь прилад зібраний, приєднують пароутворювач і починають підігрівати баню під колбою.
Перегонку слід проводити повільно, регулюючи її нагріванням пароутворювача. Спочатку від однієї проби отримують невелику кількість відгону, який випробовують на берлінську блакитність. До дистиляту додають розчин їдкого натру до одержання ясно вираженої лужної реакції, потім по одній краплі свіжоприготовлених розведених розчинів сірчанокислого закису заліза (FeS04) і хлорного заліза (FeCl3), ретельно збовтують і підкислюють розбавленою соляною кислотою (1: . Залежно кількості синильної кислоти з'являється синій осад чи фарбування — синє, синьо-зелене, зелене. При дуже малих кількостях синильної кислоти осад чи фарбування може виникнути через 24—48 год. Реакція ця специфічна. Чутливість реакцій 1: 5 000 000.
Для відкриття дуже малих кількостей синильної кислоти в досліджуваній речовині рекомендується вдатися до постановки мікро-реакції на синильну кислоту. Для відтворення такої реакції необхідне предметне скло з лункою та підібране до нього шліфоване покривне скло. У поглиблення предметного скла поміщають краплю перегону, а на нижню поверхню покривногоскла - краплю 10%-ного розчину азотнокислого срібла, злегка підфарбованого метиленовим синім. За наявності в перегоні синильної кислоти крапля рідини на покривному склі каламутніє від утвору та випадання нерозчинного ціаністого срібла. Під мікроскопом можна побачити дрібні кристалики ціаністого срібла у вигляді синіх голок та паличок.
Проба з багатосірчистим амонієм [(NH4)2S2]. У фарфорову чашку поміщають 5-10 мл отриманого дистиляту, додають кілька (5-7) крапель 5%-ного розчину багатосірчистого амонію, 3-5 крапель 10%-ного розчину їдкого натру і обережно випарюють на водяній бані насухо. Отриманий залишок після охолодження підкислюють 10%-ним розчином азотної кислоти і потім додають 1 краплю 20%-ного розчину хлориду окисного заліза (FeCl3). За наявності синильної кислоти розчин набуває криваво-червоне забарвлення від роданіду заліза, що утворюється [Fe(CNS)3l.
Проба по Колипгофу. У колбочку поміщають близько 10 мл досліджуваного дистиляту, додають 20 мг сульфату закису заліза і 10 крапель розчину карбонату і гідрокарбонату натрію (8 г NaCOa-10Н3О і 8 г NaHCO-, па 100 мл дистильованої води), добре взбал півгодини, потім підкислюють сірчаною кислотою. За наявності дистиляту синильної кислоти (до 5 мг на 1 л) відразу після підкислення з'являється синє фарбування.
Аргентометричний метод (метод Лібіха). Отриманий дистилят титрують 0,1 в. розчином азотнокислого срібла у присутності кількох крапель йодистого калію (10%) до появи каламутної каламуті. При додаванні по краплях розчину азотнокислого срібла до лужного розчину HCN утворюється на месте1 падіння крапель білий осад ціаністого срібла, що відразу зникає при збовтуванні рідини, оскільки AgCN розчиняється в надлишку ціаністогокалію з утворенням срібно-синьородистого калію: AgCN + KCN Ag (CN)aK.
Як тільки весь ціан перетворюється на срібно-синьородистий калій, наступна за цим крапля AgN03 дає каламутну: Ag(CN) 2K h AgN03 -> IN03 + 2AgCN. Отже, одній молекулі AgN03 відповідають дві частинки CN.
Обчислення відсотка вмісту HCN провадиться за формулою:
Якщо вихідна навішування досліджуваного матеріалу не дорівнює 100 г, то отриману за формулою кількість HCN потрібно розділити на кількість навішування і помножити на 100 г.
Оскільки в досліджуваних кормах HCN зазвичай є у дуже невеликих кількостях, титрування дистиляту краще проводити з мікробюретки.
Наважку досліджуваного матеріалу грубо подрібнюють і поміщають у плоскодонну колбу на 500 мл. У неї додають 3 мл сірчаного ефіру для поліпшення в подальшому вилучення синильної кислоти, закривають каучуковою пробкою і залишають на 6 год. початку і перед відгоном. За цей час відбувається гідроліз глікозидів у досліджуваному матеріалі.
Потім синильну кислоту відганяють звичайним шляхом (див. вище) з водяною парою, що отримується з пароутворювача. Дистилят, що містить синильну кислоту, збирають у приймальну колбу, в яку перед початком відгону наливають 20 мл 0,01 н. розчину нітрату ртуті (залежно від очікуваної кількості синильної кислоти кількість розчину нітрату ртуті має бути збільшено або зменшено) та 10 мл 8 н. розчину азотної кислоти (на кожні 100 мл відгону). Коли буде перегнано 150 мл рідини, відгін закінчують, обмивають кінець форштосу декількома мл дистильованої води, охолоджують відгін (якщо це необхідно) і проводять титрування.
До відгону вприймачі додають 2 мл індикатора (насичений розчин залізо-аміачних галунів) і титрують безпосередньо в ньому 0,01 н. розчином роданистого амонію, помішуючи до появи рожевого фарбування, що не зникає. Перед титруванням встановлюють співвідношення між розчином роданіду ртуті і роданіду амонію.
При розрахунку вмісту синильної кислоти у досліджуваному кормі (матеріалі) виходять із того, що 1 мл 0,01 н. розчину роданіду ртуті відповідає 0,00027 г (0,27 мг) синильної кислоти
Вміст синильної кислоти (мг%) обчислюють за такою формулою:
Визначення синильної кислоти в сорго проводиться наступним чином. З різних місць поля беруть по кілька пробних рослин, які зрізають біля самої основи. Після цього гострим ножем або краще бритвою з нижньої частини стебла вирізують тонкі поперечні зрізи, які обробляють розчином йоду та переглядають під мікроскопом, лупою або просто неозброєним оком (на білому тлі). У разі присутності великої кількості крохмалю в стеблах на зрізах останніх виходить суцільне синє або чорне фарбування (при перегляді неозброєним оком просто темне). Такі рослини зазвичай містять не менше 0,1% HCN (на суху вагу) і є небезпечними для згодовування тварин. Якщо крохмальних зерен у стеблах мало, то синє або чорне фарбування з'являється не лише на всьому зрізі, а лише навколо судинно-волокнистих пучків. У цьому випадку сорго містить менше 0,1% HCN (на суху вагу) і безпечно для згодовування тварин у ранкові та вечірні години. Якщо ж зрізи стебел від йоду зовсім не фарбуватимуться в синій колір, то сорго не містить HCN, і його можна згодовувати худобі будь-коли без будь-яких побоювань.